Generowanie szczurzego modelu transpozycji nerwiaka piszczelowego

Streszczenie

Źródło: Brakkee, E. M., i wsp. Chirurgia i testy behawioralne w modelu transpozycji nerwiaka piszczelowego u szczurów. J. Vis. Exp. (2023).

Ten film przedstawia procedurę generowania modelu transpozycji nerwiaka piszczelowego szczura (TNT). Po odsłonięciu nerwu piszczelowego w tylnej nodze znieczulonego szczura, przeciąć nerw. Następnie utwórz tunel podskórny, przeciągnij przecięty nerw przez tunel i zszyj go na miejscu. W przypadku braku celu do reinerwacji, zdezorganizowane wyrostki aksonalne z odciętego nerwu tworzą nerwiaka, który wywołuje ból neuropatyczny poprzez wzbudzenie nocyceptorów.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Znieczulenie i przygotowanie

UWAGA: To badanie przeprowadzono na 15 samcach szczurów Sprague Dawley, które miały 12 tygodni.

1. Znieczulić zwierzęta przez indukcję 5% izofluranem i utrzymać znieczulenie 2%-3% izofluranem.
   UWAGA: Leczenie podtrzymujące 2% izofluranem zwykle skutkuje wystarczającym znieczuleniem i spontanicznym oddechem, bez konieczności intubacji tchawicy lub wentylacji mechanicznej.
2. Sprawdź odruchy zwierząt, szczypiąc stopę pęsetą. Zanim przejdziesz dalej, upewnij się, że zwierzę nie reaguje. Ogol pole operacyjne od kolana do kostki golarką elektryczną i nałóż maść okulistyczną na oczy, aby zapobiec wysuszeniu. Wstrzyknąć 0,5 mg/kg przeciwbólowego karprofenu podskórnie w okolicę brzucha.
3. Połóż znieczulonego szczura na plecach z głową w lewo lub w prawo, a nogą, która ma być operowana, w pobliżu chirurga. Wyegzorotuj dolną tylną kończynę tak, aby kostka przyśrodkowa była skierowana do góry. Umieść szczura pod stereoskopowym mikroskopem chirurgicznym z 6-krotnym powiększeniem.
4. Zdezynfekuj ogolony obszar trzema naprzemiennymi rundami peelingu na bazie jodu, a następnie alkoholem. Umieść sterylny arkusz z otworem operacyjnym na nodze, tak aby widoczne było tylko pole operacyjne. Upewnij się, że te sterylne warunki są zachowane podczas operacji.

2. Chirurgia

1. Umieść mały bawełniany wacik poniżej kostki, aby utrzymać pole operacyjne w poziomie. Zlokalizuj kolano i delikatnie wykonaj podłużne nacięcie o długości 1-2 cm za pomocą skalpela po przyśrodkowej stronie tylnej łapy od połowy łydki do kostki. W razie potrzeby otwórz skórę i podskórne dalej za pomocą mikronożyczek, aż warstwy mięśni będą widoczne.
2. Zidentyfikuj powierzchowny pęczek nerwowo-naczyniowy jako dwa lub trzy białe i grubszą fioletowo-czerwoną linię, czasami z niewielkimi odgałęzieniami, które mogą swobodnie poruszać się po warstwach mięśni. Za pomocą elektrokoagulacji (patrz Tabela Materiałów), skrzepnij wszelkie aktywne krwawienia lub sączenie w polu operacyjnym. Uważaj, aby nie uszkodzić pęczka nerwowo-naczyniowego.
3. Tępo rozetnij powięź między mięśniami brzuchatymi łydki, tuż za powierzchownym pęczkiem nerwowo-naczyniowym 2,2. Pomiędzy powięzią mięśni znajduje się nerw piszczelowy. Nerw piszczelowy jest około trzy razy większy niż nerw powierzchowny w pęczku nerwowo-naczyniowym. Użyj kości piszczelowej jako dodatkowego punktu orientacyjnego (nerw piszczelowy leży tuż za kością piszczelową).
4. Zidentyfikuj nerw piszczelowy i jego rozwidlenie.
   UWAGA: Rozwidlenie jest zwykle widoczne z jaśniejszą linią biegnącą wzdłuż nerwu.
5. Ostrożnie wypreparuj nerw piszczelowy z otaczających go wiązek naczyniowych. Wykonaj preparację, tępo przesuwając nerw piszczelowy i przecinając odsłoniętą tkankę, która wykazuje pewne rozciągnięcie podczas poruszania nerwu piszczelowego.
   UWAGA: Jeśli nerw piszczelowy jest połączony z krzyżującymi się żyłami po rozwarstwieniu, żyły te mogą ulec koagulacji w celu odsłonięcia całego nerwu piszczelowego. Uważaj, aby nie skoagulować samej wiązki piszczelowej.
6. Odsłoń nerw piszczelowy proksymalnie, aż zniknie pod krzyżującą się warstwą mięśni. W tym momencie nerw piszczelowy wydaje się zanurzać głębiej w tylnej łapie w kierunku kolana. Odsłoń nerw piszczelowy dystalnie aż do kostki.
   UWAGA: Gdy nerw piszczelowy jest odsłonięty bardziej dystalnie, ilość krzyżujących się włókien kolagenowych (tj. włókien prostopadłych do kierunku włókien nerwowych) wzrośnie. Te włókna kolagenowe muszą zostać przecięte, aby zapewnić wystarczającą długość do transpozycji nerwu piszczelowego.
   1. Kiedy cały nerw piszczelowy jest odsłonięty, umieść warstwy mięśni z powrotem, aby uniknąć odwodnienia nerwu. Jeśli nerw odwadnia się (tj. staje się bardziej sztywny, matowy i pomarszczony), a pokrycie warstwami mięśni nie wystarcza, dodaj krople soli fizjologicznej, aby go nawodnić.
7. Za pomocą tępego narzędzia do mikrochirurgii, najlepiej uchwytu do mikroigieł, wypreparuj skórę piszczelową z podskórnej warstwy mięśniowej w celu wykonania podskórnego tunelu. Aby to zrobić, przytrzymaj skórę do góry i wepchnij tępą końcówkę w tkankę, równolegle do skóry. Upewnij się, że koniec tunelu znajduje się bliżej lub bardziej bocznie, aby zapewnić łatwy dostęp do obszaru do badania nerwiaka.
8. Zwiększyć stężenie izofluranu do 5%. Wróć do nerwu piszczelowego i odsłoń go (tj. wróć do miejsca opisanego w kroku 2.6). Przetnij nerw piszczelowy (tj. obie gałęzie podeszwowe) na najbardziej dystalnym poziomie w pobliżu kostki. Zmniejsz izofluran do normalnego poziomu 2%-3%.
9. Zmień powiększenie mikroskopu na 10x lub 16x. Zidentyfikuj epineurium nerwu piszczelowego proksymalnie do cięcia wykonanego w kroku 2.8 lub, w przypadku bardziej proksymalnego rozwidlenia nerwu piszczelowego, zidentyfikuj epineurium zarówno przyśrodkowej, jak i bocznej gałęzi podeszwowej proksymalnie do cięcia w kroku 2.8.
   UWAGA: Epineurium jest bielsze i mocniejsze w porównaniu z włóknami nerwowymi w środku, które są bardziej żółte i miękkie.
10. Ostrożnie umieść 8-0 nylonowy szew (patrz Tabela materiałów) przez epineurium bliższego końca nerwu, ostrożnie przytrzymując epineurium pęsetą i umieszczając igłę między nerwem a epineurium z ugryzieniem około 0,5 mm. Przeciągnij szew i ugryź igłą podskórnie na końcu tunelu podskórnego wykonanego w kroku 2.7. Zrób węzeł, który przetransponuje nerw bocznie do tunelu podskórnego.
    UWAGA: Jeśli obie gałęzie podeszwowe mają wspólne epineurium, jeden szew powinien wystarczyć. Jeśli obie gałęzie podeszwowe mają własne epineurium, każde epineurium powinno być utrwalone indywidualnie. Unikaj umieszczania szwu przez skórę; Naprawiaj go tylko podskórnie.
11. Umieść grubszy szew o ciemnym kolorze (najlepiej niebieski lub czarny szew 4-0) równo z utrwalonym końcem nerwu, nie wnikając w skórę. Upewnij się, że szew jest widoczny z zewnątrz skóry. Sprawdź, czy nerw pozostaje na swoim miejscu po poruszeniu łapą i mięśniami. Odetnij końce szwu nieco dłuższym końcem szwu na 4-0 niż na 8-0 szew.
12. Zmień powiększenie mikroskopu z powrotem na 6x. Zamknij skórę szwami śródnaskórkowymi za pomocą 8-0 zszyj i delikatnie oczyść skórę 0,9% NaCl za pomocą bawełnianego wacika.

3. Leczenie pooperacyjne

1. Umieść szczura w czystej klatce pod ręcznikiem papierowym w wygodnej pozycji. Jeśli w pomieszczeniu jest zimno, umieść poduszkę grzewczą pod częścią klatki (tylko pod częścią klatki, ponieważ zwierzę powinno być w stanie uciec przed ciepłem w razie potrzeby). Zapewnij łatwy dostęp do jedzenia i wody.
2. Nie pozostawiaj szczura po operacji bez opieki, dopóki nie odzyska wystarczającej przytomności, aby utrzymać leżący mostek. Szczur może wrócić do towarzystwa innych zwierząt, gdy w pełni wyzdrowieje ze znieczulenia po operacji. Dzieje się tak zwykle po 1 godzinie, gdy szczur wykazuje normalny wzorzec chodzenia i zachowanie.
3. Po 24 godzinach i 48 godzinach od zabiegu należy podać dawkę 0,5 mg/kg karprofenu podskórnie (okolica brzucha) w celu leczenia bólu pooperacyjnego.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Carprofen	Local Veterinary Pharmacy	n/a	Cotton swabs	Nobamed	974255		Electrocautery
Narzędzia naukowe	18010-00
Etanol 70%	Interchema BV	400406	Johnson & Johnson	1854G	WAŻNE: kolor powinien być niebieski lub czarny
Ethilon 8.0	Johnson & Johnson	BV130-5
Isoflo, isoflurane Zoetis	Produkty weterynaryjne Dechra	B506
Siatki dolne klatki	StoeltingCo	57816 i 57824
Mikro kleszczyki	Fine Science Tools	11251-35
Mikro uchwyt na igłę	Fine Science Tools	12076-12
Nożyczki do mikronożyczek	Narzędzia naukowe	15019-10
Mikro pęseta	Narzędzia do nauki pięknej	11254-20
NaCl 0,9%	Trademed	H7 1000-FRE
Uchwyt na igłę
Maść okulistyczna	Lokalny weterynarz Pharmacy	n/a	Lokalna apteka weterynaryjna produkuje maść
Scalpel	Fine Science Tools	10003-12
Nożyczki	Narzędzia naukowe	14001-12
Stereoskopowy mikroskop chirurgiczny	Leica	A60 F
sterylny arkusz z otworem	Evercare OneMed	1555-01
Ostrze chirurgiczne nr.15	Fine Science Tools	10015-00
Pęseta	Fine Science Tools	11617-12

< td style='styl obramowania w lewo:brak;styl górnej krawędzi:brak;'>Narzędzia do nauki pięknej< td style='styl obramowania-w lewo:brak;styl-górnej krawędzi:brak;'>12004-16 okulistyczną