Wykonywanie akkotomii zmiażdżenia nerwu twarzowego w modelu mysim

Streszczenie

Źródło: Olmstead, D. N., i wsp., Aksotomia nerwu twarzowego u myszy: model do badania odpowiedzi neuronów ruchowych na uraz. J. Vis. Exp. (2015).

Ten film pokazuje procedurę zmiażdżenia nerwu twarzowego u myszy, w której tępe rozcięcie kluczowych punktów orientacyjnych odsłania pień nerwu twarzowego w otworze rylcowo-sutkowym. Kleszcze są następnie używane do uciskania pnia nerwowego, wywołując uszkodzenie aksonów i zakłócając przekazywanie sygnałów neuronalnych.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Podejście chirurgiczne

1. Ustaw stereoskop i ustaw ostrość na polu operacyjnym. Wyreguluj stożek nosowy i przyklej go taśmą tak, aby znajdował się wzdłuż krawędzi pola widzenia.
2. Gdy mysz leży na lewym boku, przyklej krawędź prawego ucha do stożka nosowego, odsłaniając obszar za uchem, w którym zostanie wykonane nacięcie. Upewnij się, że tylna żyła uszna przechodzi poziomo w poprzek ucha. Należy pamiętać, że prawidłowe ułożenie zwierzęcia i zaklejenie ucha ma kluczowe znaczenie dla szybkiego odnalezienia nerwu twarzowego.
3. Zwilż sierść na uchu i za uchem 70% etanolem i ogol miejsce operowane za pomocą żyletki lub ostrza skalpela. Wstępne zwilżenie sierści ułatwia golenie w tym anatomicznym miejscu.
4. Oczyść skórę roztworem jodu, takim jak peeling chirurgiczny Betadine (7,5% jodowidonu), a następnie 70% etanolem. Powtórz to czyszczenie jeszcze dwa razy, aby dokładnie zdezynfekować obszar.
5. Aby określić, gdzie należy wykonać nacięcie, prześledź tylną żyłę uszną od ucha doogonowo do obszaru z tyłu do wypukłości ucha. Za pomocą nożyczek sprężynowych wykonaj nacięcie 4 mm 2 - 3 mm za wypukłością.
6. Przeprowadź sekcję podskórnej tkanki tłuszczowej i powięzi za pomocą tępej sekcji. Unikaj bezpośredniego cięcia nożyczkami, ponieważ naczynia krwionośne lub tkanka mięśniowa mogą zostać łatwo uszkodzone.
7. Jeśli wystąpi krwawienie, uciskaj pole operacyjne sterylnym wacikiem przez co najmniej 30 sekund. Jeśli dojdzie do znacznego ubytku płynów, wstrzyknąć myszowi dootrzewnowo do 0,5 ml sterylnego 0,9% roztworu soli fizjologicznej za pomocą igły 25 lub 27 G.
8. Użyj kilku kluczowych punktów orientacyjnych, nerwu dodatkowego rdzenia, kanału słuchowego i przedniego mięśnia dwubrzuścowego (opisanego poniżej), aby zlokalizować nerw twarzowy. Przeanalizuj wokół tych punktów orientacyjnych, aż gałęzie nerwu twarzowego zostaną uwidocznione. Nerw pojawi się jako znaczna, solidna biała struktura, gdy zostanie ujawniona, a warstwa powięzi przylega do leżących poniżej struktur.
   1. Znajdź nerw dodatkowy rdzenia, który przemieszcza się z ogonowej części czaszki, aby unerwić mięsień czworoboczny po wycięciu podskórnej tkanki tłuszczowej i powięzi. Nerw twarzowy jest głęboko przylegający do nerwu dodatkowego rdzenia.
   2. Znajdź chrzęstny kanał słuchowy, który wygląda na perłowo-biały i można go zobaczyć rostralnie do nerwu twarzowego.
   3. Znajdź brzuch mięśniowy przedniego mięśnia dwubrzuścowego, który leży na wierzchu i ogonowo do nerwu twarzowego.
9. Kiedy główne gałęzie nerwu twarzowego zostaną uwidocznione, prześledź je grzbietowo, aby znaleźć ich pochodzenie z otworu rylcowo-sutkowego. Używając kleszczyków Dumonta z cienką końcówką # 5/45, aby utrzymać otwarte pole operacyjne, przesuń sprężynowe końcówki nożyczek zgodnie ze ścieżką nerwu, a następnie przesuń kleszcze grzbietowo, aby utrzymać nowo wysunięty obszar otwarty.
10. W tym miejscu wyobraź sobie pień nerwu twarzowego z gałęziami jarzmowymi, policzkowymi i brzeżnymi żuchwy.
    UWAGA: Gałąź skroniowa znajduje się bliżej otworu. Brzeżny nerw żuchwowy rozgałęzia się na górną i dolną część bliżej szczęki, więc te gałęzie nerwowe nie będą widoczne na tym poziomie.
    1. Jeśli wykonujesz uraz zmiażdżenia, użyj kleszczy Dumont #5/45, aby ścisnąć nerw przez 30 sekund, używając stałego nacisku, aby przeciąć wszystkie aksony, a następnie powtórz to zmiażdżenie pod drugim kątem prostopadłym do pierwszego miejsca zmiażdżenia. Unikaj wywierania zmiennego nacisku podczas 30-sekundowego zgniatania, w przeciwnym razie uraz będzie niespójny między zwierzętami.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Mikroskop stereoskopowy	Leica	M60
Taśma do etykietowania	Fisher Scientific	15-952
Nożyczki sprężynowe Vannas-Tübingen - proste/ostre/8,5cm/krawędź tnąca	Narzędzia do nauki pięknej	15003-08	Sterylizuj przed użyciem
Kleszcze Dumont #5/45 - Standardowe końcówki/Kąt 45°/Dumoxel/11cm	Fine Science Tools	11251-35	Sterylizuj przed użyciem
0.9% Wtrysk chlorku sodu, USP	Hospira	0409-4888-10
Betadine, 16 uncji, z dozownikiem	Fisher Scientific	19-027132
70% etanolu
Sterylizator z koralików szklanych