Analiza struktur amyloidowych w skrawku tkanki przy użyciu mikroskopii obrazowania czasu życia fluorescencji

Abstract

Źródło: Nyström, S., et al., Obrazowanie tkanek amyloidowych wybarwionych luminescencyjnymi sprzężonymi oligotiofenami za pomocą hiperspektralnej mikroskopii konfokalnej i obrazowania czasu życia fluorescencji. J. Vis. Exp. (2017).

Ten film przedstawia analizę struktur amyloidowych za pomocą mikroskopii obrazowania fluorescencji (FLIM), przy użyciu barwnika hFTAA w celu ujawnienia zwartych rdzeni jako niebieskich/zielonych i niestabilnych peryferii jako czerwonych/żółtych na obrazach oznaczonych kolorami, odzwierciedlających organizację amyloidu.

Protocol

1. Przygotowanie próbek tkanek

UWAGA: Wiele typów tkanek można obrazować przy użyciu kwasu heptamerowo-formylowo-tiofenowego (hFTAA) jako markera amyloidu. hFTAA jest wrażliwy na konformację agregatów. W związku z tym barwienie powinno być najlepiej wykonywane na niezakłóconych kruszywach bez ekspozycji epitopów. Optymalna jakość widmowa jest osiągana, jeśli utrwalenie tkanki jest ograniczone do minimum. Dlatego preferowany jest świeżo zamrożony materiał, delikatnie utrwalony w etanolu w czasie barwie....

Materials