Mikroendoskopowe obrazowanie wapnia w czasie rzeczywistym u swobodnie poruszającej się myszy

Streszczenie

Źródło: Lee, H. et. al., Udane obrazowanie wapnia in vivo za pomocą zminiaturyzowanego mikroskopu montowanego na głowie w ciele migdałowatym swobodnie zachowującej się myszy. J. Vis. Exp. (2020)

Ten film pokazuje obrazowanie wapnia in vivo u myszy przy użyciu gradientowego współczynnika załamania światła lub soczewki GRIN i zminiaturyzowanego mikroskopu. Konfiguracja łączy mocowanie głowy w beztarciowym mobilnym systemie klatek, stymulując neurony i wyzwalając napływ jonów wapnia. Soczewka GRIN rejestruje sygnalizację wapnia w mózgu, umożliwiając wizualizację aktywności neuronów w czasie rzeczywistym.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

UWAGA: Protokół ten składa się z sześciu głównych etapów: operacji wstrzyknięcia wirusa, operacji implantu soczewki z gradientowym indeksem załamania światła (GRIN), walidacji implantacji soczewki GRIN, mocowania płytki podstawowej, optycznego zapisu sygnału GCaMP (fuzja białka zielonej fluorescencji (GFP), kalmoduliny (CaM) i M13, sekwencji peptydowej z kinazy łańcucha lekkiego miozyny) podczas testu zachowania oraz przetwarzania danych (ryc. 1A). Z wyjątkiem chirurgii st....

Wyniki

Rycina 1: Schematyczny przebieg pracy i schematy chirurgii stereotaktycznej do mikroendoskopowego obrazowania wapnia in vivo w Los Angeles. (A) Schematyczny przebieg mikroendoskopowego obrazowania wapnia in vivo w Los Angeles. (B) Mikroskopowy obraz prze.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Igła 26G	BD	302002	Chirurgia
AAV1-Syn-GCaMP7b-WPRE	Addgene	104493-AAV1	Chirurgia
AAV2/1-CaMKiiα-GFP	Chirurgia
na zamówienieCement akrylowo-dentystyczny (Ortho-jet Acrylic Pink)	Lang	1334-pink	Chirurgia i mocowanie płytki bazowej
Manipulator przepływu powietrza	Neurotar	NTR000253-04	Nasadka do płytki bazowej
Amoksycylina	SIGMA	A8523-5G	Chirurgia
Klatka węglowa	Neurotar	180mm x 70mm	Nasadka do płyty bazowej
Carprofen	SIGMA	PHR1452-1G	chirurgia
Oprogramowanie do przetwarzania danych	INSCOPIX	Oprogramowanie do przetwarzania danych INSCOPIX	Test mocowania i zachowania płytki bazowej
Deksametazon	SIGMA	D1756-500MG	Wiertło chirurgiczne
	Seyang	marathon-4	Wiertło chirurgiczne
	ELA	US1/2, Shank104	Chirurgia
Szklana igła	WPI	PG10165-4	Chirurgia
Soczewka GRIN (sonda soczewkowa INSCOPIX Proview)	INSCOPIX	1050-002208	Chirurgia
Strzykawka	Hamilton	84875	Chirurgia
Płyta główna	Neurotar	Model 5	Chirurgia
Laptop	Samsung	NT950XBV	Surgery
Uchwyt na soczewki, pręt stereotaktyczny (zestaw implantów INSCOPIX proview)	INSCOPIX	1050-004223
Chirurgia Chwytak mikroskopu	INSCOPIX	1050-002199	Przystawka do płytki bazowej
Mikroskop, oprogramowanie DAQ, sprzęt	INSCOPIX	nVista 3.0	Mocowanie płytki bazowej i test zachowania
Mobilna klatka domowa	Neurotar	MHC V5	Mocowanie płytki bazowej
Zmodyfikowane ramię	Neurostar		Dostosowane oprogramowanie do chirurgii
Moterized	Neurostar	Indywidualna	chirurgia
Zdejmowane spoiwo epoksydowe	WPI	Kwik-Cast	Surgery
Cement żywiczny (Super-bond)	Sun medical	Super bond C&B	Surgery
Śruba czaszki	Stoelting	51457	Surgery
Rama stereotaktyczna	Stoelting	51600	Surgery
Manipulator	stereotaktycznyStoelting	51600	Mocowanie płyty bazowej