Wszystkie procedury związane z pobraniem próbek zostały wykonane zgodnie z wytycznymi instytutu IRB.
UWAGA: Protokół opisuje symetryczną procedurę dwupółkulowego cięcia mózgu w celu pośmiertnej oceny mózgu, sfinalizowaną dla badań neuropatologicznych na ludziach. Szczegółowe opisy aparatów, przyrządów, materiałów i materiałów niezbędnych do cięcia ludzkiego mózgu nie będą zawierane. Materiały i materiały do sekcji mózgu są wybierane według uznania pojedynczego badacza i opierają się na narzędziach autopsyjnych dozwolonych lub zatwierdzonych w każdej instytucji badawczej. Minimalny zestaw narzędzi i materiałów wymaganych do tej procedury jest opisany w Tabeli Materiałów/Wyposażenia. Szczegółowe procedury cięcia i środki ostrożności w przypadku podejrzenia zakaźnych chorób mózgu, takich jak CJD u ludzi, wykraczają poza cele tego manuskryptu i są dostępne w innych źródłach.
1. Symetryczne dwupółkulowe cięcie mózgu
Notatka: Upewnij się, że mózg otrzymał niezbędne utrwalenie tkanek (przy użyciu, na przykład, neutralnie buforowanej 10% formaliny) przez okres dwóch do trzech tygodni, w zależności od warunków okołokątnych, metabolicznych (, tj. pH i zachowania tkanek ( tj. temperatury). Jednak w badaniach korelacji obrazowo-patologicznej sugerowano dłuższy okres fiksacji (>5,4 tygodnia).
- Umieść mózg na płaskiej powierzchni przodem do badacza, z biegunami czołowymi skierowanymi w przeciwnym kierunku w stosunku do badacza.
- Umieść mózg tak, aby umożliwić pełną i wyraźną wizualizację wszystkich zakrętów korowych i bruzd całego mózgu (Rysunek 1a).
- Po pierwsze, poszukaj anomalii opon mózgowych, makroskopowych asymetrii półkulowych (możliwych wskaźników ogniskowych, płatowych lub uogólnionych zjawisk atrofii półkulowej), makroskopowych zmian w tkankach (tj. guzów lub przepukliny), wad wrodzonych, nieprawidłowości naczyń krwionośnych i wszelkich innych możliwych nieprawidłowości lub nietypowych prezentacji powierzchni mózgu.
UWAGA: Szczegółowe opisy tego, jak ocenić ludzki mózg, można znaleźć w dostępnych na rynku podręcznikach neuropatologii i podręcznikach autopsji.
2. Sekwencja protokołu
- Bieguny czołowe należy odsunąć od badacza, z powierzchownymi aspektami półkul (kresomózgowie) skierowanymi w stronę badacza. Zrób tyle zdjęć cyfrowych, ile jest konieczne w każdym konkretnym przypadku, aby udokumentować możliwe makroanomalie i uwzględnić możliwe względy kliniczno-neuroanatomiczne i po cięciu. Poproś asystenta badawczego o wykonanie zdjęć cyfrowych prostopadle do mózgu, aby uchwycić całą powierzchnię kory mózgowej (Rysunek 1a - c).
- Oznacz zakręty korowe przed i postcentralnymi za pomocą tuszu lub kolorowych igieł przed przecięciem mózgu (Ryc. 1b).
UWAGA: Ta procedura ułatwia szybsze rozpoznanie pierwotnej kory motorycznej i somatosensorycznej po przecięciu.
- Obróć mózg o 180 stopni, trzymając go skierowanego w tym samym kierunku (, tj. bieguny czołowe są skierowane od badacza). Dokładnie sprawdź podstawę mózgu. Zwróć szczególną uwagę na stan układów naczyniowo-mózgowych (i.e. tętnic podstawnych i kręgowych oraz koła Willisa) oraz nerwów czaszkowych na ich poziomie wyjścia/wejścia do pnia mózgu. Ze szczególną ostrożnością należy obchodzić się z opuszkami i drogami węchowymi, aby uniknąć uszkodzenia tkanek z powodu ich ekstremalnej kruchości.
- Zrób tyle zdjęć cyfrowych, ile jest konieczne w każdym konkretnym przypadku, aby udokumentować możliwe makroanomalie i uwzględnić możliwe względy kliniczno-neuroanatomiczne i po cięciu. Poproś asystenta naukowego o wykonanie zdjęć cyfrowych prostopadle do mózgu, aby uchwycić całą powierzchnię kory mózgowej i pnia mózgu.
- Zwrócony twarzą do podstawy mózgu i za pomocą skalpela przetnij pień mózgu poprzecznie na poziomie górnej części mostu (jak najbliżej podstawy mózgu). Dokładnie sprawdź SN (i., pod kątem bladości) i innych sąsiednich konstrukcji. Zwróć uwagę, być może za pomocą urządzenia do nagrywania dźwięku, na każdy nietypowy wygląd mózgu w porównaniu z normalnym mózgiem.
- Ponownie obróć mózg o 180 stopni i za pomocą ostrego noża oddziel dwie półkule, przecinając ciało modzelowate centralnie przez przyśrodkową szczelinę podłużną i podążając w kierunku czołowo-potylicznym. Sprawdź każdą stronę każdej półkuli pod kątem możliwych anomalii (e.g. powiększenia komór, wady rozwojowe, zmiękczenie tkanek, guzy, itp.). Zobacz Rysunek 2a.
- Zrób tyle zdjęć cyfrowych, ile jest to konieczne w każdym konkretnym przypadku, aby udokumentować możliwe makroanomalie i uwzględnić możliwe względy kliniczno-neuroanatomiczne i po cięciu. Poproś asystenta naukowego o wykonanie zdjęć cyfrowych prostopadle do mózgu, aby uchwycić całą powierzchnię kory mózgowej. Zwróć uwagę na każdą nietypową cechę mózgu w porównaniu z normalnym mózgiem.
- Ułóż dwie półkule płasko, leżąc na ich środkowych aspektach, z płatami czołowymi skierowanymi od badacza, jak pokazano na Rysunek 2b. Ułóż je tak, aby ich środki się stykały (również w przypadku wyraźnej asymetrii półkul).
- Za pomocą ostrego noża ręcznie przetnij obie półkule mózgowe, zaczynając od biegunów czołowych i przesuwając się w kierunku biegunów potylicznych na całej długości półkul. Uzyskaj dwie serie bloków tkanki mózgowej o grubości 1 cm (około 18 płyt na każdą półkulę).
- Umieść płyty mózgowe w anatomicznie zorganizowanej sekwencji (kierunek czołowo-potyliczny) na oddzielnej płaskiej powierzchni. Użyj białej powierzchni z wydrukowaną na niej linijką, aby uzyskać lepszy kontrast podczas fotografowania. Wyświetl dwie serie płyt mózgowych w anatomicznie symetryczny sposób (kierunek czołowo-potyliczny ), upewniając się, że ich powierzchnie czołowe są widoczne do bezpośredniego wglądu wzrokowego i fotografii cyfrowej (Rysunek 3a). Używaj powierzchni tnących z nadrukowanymi siatkami milimetrowymi po obu stronach, aby dokładniej zlokalizować struktury mózgu, rozmiary i możliwe nieprawidłowości.
- Zrób tyle zdjęć cyfrowych, ile jest konieczne w każdym konkretnym przypadku, aby udokumentować możliwe makroanomalie i uwzględnić możliwe względy kliniczno-neuroanatomiczne i po cięciu. Poproś asystenta naukowego o wykonanie zdjęć cyfrowych prostopadle do mózgu, aby uchwycić całą powierzchnię kory mózgowej. Rób notatki (prawdopodobnie za pomocą urządzenia do nagrywania dźwięku) dowolnego nietypowego aspektu mózgu w porównaniu z normalnym mózgiem.
- Za pomocą ostrego skalpela ręcznie wypreparuj mniejsze prostokątne bloki tkanki mózgowej dla każdego ustalonego obszaru mózgu. Postępuj zgodnie z proponowanym schematem zbierania regionów mózgowych opisanym w Tabeli 1.
- Umieść każdy blok tkanki w oddzielnie oznaczonych histokassadach.
UWAGA: Każdy blok tkanki mózgowej musi zostać przycięty tak, aby pasował, o ile to możliwe, do standardowej maksymalnej objętości histokassy (30 x 20 x 4 mm3).
- Oznacz histokassety za pomocą kodu deidentyfikującego dla każdego przypadku i używając określonych identyfikatorów neuroanatomicznych (nie używaj losowych liter lub cyfr dla różnych mózgów; raczej zawsze używaj tych samych regionalnych nazw anatomicznych lub odpowiadających im liczb, jak pokazano w Tabela 1). Twórz kody deidentyfikujące, na przykład generując losowe lub półlosowe liczby dla każdego przypadku (i., BRC 130, gdzie 5B pozostaje dla Mózgu, R pozostaje dla Zasobu, C pozostaje dla Centrum, a 130 to postępujący akcesor lub AD160001, gdzie AD oznacza "badanie choroby Alzheimera", 16 to rok, w którym przeprowadzono autopsję (2016), i 0001 numer egzemplarza postępowego akcesji).
UWAGA: Ten krok jest bardzo pomocny dla przyszłych badaczy. Zachowaj legendę i określ półkulę (L = lewa półkula, R = prawa półkula). Użyj dwóch różnych kolorów histokasset, ustalając określony kolor dla każdej półkuli.
- Zrób tyle zdjęć cyfrowych, ile jest konieczne w każdym konkretnym przypadku, aby udokumentować możliwe makroanomalie i uwzględnić możliwe względy kliniczno-neuroanatomiczne i po cięciu. Poproś asystenta naukowego o wykonanie zdjęć cyfrowych prostopadle do mózgu, aby uchwycić całą powierzchnię kory mózgowej. Zwróć uwagę na każdą niezwykłą cechę mózgu w porównaniu z normalnym mózgiem.
- Zrób cyfrowe zdjęcia (tyle, ile jest to konieczne lub pożądane) całego przeciętego mózgu i związanych z nim histokasset.
Tabela 1. Schemat cięcia dwupółkulowego. Poniższa tabela przedstawia pojedynczy obszar anatomiczny do wypreparowania zarówno w lewej, jak i prawej półkuli każdego mózgu. Dwupółkulowe symetryczne cięcie można wykonać na świeżych i stałych mózgach.
| Obszar neuroanatomiczny | Etykieta | Left Fixed | Prawy poprawiony | Pozostawione Mrożone | Prawy Mrożony |
| Opuszka węchowa | OB | | | | |
| Biegunowa kora czołowa | PFC | | | | |
| Środkowy zakręt czołowy | MFG | | | | |
| Zakręt oczodołowo-czołowy | OFG | | | | |
| Kora ciemieniowa płat dolny | PCLI | | | | |
| Kora skroniowa górna | STC | | | | |
| Środkowa kora skroniowa | MCC | | | | |
| Przednia kora obręczy | ACC | | | | |
| Tylna kora obręczy | PCC | | | | |
| Zakręt przedśrodkowy (Umieść szpilkę przed cięciem) | PrCRG | | | | |
| Zakręt zaśrodkowy (Umieść szpilkę przed cięciem) | PoCRG | | | | |
| Zakręt potyliczny (w tym obszar Broadmanna 17 i 18) | OC | | | | |
| Ciało migdałowate | AMY | | | | |
| Zwoje podstawy na poziomie spoidła przedniego z jądrem podstawnym Meynerta | BGMY | | | | |
| Plecha i podtalamus | TH-STH | | | | |
| Ciała sutkowe i podwzgórze | MAM+HYPO | | | | |
| Jądra podstawne forbrane | BF | | | | |
| Hipokamp przedni | AH | | | | |
| Tylny hipokamp (na poziomie kolankowatym bocznym), w tym kora śródwęchowa i dolna kora skroniowa | PH+EC+ITC | | | | |
| Kora mózgowa i jądro zębate | CRBDe | | | | |
| Śródmózgowie (w tym istota czarna) | MESSN | | | | |
| Most, w tym Locus coeruleus (LC) | PONS | | | | |
| Medula oblongata Medula including DMV | MObi | | | | |
| Medula spinalis | MSpi | | | | |
| Rdzeń kręgowy górny | SC | | | | |
| Dura Madre | DM | | | | |
