Mikroskopia fluorescencyjna całkowitego odbicia wewnętrznego do wizualizacji zdarzeń egzocytarnych

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Winkle, C. C., et al. Wykorzystanie połączonych metodologii w celu zdefiniowania roli dostarczania błony plazmatycznej podczas rozgałęziania aksonów i morfogenezy neuronów. J. Vis. Exp. (2016)

Ten film przedstawia mikroskopię fluorescencji całkowitego wewnętrznego odbicia (TIRF) do wizualizacji zdarzeń egzocytarnych w neuronach korowych. Wrażliwy na pH marker białka zielonej fluorescencji (GFP) fluoryzuje po fuzji pęcherzyków, z selektywnym wzbudzeniem TIRF wychwytującym egzocytozę błonowo-proksymalną w obrazowaniu poklatkowym.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Obrazowanie zdarzeń egzocytarnych za pomocą mikroskopii fluorescencji całkowitego wewnętrznego odbicia (TIRF)

Uwaga: Protokół ten wymaga specjalistycznego sprzętu mikroskopowego, w tym komory środowiskowej do utrzymywania temperatury, wilgotności i dwutlenku węgla (CO₂), mikroskopu fluorescencji z odwróconym całkowitym wewnętrznym odbiciem (TIRF) wyposażonego w oświetlenie epifluorescencyjne, obiektyw TIRF o dużym powiększeniu / dużej aperturze numerycznej (NA), zautomatyzowany XYZ stopień i czuły detektor urządzenia sprzężonego z ładunkiem (CCD). Protokół ten wykorzystuje w pełni zautomatyzowany mikroskop odwrócony wyposażony w obiekt....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number	Comments
35mm szklane dno naczynia do obrazowania na żywo komórek	Matek Corporation	p356-1.5-14-C	Muszą być pokryte 1mg/mL poli-D-lizyną i przepłukane przed posiewem komórek
Mikroskop odwrócony Olympus IX81-ZDC2	Olympus
Lampa ksenonowa Lambda LS	Firma Sutter Instruments Środowiskowy
inkubator górny	Tokai Hit
100x 1,49 NA Obiektyw TIRF	Olympus
Andor iXon EM-CCD	Andor
Cell Oprogramowanie sterujące TIRF	Olympus		Software używane do sterowania lasery do obrazowania TIRF
Fidżi (zdjęcie J)	NIH	ImageJ wersja 1.49t
Królik poliklonalny anty-ludzki VAMP2	Sygnalizacja komórkowa	11829
Poli-D-lizyna	Sigma	p-7886	Rozpuszczony w sterylnej wodzie w stężeniu 1 mg / ml

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission