Ten film pokazuje przygotowanie, obrazowanie i analiza tkanki mózgowej myszy przy użyciu seryjnego skaningowego mikroskopu elektronowego z blokową powierzchnią czołową (SBFSEM) w celu wizualizacji ultrastruktury mitochondriów, umożliwiając precyzyjne mapowanie ich morfologii i rozmieszczenia przestrzennego w aksonalnych i dendrytycznych przedziałach neuronalnych.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Obrazowanie mitochondriów neuronalnych za pomocą seryjnego skaningowego mikroskopu elektronowego typu block-face
1K wyświetleń
⸱
29 maja 2025
W tym artykule
Streszczenie
Protokół
Wszystkie procedury dotyczące próbek zwierzęcych zostały poddane przeglądowi i zatwierdzone przez odpowiednią komisję ds. oceny etycznej zwierząt.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| C57BL/6J myszy | Jackson laboratory | 664 | |
| Isoflurane | VETone, nazwa handlowa Fluriso | 501017 | |
| taca do sekcji | Fisher scientific | S65105 | |
| Nożyczki do preparacji | Ted Pella Inc. | 1316 | |
| Butterfly canula | Exel International | 26704 | |
| Bufor fosforanowy sól fizjologiczna | Sigma-Aldrich | P4417-100TAB | |
| Filtr (0,45 mikrona) | EMD Millipore | NC0813356 | |
| Mikroskop preparacyjny | Olympus | SZ61 | |
| System sekcji wibratome | Ted Pella Inc. | Vibratome 3000 | |
| Sodium Cacodylate | 12300 | ||
| Kwas taninowy | EMS | 21700 | |
| Żelazocyjanek potasu | J.T. Baker | 14459-95-1 | |
| Roztwór 4% tetratlenku osmu | EMS | 19150 | |
| Tiokarbohydrazyd | EMS | 21900 | |
| Kwas L-asparaginowy | Sigma-Aldrich | A93100 | |
| Wodorotlenek potasu | Acros Organics | 43731000 | |
| Azotan ołowiu | EMS | 17900 | |
| EMbed-812 ZESTAW OSADZANIA | EMS | 14120 | Zawiera żywicę Embed 812, DDSA, NMA i DMP-30. |
| Aldehyd glutarowy 25% EM Grade | Polysciences Inc. | 1909 | |
| Paraformaldehyde | EMS | 19202 | |
| Octan uranylu | EMS | 22400 | |
| Ethanol | EMS | 15055 | |
| Tlenek propylenu | EMS | 20400 | |
| Embedding Mold | 70907 | ||
| Aluminiowa szpilka do próbek | EMS | 70446 | |
| Płyn ze srebra koloidalnego | EMS | 12630 | |
| Razor | EMS | 72000 | |
| Super Glue (Loctite Gel Control) | Loctite | 234790 | |
| Epoksyd przewodzący | Ted Pella Inc. | 16043 | |
| Skaningowy mikroskop elektronowy | Zeiss | Sigma VP | |
| W komorze ultramikrotom do SEM | Gatan Inc. | 3View2 | Może być zaprojektowany dla innych SEMów |
| Mikroskop do przycinania do przygotowania szpilki | Gatan Inc. | dostarczane jako część systemu 3View | |
| Detektor elektronów wstecznie rozproszonych o niskim napięciu kV | Gatan Inc. | 3V-BSED | |
| ImageJ/ Fiji processing package | ImageJ ver 1.50b, FIJI download Oct 1, 2015 | ||
| http://rsb.info.nih.gov/ij/ | |||
| http://www.icmr.ucsb.edu/programs/3DWorkshop/Uchic-2015_FIJI_Tutorial.pdf | |||
| http://fiji.sc/TrakEM2 | |||
Przeglądaj więcej artykułów
Seryjna scanningowa mikroskopia elektronowa powierzchni bloku (SBF-SEM)ultrastruktura mitochondriówobrazowanie tkanki mózgowejrekonstrukcja 3Dprzedziały neuronalneprzygotowanie próbek do mikroskopu elektronowegodetekcja elektronów wstecznie rozproszonychsekcjonowanie ultramikrotomemoprogramowanie do wyrównywania obrazówanaliza morfologii mitochondriów
