Wsteczne znakowanie neuronów ruchowych Drosophila za pomocą fluorescencyjnych barwników lipofilowych

Streszczenie

Źródło: Inal, M. A. et. al., wsteczne śledzenie embrionalnych neuronów ruchowych Drosophila przy użyciu lipofilowych barwników fluorescencyjnych. J. Vis. Exp. (2020)

Ten film pokazuje metodę wstecznego znakowania neuronów ruchowych Drosophila za pomocą barwników lipofilowych. Barwnik dostaje się do aksonu, przemieszcza się wstecz i oznacza neurony na zielono, umożliwiając szczegółową wizualizację ich morfologii i projekcji pod mikroskopem konfokalnym.

Protokół

1. Sprzęt i zaopatrzenie

1. Materiały do pobierania zarodków i szkolenia dorosłych do składania jaj
   1. Przygotuj aparat filtracyjny, przecinając probówkę o pojemności 50 ml i wycinając otwór w nasadce, aby umieścić filtr siatkowy z porami 100 μm (Tabela materiałów) między rurką a Czapka.
      UWAGA: Alternatywnie, sitka komórkowe z porami 100 μm....

Wyniki

Rysunek 1: Konfiguracja basenu preparacyjnego. Niebieska komora widoczna na szklanym szkiełku jest wykonana z taśmy winylowej utrzymującej bufory w środku. Taśma dwustronna przytrzymuje zarodki, które są prawidłowo wyrównane. .......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
10x obiektyw lens<
40x soczewka zanurzeniowa w wodzie	Nikon		NIR Apo
rurka kapilarna	Frederick Haer&Co	27-31-1
Mikroskop konfokalny	Andor	N/A	Dragonfly Wirujący dysk jednostka konfokalna
Cover glass	Corning		22x22 mm Square #1
DiD	ThermoFisher	V22886
DiI	ThermoFisher	V22888
DiO	ThermoFisher	V22887
Mikroskop preparacyjny	Nikon	N/A	SMZ-U
Taśma dwustronna	Scotch	665
Dow corning smar wysokopróżniowy	Fisher Sci.	14-635-5D
Dumont #5 Kleszcze	Fine Science Tools	11252-20
Egg collection cage	FlyStuff	59-100
FemtoJet 5247	Eppendorf	wycofane	FemtoJet 4i (nr kat. 5252000021)
Micromanipulator	Sutter	MP-225
Ukosowarka do mikropipet	Sutter	BV-10-B
Ściągacz do igieł	Narishige	PC-100
Pakiety premiksów z agarem winogronowym Nutri-fly	FlyStuff	47-102
Nylon net filter	Millipore
Paraformaldehyd 16% roztwór, klasa EM	Nauki o mikroskopii elektronowej	15710	Any EM grades
PBS	Roche	11666789001	Sprzedawane na sigmaaldrich, pudełkowe rozwiązanie 10x
Photo-Flo 200	Kodak	146 4510	Środek zwilżający
Pionowy mikroskop fluorescencyjny	Nikon	N/A	Eclipse Ci ze źródłem
Taśma izolacyjna winylowa	Scotch	6143
VWR Cell sits	VWR	10199-659
Yeast	FlyStuff	62-103	Aktywne suche drożdże (RED STAR)

td style='kolor tła:#ffffff;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>NikonPlan światła LED