Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Tematy
- Używaj samców szczurów Sprague-Dawley (250-300 g w momencie przybycia).
- Szczury trzymane są w klatkach z solidnym dnem w pomieszczeniu kolonijnym o wilgotności 40-60% i temperaturze pokojowej (RT) 21 ± 1 °C.
- Zapewnij dostęp do wody i pożywienia w libitum.
- Trzymaj szczury w odwróconym cyklu ciemności/światła o godzinie 12:12 (światła włączone po 20 godzinach).
2. Chirurgia
- Na szczura przygotuj dwa kawałki chromowej ligatury jelitowej (5-0) o długości około 6 cm i umieść je w sterylnej soli fizjologicznej, aby uniknąć wysuszenia i sztywnienia i łamliwości.
- Znieczulić zwierzę pentobarbitalem (60 mg/kg, dootrzewnowo [i.p.]) i leczyć atropiną (0,1 mg/kg, i.p.). Monitoruj poziom znieczulenia, wysuwając jedną nogę i ściskając pajęczynę skóry między palcami u stóp, aby upewnić się, że wywierany jest odpowiedni nacisk. Upewnij się, że zwierzę nie zgina kończyny. W razie potrzeby podać dodatkowy pentobarbital.
- Ogolić głowę szczura tak, aby można było wykonać nacięcie skóry głowy w linii środkowej o długości około 25 mm w równych odległościach do przodu i z tyłu do środka oczu.
- Zamocuj głowę szczura w stereotaktycznej ramie lub w inny sposób unieruchomij głowę szczura. Umieść szczura na podgrzewanej podkładce, aby utrzymać temperaturę ciała.
- Nałóż maść okulistyczną na oba oczy, aby zapobiec wysuszeniu uszkodzeń.
- Wyszoruj ogoloną głowę alkoholem, a następnie betadyną.
- Wykonaj nacięcie skóry głowy w linii środkowej, odsłaniając czaszkę i kość nosową.
- Użyj mikroskopu operacyjnego, aby wykonać kroki od 2.9 do 2.16.
- Wytnij krawędź oczodołu wolnego, utworzoną przez kości szczękowe, czołowe, łzowe i jarzmowe, za pomocą wacika z bawełnianą końcówką i pary kleszczy Dumonta. Użyj wacika, aby wchłonąć krew z ewentualnego krwawienia.
- Aby uzyskać dostęp do nerwu podoczodołowego (IoN), delikatnie odchyl zawartość oczodołu za pomocą precyzyjnego bawełnianego wacika, uważając, aby nie rozciągnąć nadmiernie przedniego nerwu sitowego, który przechodzi powyżej IoN. Odetnij IoN od otaczającej tkanki łącznej za pomocą precyzyjnego wacika z bawełnianą końcówką i pary kleszczy Dumonta za pomocą ruchu rozprowadzającego. Użyj wacika, aby wchłonąć krew z ewentualnego krwawienia.
- Aby wykonać podwiązanie, popchnij jeden koniec pojedynczego kawałka chromowego jelita w dół wzdłuż kości czołowej, przyśrodkowo do IoN i przesuń się o kilka milimetrów równolegle i niżej do IoN. Więzadło jest teraz utrzymywane na miejscu między IoN a kością czołową.
- Wsuń końcówkę kleszczyków Dumonta pod kątem 45 stopni pod IoN, aby umieścić ją w bliskiej odległości od ligatury. Delikatnie cofnij IoN na boki, aby odsłonić ligaturę i końcówkę kleszczy. Chwyć ligaturę kleszczami i wyciągnij kleszcze bocznie spod IoN.
- Wyciągnij ligaturę z jamy oczodołu, aż oba końce ligatury znajdą się mniej więcej w równej odległości od IoN.
- Wykonaj "węzeł poślizgowy" z dwóch końców ligatury, aby umożliwić doskonałą kontrolę nad stopniem zwężenia i przesuń węzeł w kierunku IoN. Przesuń węzeł dalej, aby zwęzić IoN tak, aby średnica nerwu zmniejszyła się o zauważalną ilość. Wykonaj normalny węzeł na węźle poślizgowym, tak aby stopień zwężenia pozostał stały (tj. .,, aby zapobiec ślizganiu się węzła szczelinowego).
- Odetnij ligatury, aby pozostawić około 2 mm wolnych końców węzła.
- Powtórzyć tę samą procedurę (kroki od 2.11 do 2.15), aby wykonać drugie podwiązanie w odległości 2 mm od pierwszego.
- W przypadku operacji pozorowanej wykonaj kroki od 2.2 do 2.10.
- Zamknij nacięcie skóry głowy za pomocą szwów poliestrowych (4-0) i pozwól szczurowi dojść do siebie na podgrzewanej podkładce. Nie pozostawiaj zwierzęcia bez opieki, dopóki nie odzyska wystarczającej przytomności, aby utrzymać pozycję leżącą na mostku i nie zwracaj zwierzęcia do towarzystwa innych zwierząt, dopóki w pełni nie wyzdrowieje.
- Aby uniknąć wyprzedzającego wpływu środków przeciwbólowych na rozwój bólu neuropatycznego, nie należy stosować środka przeciwbólowego w przypadku bólu pooperacyjnego.