Kapsułkowanie czynnika wzrostu nerwów w nanocząstkach naśladujących lipoproteiny o dużej gęstości

Streszczenie

Źródło: Zhu, J., et al., Przygotowanie i charakterystyka nowych nanocząstek naśladujących HDL do enkapsulacji czynnika wzrostu nerwów. J. Vis. Exp. (2017)

Ten film pokazuje stopniowe składanie nanocząstek naśladujących HDL obciążonych NGF przy użyciu enkapsulacji wspomaganej protaminą i samoorganizacji opartej na lipidach w potencjalnych zastosowaniach neurotroficznych.

Protokół

1. Przygotowanie nanocząstek naśladujących HDL NGF

1. Rozpuścić substancje pomocnicze, fosfatydylocholinę (PC), sfingomielinę (SM), fosfatydyloserynę (PS), oleinian cholesterolu (CO) i bursztynian glikolu polietylenowego D-α-tokoferylu (TPGS), w etanolu w celu przygotowania roztworów podstawowych w stężeniu 1 mg/ml.
   UWAGA: Roztwory podstawowe podzielono na porcje i przechowywano w temperaturze -20 °C. Oleinian cholesterolu był przechowywany w ciemnych butelkach. Roztwory podstawowe PC, SM, PS i CO były stabilne odpowiednio do 6, 3, 12 i 12 miesięcy w temperaturze -20 °C. Roztwór TPGS był stabilny przez co najmniej 12 miesięcy w temperaturze -20 °C.
2. Wymieszaj 10 μl NGF (1 mg/ml w wodzie) z 10 μl protaminy USP (1 mg/ml w wodzie) w probówce do mikrowirówek o pojemności 1,5 ml i odstaw na 10 minut w temperaturze pokojowej, aby utworzyć kompleks.
   UWAGA: Roztwory podstawowe NGF i protaminy podzielono na porcje i przechowywano w temperaturze -20 °C. Wielokrotne zamrażanie i rozmrażanie nie jest zalecane w przypadku surowca NGF.
3. Do szklanej fiolki dodać 59 μl PC, 11 μl SM, 4 μl PS, 15 μl CO i 45 μl TPGS. Wymieszać i odparować etanol pod delikatnym strumieniem azotu przez około 5 minut; Wszystkie substancje pomocnicze powinny tworzyć oleisty, cienki film na dnie szklanej fiolki.
4. Dodać 1 ml ultraczystej (typu 1) wody do fiolki i homogenizować przy 9 500 obr./min (8 600 x g) przez 5 minut w temperaturze pokojowej, aby utworzyć prototypowe nanocząstki (NP).
5. Dodać kompleks przygotowany w kroku 1.2 do prototypowych nanocząsteczek i inkubować w temperaturze 37 °C przez 30 minut, mieszając, używając małego pręta mieszającego w szklanej fiolce.
6. Schłodzić NP, mieszając w temperaturze pokojowej przez kolejne 30 minut. Po ostygnięciu dodaj 106 μl Apo A-I (1,49 mg / ml) i mieszaj w temperaturze pokojowej przez noc, aby utworzyć końcowe NP naśladujące HDL NGF.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Rekombinowany ludzki beta-ngf	Creative Biomart	NGF-05H
L-a-fosfatydylocholina (PC)	Avanti	131601P	95%, jajo,
sfingomielina kurczaka (SM)	Avanti	860062P	mózg,
Fosfatydyloseryna świńska (PS)	Avanti	840032P	Mózg,
oleinian cholesterolu	Sigma	C9253
Bursztynian glikolu polietylenowego D-α-tokoferylu (TPGS)	BASF	9002-96-4	Bursztynian glikolu polietylenowego witaminy E
Siarczan protaminy	Sigma	P3369	spełnia specyfikacje
testowe USPApolipoproteina A1, osocze ludzkie	i technologia w Atenach	16-16-120101	1 mg w 671 μl 10 mM wodorowęglanu amonu, pH 7,4
Homogenizator	Tekmar	T 25-S1
Homogenizator Polytron	Kinematica	PT 1200C

cholesterolu wieprzowego (CO) Badania