Technika przezskórnego aspiracji i przetwarzania plemników najądrza

Streszczenie

Ten film pokazuje przezskórne aspirację plemników najądrza od pacjenta z azoospermią, stanem charakteryzującym się brakiem plemników w nasieniu. Zabieg polega na dezynfekcji okolicy moszny, odessaniu płynu najądrza za pomocą strzykawki ze specjalistycznym roztworem hodowlanym i przetworzeniu pobranej próbki w celu wyizolowania żywotnych plemników. Przygotowane plemniki są następnie gotowe do wykorzystania w zaawansowanych procedurach leczenia niepłodności.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem ludzi zostały przeprowadzone zgodnie z instytucjonalnymi, krajowymi i międzynarodowymi wytycznymi dotyczącymi dobrostanu ludzi i zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję rewizyjną.

1. Przygotowanie przedoperacyjne

1. Przygotowanie zaopatrzenia chirurgicznego
   1. Przygotuj niezbędne materiały do zabiegu chirurgicznego, w tym jeden pakiet narzędzi chirurgicznych, dwie strzykawki 5 ml wyposażone w igłę 0,7 mm (0,7 x 32 cienkościenna długa faza (TWLB)), 60 ml roztworu dezynfekującego, dwie pary sterylnych gumowych rękawiczek i jeden kawałek sterylnego opatrunku samoprzylepnego.
   2. Poproś pielęgniarki o sprawdzenie opakowania narzędzi chirurgicznych poddanych sterylizacji parowej pod wysokim ciśnieniem pod kątem uszkodzeń lub utraty ważności. Po potwierdzeniu, że nie ma żadnych problemów, umieść go na stole instrumentów i otwórz zewnętrzną warstwę.
   3. Dla andrologów: załóż sterylne gumowe rękawice, a następnie otwórz wewnętrzną warstwę opakowania narzędzi chirurgicznych, aby sprawdzić, czy taśma wskaźnika sterylizacji jest kwalifikowana, a także upewnić się, że wszystkie narzędzia w środku są kompletne.
   4. Przygotować dwie strzykawki o pojemności 5 ml wyposażone w igły 0,7 mm (0,7 x 32 TWLB) do znieczulenia i zabiegu chirurgicznego, a następnie otworzyć ampułkę zawierającą wstrzyknięcie lidokainy.
   5. Użyj sterylnej strzykawki o pojemności 5 ml, aby zassać wstrzyknięcie lidokainy, a następnie usunąć pęcherzyki powietrza ze strzykawki.
2. Przygotowanie pacjenta poddawanego zabiegowi chirurgicznemu
   1. Zorganizuj przygotowanie skóry dla pacjenta. Ogol krocze łonowe za pomocą jednorazowej maszynki do golenia i umyj krocze oraz otaczającą skórę wodą z mydłem, aby upewnić się, że nie ma nadmiaru łona ani plam.
   2. Ułóż pacjenta na stole operacyjnym w pozycji litotomii, zdejmij spodnie i zabezpiecz górną część ubrania nad pępkiem, aby całkowicie odsłonić krocze i dolną część brzucha poniżej pępka.
   3. Dostosuj kąt lampy bezcieniowej, aby oświetlić mosznę pacjenta.
   4. Użyj owalnych kleszczyków, aby chwycić sterylną kulkę z gazy, którą następnie całkowicie zanurza się w roztworze dezynfekującym, aby rozpocząć proces dezynfekcji. Dezynfekcję skóry należy przeprowadzić od obrzeży do moszny w następującej kolejności: dolna część brzucha, przód i wewnętrzna strona ud, okolica krocza, penis i moszna.
   5. Po wstępnej dezynfekcji należy wymienić sterylną kulkę gazy i powtórzyć proces dezynfekcji. Po trzech rundach dezynfekcji proces dezynfekcji przedoperacyjnej jest zakończony.
   6. Rozpocznij proces układania sterylnych ręczników po zakończeniu dezynfekcji. Najpierw umieść sterylny kwadratowy ręcznik pod pośladkami pacjenta, a następnie rozprowadź sterylny ręcznik z otworami wokół pola operacyjnego i jego otoczenia, całkowicie odsłaniając mosznę w obszarze otworu.
3. Przygotowanie roztworu do hodowli G-MOPS-PLUS
   1. Poproś techników z pomieszczenia do hodowli embrionów o przeniesienie około 2 ml roztworu do hodowli G-MOPS-PLUS do naczynia hodowlanego za pomocą sterylnej pipety Pasteura. Prawidłowo zamknij pokrywę, a następnie dostarcz ją pielęgniarce na sali operacyjnej przez okienko transferowe.
   2. Umieść naczynie hodowlane na sterylnym ręczniku na stole z instrumentami i otwórz pokrywkę.
   3. Za pomocą kolejnej strzykawki o pojemności 5 ml odessać około 0,2 ml roztworu hodowlanego G-MOPS-PLUS, a następnie usunąć pęcherzyki powietrza do wykorzystania w przyszłości.

2. Znieczulenie i operacja

1. Dla andrologów: trzymaj strzykawkę wypełnioną wstrzyknięciem lidokainy w prawej ręce, a lewą mocuj powrózek nasienny pacjenta. Nakłuć podskórnie i wstrzyknąć niewielką ilość lidokainy, aby utworzyć bąbel. Następnie nakłuć podskórnie i zagłębić się w tkankę powrózka nasiennego, rozpoczynając wstrzykiwanie około 0,5 ml lidokainy po potwierdzeniu braku powrotu krwi. Aby uzyskać lepszy efekt znieczulenia blokującego powrózek nasienny, należy zmienić kierunek igły iniekcyjnej 2 do 3 razy w tym samym miejscu nakłucia i powtórzyć operację wstrzykiwania lidokainy do powrózka nasiennego.
2. Lewą ręką chwyć mosznę pacjenta, zabezpieczając najądrza, które wymaga nakłucia. Badając palpacyjnie, prawą ręką potwierdź lokalizację najądrza, w której potrzebne jest nakłucie chirurgiczne. Następnie należy przytrzymać strzykawkę zawierającą wspomnianą powyżej lidokainę i wstrzyknąć ją pod skórę w miejscu wkłucia, aby uzyskać znieczulenie miejscowe.
3. Lewą ręką chwyć mosznę pacjenta, zabezpieczając najądrza, które wymaga nakłucia. Następnie należy trzymać strzykawkę o pojemności 5 ml zawierającą roztwór hodowlany G-MOPS-PLUS (0,2 ml) w prawej ręce i nakłuć prostopadle do skóry, wnikając w tkankę najądrza. Utrzymuj podciśnienie w strzykawce i wielokrotnie nakłuwaj tkankę najądrza, aby płyn najądrza dostał się przez igłę pod wpływem podciśnienia.
4. Kontynuuj utrzymywanie podciśnienia i powoli wycofuj igłę do nakłuwania. Wstrzyknąć wyekstrahowany płyn najądrza do naczynia hodowlanego. Po zakończeniu wstrzykiwania należy odessać pobliski roztwór hodowlany G-MOPS-PLUS, aby przepłukać strzykawkę, aby zmaksymalizować ilość zebranego płynu najądrza wstrzykniętego do naczynia hodowlanego.

3. Leczenie wycinków chirurgicznych

1. Poszukiwanie i obserwacja plemników najądrza
   1. Przenieść szalkę hodowlaną zawierającą płyn hodowlany G-MOPS-PLUS i płyn najądrza do technika laboratorium zarodków przez okno transferowe.
   2. Technicy z pomieszczenia do hodowli embrionalnej przejmują naczynie hodowlane i umieszczają je na stoliku odwróconego mikroskopu optycznego, zabezpieczając je. Włącz wyłącznik zasilania mikroskopu i obróć przycisk regulacji światła do odpowiedniego natężenia światła.
   3. Obróć konwerter odwróconego mikroskopu optycznego, wybierz soczewkę obiektywu 10x, obróć kolejno spirale z grubą i dokładną ostrością, aby wyregulować ogniskową. Obserwuj sytuację ogniskowania i poszukaj plemników najądrza pod mikroskopem.
   4. Kontynuuj obracanie konwertera mikroskopu odwróconego do soczewki obiektywu 40x, obracaj spiralę z precyzyjną ostrością, aby wyregulować ogniskową i obserwuj plemniki najądrza pole po polu. Oceń liczbę i jakość plemników najądrza. Można zauważyć, że normalne plemniki najądrza dojrzały i uzyskały zdolność poruszania się.
2. Leczenie plemników najądrza
   1. Po zaobserwowaniu wystarczającej ilości aktywnych plemników najądrza, przenieś płyn z naczynia hodowlanego do probówki wirówkowej o pojemności 15 ml za pomocą sterylnej pipety Pasteura.
   2. Umieść powyższą probówkę wirówkową na tacy balansowej i użyj probówki wirówkowej o tej samej specyfikacji, zawierającej sterylną wodę, aby wyrównać.
   3. Otwórz drzwiczki wirówki, symetrycznie umieść probówki wirówkowe w gnieździe karty, a następnie zamknij drzwiczki wirówki. Ustaw siłę odśrodkową na 500 x g i czas wirowania na 5 minut za pomocą panelu sterowania. Naciśnij przycisk START na panelu sterowania, aby rozpocząć proces wirowania.
   4. Po zakończeniu procesu wirowania otwórz drzwiczki wirówki i wyjmij probówkę wirówkową zawierającą płyn najądrza. Odkręcić pokrywkę, delikatnie zassać supernatant sterylną pipetą Pasteura i wyrzucić pobrany supernatant.
   5. Za pomocą sterylnej pipety Pasteura przenieś około 2 ml roztworu hodowlanego G-IVF-PLUS do probówki wirówkowej. Następnie delikatnie odpipetować roztwór w probówce wirówkowej w celu dokładnego zawieszenia.
   6. Powtórz procesy równoważenia, wirowania i usuwania górnej warstwy cieczy.
   7. W zależności od potrzeb iniekcji plemników docytoplazmatycznych (ICSI), przenieś około 0,5 ml roztworu hodowlanego G-IVF-PLUS do probówki wirówkowej za pomocą sterylnej pipety Pasteura i delikatnie przedmuchaj plemniki najądrza na dnie probówki wirówkowej, aby dokładnie ją zawiesić.
   8. Dokładnie zawieszone plemniki najądrza należy wykorzystać bezpośrednio do procesu ICSI.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Centrifuge	Origio MAXI	G123511110440	Max RPM: 4000; Maksymalny RCF: 2826 x g
Probówka wirówkowa	Falcon	352095	15 mL
Kombinowany stojak na probówki	Shenzhen Zhicheng Long Technology Co., LTD	None
Naczynie hodowlane	Falcon	353001	35 mm x 10 mm
Roztwór dezynfekujący	Shanghai Likang Disinfection high-tech Co., LTD	20230801S	60 mL
G-IVF PLUS	Vitrolife Szwecja AB	511574	roztwór hodowlany do leczenia płynu najądrza
G-MOPS PLUS	Vitrolife Sweden AB	511712	culture solution for puncture operation<
Pipety Pasteura o wysokim poziomie bezpieczeństwa	Darwin	D2208003	230 mm, Fire Polished
instrument table		DZ202012010
Odwrócony mikroskop optyczny	OLYMPUS		IX71
Wstrzyknięcie chlorowodorku lidokainy		H31021072	5 mL : 0.1 g
Medyczne balance	Shanghai Guangzheng Medical Instrument Co., LTD	201609-4854	JYT-2
Medyczne maski chirurgiczne	161220328	17,5×9,5 cm(rozmiar po rozłożeniu 17,5×17 cm)
Stół operacyjny napędzany silnikiem	YZB0089-2011	operation table
Samoprzylepny opatrunek na rany	Guangzhou Ya Tian Biological Technology Co., LTD	20142140348	6 cm x 7 cm(3 cm x 4 cm)
sterylne strzykawki podskórne do jednorazowego użytku<	20230921	5 mL, wyposażone w 0,7 mm (0,7 x 32TWLB)
Sterylna rękawica chirurgiczna bez proszku lateksowego	Beijing Ruijing Latex Products Co., Ltd	2023030322	71/2, 61/2<
pakiet narzędzi chirurgicznych	Dział zaopatrzenia Trzeciego Szpitala Stowarzyszonego Uniwersytetu Sun Yat-sen	10228376	sterylizacja w autoklawie
Światło chirurgiczne	Shanghai Jishun Medical Device Manufacturing Co., Ltd	JSL2009-160D
Pionowy przepływ czysty stół	Suzhou Wanda Purification Technology Co., Ltd	DS-CZ-1311006	SH-CJ-2FD-1500

tr style='height:20px;'>td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>Shandong Weigao Group Medical polymer Products Co., Ltdtr style='height:20px;'>