Test fagocytozy żywych komórek komórek podobnych do mikrogleju przy użyciu ludzkich synaptosomów

Streszczenie

Źródło: Funes, S., et. al., Ludzkie komórki podobne do mikrogleju: różnicowanie z indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych i test fagocytozy żywych komórek in vitro przy użyciu ludzkich synaptosomów. J. Vis. Exp. (2022)

Ten film przedstawia test do badania zdolności fagocytarnej komórek podobnych do mikrogleju przy użyciu wrażliwych na pH synaptosomów znakowanych barwnikiem fluorescencyjnym.

Protokół

1. Test fagocytozy żywej komórki
   1. Płytka 20-30 × 10⁴ PMP na 96-dołkowe płytki w 100 μL iMG complete medium i postępuj zgodnie z procesem różnicowania przez 10 dni.
   2. W dniu testu należy przygotować roztwór do barwienia jądrowego, dodając 1 kroplę barwnika jądrowego dla żywych komórek do 2 ml iMG podłoża podstawowego.
   3. Usunąć....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Materiały do hodowli komórkowych
Primaria 96-well Clear Flat Bottom Microplate	Corning	353872
CellAdhere Laminin-521	STEMCELL Technologia	77004	Odnosi się do lamininy 521
Składniki nośnika bazowego iMG
Advanced DMEM/F12	Gibco	12634010	Końcowe stężenie 1x
GlutaMAX	Gibco	35050061	Końcowe stężenie 1x
N2 supplement, 100x	Gibco	17502-048	Końcowe stężenie 1x
Penicylina-Streptomycyna (10 000 U/ml)	Gibco	15140122	Końcowe stężenie 100 U/mL
Components of iMG complete media
55 mM 2-merkaptoetanol	Gibco	21985023	Stężenie końcowe 55 μM
IL-34	PeproTech or Biologend	200-34 or 577904	Końcowe stężenie 100 ng/mL
iMG base media			Końcowe stężenie 1x
M-CSF	PeproTech	300-25	Końcowe stężenie 5 ng/mL
TGF-β	PeproTech	100-21	Końcowe stężenie 50 ng/mL
Barwniki do oznaczania fagocytozy
odczynnik NucBlue Live Ready	Invitrogen	R37605
pHrodo Red, succinimidyl ester	ThermoFisher Scientific	P36600	Odnosi się do barwnika
Inne odczynniki do hodowli komórkowych
Cytochalasin D	Sigma		Końcowe stężenie 10 μM
Software and Equipment
Centrifuge<	Model 5810R	<
Biotek
Gen5 Microplate Reader and Imager Software<	version 3.03

wrażliwego na pHtd style='padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>Eppendorftd style='padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>Cytation 5 czytnik obrazowania żywych komórektd style='padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>Biotek