Stereotaktyczne wstrzykiwanie wektorów wirusowych do przeprogramowania komórek glejowych w modelu mysim

Streszczenie

Źródło: Pereira, M. et al., In Vivo Bezpośrednie przeprogramowanie rezydentnych komórek glejowych do interneuronów przez domózgowe wstrzyknięcie wektorów wirusowych. J. Vis. Exp. (2019 rok)

Ten film demonstruje stereotaktyczne wstrzyknięcie wirusa związanego z adenowirusem do kory mózgowej transgenicznej myszy w celu dostarczenia zależnego od Cre przeprogramowania neuronów i fluorescencyjnych genów reporterowych do komórek glejowych.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Wstrzykiwanie czynników przeprogramowujących do

1. układu Brain Animal, stereotaktyczne umieszczanie i wiercenieUWAGA: Ten protokół koncentruje się na wykorzystaniu Ascl1, Lmx1a i Nurr1 (ALN) do przeprogramowania gleju NG2 (Neuron-Glial Antigen 2) do interneuronów. Z naszego doświadczenia wynika, że interneurony o podobnym fenotypie można uzyskać przy użyciu innych kombinacji czynników
   1. Przesuń ramię M/L-D/V ramy stereotakt....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Model zwierzęcy
myszy NG2-Cre	Jackson	NG2-CrexB6129, Stock #008533
Odczynniki
Sól fizjologiczna Woda
	Apoteket AB		70%
etanolu	Solveco
Isolfurane	Apoteket AB		Rozcieńczyć do 1% roztworu ciepłą wodą
Virkon	Viroderm	7511
Pentobarbital	Apoteket AB	P0500000	i.p. do procedury terminalnej w dawce 60 mg/ml
Sacharoza	Merck	S0389-500G
Trypan Blu	Thermo Fisher Scientific 15250061
Retrobeads	Lumafluor	R170
Buprenorfina	Apoteket AB
Urządzenia			od RSG
Nożyczki	VWR	233-1552	Od Biochem
Pęseta	VWR	232-0007
Kleszcze	VWR	232-0120
Uchwyt do skalpela	VWR	RSGA106.621	Numer 20
Skalpel	VWR	RSGA106.200
Rama stereotaktyczna	Stoelting Europe	51500D
Szyny do uszu myszy	Stoelting Europe	51648	5 ul
Strzykawka z wyjmowaną igłą	Hamilton Company	65	0,75 średnica wewnętrzna i 1,5 średnica zewnętrzna.
Szklane kapilary	Stoelting	50811
Ściągacz do kapilar szklanych	Firma	Sutter P-1000
Wiertło dentystyczne	Agnthos AB	1464
Golarka	Agnthos AB	GT420
Izofluran Komora i pompa	Agnthos AB	8323101	2 mL
Strzykawki	Merck	Z118400-30EA	25G
Igły	Merck	Z192414 Aldrich
Adapter myszy i noworodka dla szczurów do stereotaktycznego ramki	Stoelting	51625
Poduszka grzewcza	Braintree scientific, inc	53800M
Gaza bawełniana	Fisher Scientific	22-037-902
Gumowa rurka	Elfa Distrelec	HFT-A-9.5/4.8 PO-X BK 150
Waciki bawełniane	Fisher Scientific	18-366-473

Solingen