Obrazowanie bioluminescencyjne w modelu myszy EAE

Streszczenie

Źródło: Schmitz, K., et al., Bioluminescencja i obrazowanie w bliskiej podczerwieni zapalenia nerwu wzrokowego i mózgu w modelu EAE stwardnienia rozsianego u myszy. J. Vis. Exp. (2017).

Ten film pokazuje metodę wizualizacji i monitorowania eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego lub zapalenia nerwu wzrokowego wywołanego EAE za pomocą obrazowanie bioluminescencyjne. Obejmuje to pozycjonowanie myszy, wstrzykiwanie odczynnika i przechwytywanie sekwencyjnych obrazów w celu monitorowania zmian bioluminescencji w czasie.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Obrazowanie bioluminescencyjne zapalenia nerwu wzrokowego i zapalenia mózgu

1. Konfiguracja systemu obrazowania
   1. Wykonuj obrazowanie in vivo za pomocą dowolnego sprzętu pozwalającego na analizę sygnałów bioluminescencyjnych i bliskiej podczerwieni.
   2. Utrzymuj myszy poniżej 2 - 2,5% znieczulenia izofluranem podczas wszystkich procedur obrazowania.
   3. Umieść jedną lub dwie myszy obok siebie w aparacie, korzystając ze środkowego dopływu gazu. Ustaw górny kręgosłup pośrodku.
   4. Aby ocenić działanie leków, porównaj pary myszy używając dwóch myszy jednocześnie, po jednej na grupę. Jest to ważne dla obrazowania bioluminescencyjnego.
   5. Osłoń miejsce szczepienia czarną szmatką i zrób zdjęcie oraz obraz bazowy, aby ocenić prawidłowe ułożenie myszy/myszy. W przypadku wszystkich zdjęć należy używać ostrości B w odległości 6.5 cm od aparatu.
2. Iniekcja i obrazowanie bioluminescencyjnej sondy stanu zapalnego
   1. Użyj in vivo{{}}: Epi-BLI, Em filter open, Ex filter block, fstop 1, binning 8, ostrość B = 6,5 cm, ekspozycja ad 120 s; Wykonaj obraz linii bazowej.
   2. Wstrzyknąć 100 μl i.p. gotowego do użycia odczynnika chemiluminescencyjnego (40 mg/ml). Dobrze wymieszać przed napełnieniem strzykawki.
   3. Uchwyć obrazy bioluminescencji 5, 10 i 15 minut po wstrzyknięciu. Przebieg w czasie piku bioluminescencyjnego różni się u poszczególnych zwierząt.
      UWAGA: Szczyt nastąpi 5 - 10 minut po wstrzyknięciu; Spadek po 15 minutach oznacza, że nie są wymagane żadne dalsze obrazy. Użyj par myszy w grupach kontrolnych i leczonych, aby wyeliminować drobne odchylenia wynikające z różnych przebiegów czasowych.
   4. Uzupełnij opisy związane z eksperymentem. Obserwuj, jak automatycznie pojawia się wyskakujące okno dialogowe; Zawiera informacje, takie jak szczep myszy, płeć, punkt czasowy, czas wstrzyknięcia sondy, grupa, etc. Zapisz wszystkie pliki w jednym folderze; Będą one zawierały znaczniki czasu i wszystkie opisy.

Materiały