Wywoływanie stłuczenia rdzenia kręgowego w modelu mysim za pomocą platformy koncentrycznej po urazie rdzenia kręgowego

Streszczenie

Źródło: Elzat, E. Y. Y., i wsp., Ustalanie modelu uszkodzenia rdzenia kręgowego u myszy w oparciu o technikę minimalnie inwazyjną. J. Vis. Exp. (2022).

Ten film przedstawia metodę wywoływania kontuzji rdzenia kręgowego na poziomie T9 w modelu mysim przy użyciu platformy współosiowej urazu rdzenia kręgowego. Na rdzeń kręgowy na poziomie T9 upuszczany jest ciężar, który tworzy stłuczenie, które natychmiast powoduje przebarwienie i obrzęk tkanek.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Lokalizacja i laminektomia 9^th kręgu piersiowego (T9)

UWAGA: Samice myszy C57BL/6J w wieku 9-10 tygodni zostały zakupione w Jinan Pengyue Experimental Animal Company (Jinan, Chiny).

1. Autoklawuj zestaw narzędzi chirurgicznych do eksperymentu i wysterylizuj stół operacyjny 75% alkoholem przed operacją.
2. Wstrzyknąć buprenorfinę w celu znieczulenia (0,05-2,0 mg/kg, podskórnie) 30 minut przed znieczuleniem do operacji urazu. Następnie znieczulij mysz izofluranem (indukcja: ~3-5%, utrzymanie: ~1,5-2%). Sprawdź, czy zwierzę jest w pełni znieczulone przez odruchy szczypania ogona lub palca. Po uruchomieniu znieczulenia połóż mysz w pozycji leżącej w wyznaczonej części stołu operacyjnego i pokryj rogówkę maścią okulistyczną (nałóż maść okulistyczną na rogówki, aby chronić oczy przed wysuszeniem podczas operacji).
   1. Ogol włosy od ogona do rostralu za pomocą golarki elektrycznej na odcinku piersiowo-lędźwiowym kręgosłupa. Sterylizuj skórę kilka razy okrężnymi ruchami jodoforem przez 30 s, a następnie 75% alkoholem. Zastosuj sterylną serwetę chirurgiczną i wykonaj podłużne nacięcie o długości około 1,5 cm na skórze od około 6^th kręgu piersiowego (T6) do 13^th kręgu piersiowego (T13) za pomocą skalpela i ostrza.
      UWAGA: Badanie palpacyjne wzdłuż brzegu żebrowego do linii środkowej, gdzie znajduje się 12^th kręg piersiowy (T12) - przestrzeń międzykolcowa T13. Wykonaj 1,5 cm nacięcie rostralu, a nacięcie jest w przybliżeniu równo z kręgami T6-T13.
3. Zbadaj 13^th żebro po jednej stronie od części kostnej pod mikroskopem operacyjnym. Zbadaj wyrostek kolczysty w linii środkowej, lekko dotykając obszaru kąta żebrowo-rdzeniowego, a następnie w kierunku rostralu, aby zlokalizować przestrzeń międzykolcową T12-T13. Zbadaj przestrzeń międzykolcową kręgu piersiowego T9 - 10^th kręgu piersiowego (T10) od przestrzeni T12-T13 do strony rostralnej. (Rysunek 1A, 2A)
4. Wypreparuj mięsień przykręgosłupowy wzdłuż wyrostka kolczystego T9 do przednich i tylnych stawów międzywyrostkowych po obu stronach za pomocą mikronożyczek (Rysunek 2B). Wycofaj mięśnie przykręgosłupowe za pomocą mikroretraktorów i oczyść tkankę miękką na blaszce oraz w przestrzeni międzykolcowej kręgu piersiowego 8^th (T8) - T9 i T9-T10 za pomocą mikronożyczek.
5. Wykonaj laminektomię T9, zaciśnij wyrostek kolczysty T9 za pomocą kleszczy mikrochirurgicznych, lekko go podnieś, włóż mikronożyczki równolegle wzdłuż prawej grzbietowo-bocznej strony blaszki, unikając uszkodzenia rdzenia kręgowego, i odetnij blaszkę mikronożyczkami. Powtórz po lewej stronie, a rdzeń kręgowy może zostać odsłonięty (Rysunek 1B, 2C).
6. Przed zamocowaniem kręgu poluzuj ramię uniwersalne i powoli zaciśnij 9^th do 10^th stawów międzywyrostkowych po obu stronach kręgu za pomocą mikrokleszczyków do komarów stabilizatora kręgów. Dokręć śruby na mikro kleszczach do komarów, a kręg zostanie w ten sposób ustabilizowany. Dopasuj rdzeń kręgowy do płaszczyzny poziomej, napnij uniwersalne ramię i zamocuj kręg (Rysunek 2D).

2. Uraz stłuczenia T9

1. Gdy rdzeń kręgowy na poziomie T9 zostanie odsłonięty, a kręg zamocowany, wyceluj w rdzeń kręgowy za końcówkę wewnątrz rękawa pod mikroskopem operacyjnym (Rysunek 2E).
2. Sprawdź, czy powierzchnia końcówki jest równoległa do rdzenia kręgowego z tylnej i bocznej części rdzenia kręgowego, ponieważ pod mikroskopem łatwo jest zaobserwować związek między rdzeniem kręgowym a końcówką, a stół operacyjny można łatwo obrócić.
3. Sprawdź, czy powierzchnia końcówki jest równoległa do obustronnych granic oszczędzonej blaszki, zanim końcówka zetknie się z rdzeniem kręgowym po laminektomii, ponieważ jest to naturalna płaszczyzna odniesienia równoległa do rdzenia kręgowego.
4. Po zlokalizowaniu przestrzeni międzykolcowej T12-T13 należy opuścić tuleję do momentu, aż koniec impaktora będzie zgodny ze znakiem na okienku obserwacyjnym i zostanie osiągnięta określona wysokość 22 mm. Wyciągnij szpilkę, aby zwolnić ciężar (1.3 g, 2.0 g lub 2.7 g w zależności od grupy, przy czym każda grupa zawiera 3 myszy, a każda grupa ma jedną mysz na każdy punkt czasowy).
   UWAGA: Rdzeń kręgowy powinien być równoległy do podłoża i prostopadły do końca; Przesuń stół operacyjny, aby zapewnić mikroskopijne pole widzenia, ponieważ stół jest bardzo kompaktowy.
5. Zdejmij impaktor po zakończeniu stłuczenia i obserwuj stopień uszkodzenia rdzenia kręgowego (SCI) pod mikroskopem operacyjnym. W grupie łagodnej można zaobserwować jasnoczerwoną zmianę koloru, podczas gdy w grupie umiarkowanej miejsce urazu wykazuje ciemnoczerwony kolor w ciągu 3-4 s i ewentualnie można zaobserwować wypukłość. W grupie ciężkiej ciemnoczerwone objawy mogą pojawić się natychmiast i manifestuje się wyraźna wyniosłość opony twardej, ale opona twarda jest nadal w spójnym kształcie (Rysunek 2F).

Wyniki

Rysunek 1. Wykres obrazowy metody lokalizacji kręgów żebrowych T13. (A) 13^th żebro i T13 są względnie stałymi strukturami anatomicznymi. Kąt żebrowy T13 można łatwo wykryć pod mikroskopem, z którego operator może sondować w kierunku wyrostka kolczystego i znaleźć przestrzeń międzykolcową T12-T13. Następnie sonduj kol...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Etanol	Odczynnik Fuyu	64-17-5
Mikroskop fluorescencyjny	KEYENCE	BZ-X800 0
Myszy	Jinan Pengyue Experimental AnimalCompany	C57BL/6J
Aparatura mikrochirurgiczna	Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd	Wszystkie instrumenty chirurgiczne są wykonywane na zamówienie	Nożyczki okulistyczne, mikro kleszcze do komarów, kleszcze mikrochirurgiczne, mikronożyczki
RWD Laboratoryjna stacja znieczulenia wziewnego	RWD Life Science Co., Ltd	R550
System obrazowania mikrotomografii komputerowej in vivo dla małych zwierząt	PerkinElmer	Quantum GX2
Platforma koncentryczna po uszkodzeniu rdzenia kręgowego	Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd	Custom-made (standard Fenga)	(https://shop43957633.m.youzan.com/wscgoods/detail/367x5ovgn69q18g?banner_id=f.81386274~goods.7~1~ b0yRFKOq&alg_id=0&slg=tagGood List-default%2COpBottom%2Cuuid %2CabTraceId&components_style_ layout=1&reft=1659409105184&sp m=g.930111970_f.81386274&alias =367x5ovgn69q18g&from_uuid=136 2cc46-ffe0-6886-2c65-01903dbacbb a&sf=qq_sm&is_share=1&shopAuto Enter=1&share_cmpt=native_ wechat&is_silence_auth=1)

{{TAG_ 39}}