Artykuł metodologiczny

Trójwymiarowa wizualizacja zakażenia wirusem wścieklizny w tkance mózgowej myszy

29 maja 2025

W tym artykule

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Zaeck, L., et al. Obrazowanie 3D w wysokiej rozdzielczości zakażenia wirusem wścieklizny w tkance mózgowej oczyszczonej rozpuszczalnikiem. J. Vis. exp. (2019).

Ten film pokazuje proces przygotowania i obrazowania tkanki mózgowej myszy zakażonej wirusem wścieklizny (RABV) w celu oceny postępu infekcji. Przedstawiono w nim kluczowe etapy, w tym barwienie tkanek za pomocą markerów fluorescencyjnych, odwodnienie, oczyszczanie i montaż do konfokalnej laserowej mikroskopii skaningowej, których kulminacją jest wygenerowanie trójwymiarowej reprezentacji.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie procedury dotyczące próbek zwierzęcych zostały sprawdzone i zatwierdzone przez odpowiednią komisję ds. oceny etycznej zwierząt.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Reagents
Alkohol benzylowyAlfa Aesar41218Czyszczenie odczynnika
Benzoesan benzyluSigma-Aldrich style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>BB6630-500MLOdczynnik czyszczący
DimetylosulfotlenekCarl Roth4720.2Różne bufory
eter difenylowySigma-Aldrich240834-100GOdczynnik czyszczący
DL-α-TocopherolAlfa AesarA17039Przeciwutleniacz
Surowica osłaBio-RadC06SBZOdczynnik blokujący
GlycineCarl Roth3908.2Redukcja tła
Kozia surowicaMerckS26-100MLOdczynnik blokujący
Sól sodowa heparynyCarl Roth7692.1Redukcja tła
Roztwór nadtlenku wodoru (30%)Carl Roth8070.2Wybielanie próbki
MetanolCarl Roth4627.4Próbka wstępna obróbka
ParaformaldehydeCarl Roth335.3Krystaliczny proszek do przygotowania roztworu utrwalającego
Azydek soduCarl RothK305.1Zapobieganie rozwojowi drobnoustrojów w roztworach podstawowych
tert-butanolAlfa Aesar33278Odwodnienie próbki w celu oczyszczenia tkanek
TO-PRO-3Thermo FisherT3605Plama kwasu nukleinowego
Triton X-100Carl Roth3051.2Detergent
Tween 20AppliChemA4974,0500Detergent
różne
5 ml probówek reakcyjnychEppendorf30119401Sample tubes
Coverslip, okrągły (średnica: 22 mm)Marienfeld111620Część komory obrazowania
Szkiełko nakrywkowe, okrągłe (średnica: 30 mm)Marienfeld111700Część komory obrazowania
Igła podskórna (27 G x 3/4" [0,40 mm x 20 mm])B. Braun4657705Napełnianie komory obrazowania roztworem czyszczącym
RTV-1 silikonowa gumaWackerElastosil E43Klej do montażu komory obrazowania
Ultimaker CPE 2,85 mm transparentUltimaker8718836374869Filament kopoliestrowy do drukarki 3D do drukowania części komory obrazowania
Sprzęt techniczny i oprogramowanie
Drukarka 3DUltimakerUltimaker 2+Drukowanie komory obrazowania
Automatyczny system zanurzania w wodzieLeica15640019Pompa wodna sterowana programowo
Wytrząsarka orbitalna na górzeElmiDOS-20MInkubacja próbki w temperaturze pokojowej (~ 150 rpm)
Wytrząsarka orbitalna na górze, podgrzewanaNew Brunswick ScientificG24 Environmental ShakerPróbka inkubacja w temperaturze 37 °C (~ 150 rpm)
Konfokalny laserowy mikroskop skaningowyLeicaDMI 6000 TCS SP5Odwrócony konfokalny mikroskop do obrazowania próbek
FidżiNIH (ImageJ)open source software (v1.52h)Pakiet do przetwarzania obrazów oparty na ImageJ
Zanurzenie w wodzie na dużą odległość roboczą obiektywLeica15506360HC PL APO 40x/ 1.10 W motCORR CS2
VibratomeLeicaVT1200SPlasterkowanie próbki
Stacja roboczaDellPrecision 7920procesor: Intel Xeon Gold 5118
GPU: Nvidia Quadro P5000
RAM: 128 GB 2666 MHz DDR4
SSD: 2 TB
Primary antibodies
Goat anti-RABV NFriedrich-Loeffler-Institut Monospecyficzna poliklonalna surowica N anty-RABV kozy, generowana przez immunizację kóz nukleoproteiną N
Rozcieńczenie: 1:400
Rabbit anti-GFAPDakoZ0334Przeciwciało poliklonalne (RRID:AB_10013382)
Rozcieńczenie: 1:100
Rabbit anti-MAP2Abcamab32454Przeciwciało poliklonalne (RRID:AB_776174)
Rozcieńczenie: 1:250
Rabbit anti-RABV P 160-5Friedrich-Loeffler-Institut Monospecyficzna poliklonalna surowica królika anty-RABV P, wygenerowana przez immunizację królika fosfoproteiną P RABV wyrażoną przez bakulowirus i oczyszczoną z His-tagu (patrz odniesienie 23: Orbanz i wsp., 2010)
Rozcieńczenie: 1:1,000
Przeciwciała wtórne
Osioł anty-kozioł IgGThermo Fisher Scientificw zależności od sprzężonego fluoroforuHighly cross-absorbed
Rozcieńczenie: 1:500
Donkey anti-mouse IgGThermo Fisher Scientificw zależności od sprzężonego fluorophoreHighly cross-absorbed
Rozcieńczenie: 1:500
Osioł anty-królik IgGThermo Fisher Scientificw zależności od sprzężonego fluoroforuHighly cross-absorbed
Rozcieńczenie: 1:500
Kozioł anty-mysz IgGThermo Fisher Scientificw zależności od sprzężonego fluoroforuHighly cross-absorbed
Rozcieńczenie: 1:500
Kozioł anty-królik IgGThermo Fisher Scientificw zależności od sprzężonego fluoroforuHighly cross-absorbed
Rozcieńczenie: 1:500
Ntr style='height:21px;'>

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Rabies Virus InfectionMouse Brain TissueConfocal Laser Scanning MicroscopyThree Dimensional VisualizationTissue ClearingFluorescent StainingImmunostaining ProtocolSolvent ClearingImage Acquisition3D Projection

Powiązane artykuły