Wizualizacja zakrzepów mózgowych myszy za pomocą obrazowania fluorescencyjnego w bliskiej podczerwieni

Wszystkie procedury dotyczące próbek zwierzęcych zostały poddane przeglądowi i zatwierdzone przez odpowiednią komisję ds. oceny etycznej zwierząt.

1. Obrazowanie skrzepliny ex vivo w bliskiej podczerwieni (NIRF) tkanki mózgowej

1. Po dekapitacji usuń skórę głowy i przetnij czaszkę nożyczkami od otworu wielkiego w kierunku szwu strzałkowego. Usuń sklepienie czaszki, ostrożnie podnosząc krawędzie naciętej czaszki za pomocą nożyczek, unikając obrażeń leżącego poniżej mózgu, odsłaniając w ten sposób półkule.
2. Wytnij nerwy wzrokowe w podstawie mózgu jak najbliżej powierzchni mózgu, ponieważ mogą one nakładać się na krąg tętnic Willisa (COW), które powinny być uwidocznione na obrazowaniu fluorescencyjnym w bliskiej podczerwieni (NIRF). Następnie, aby uwidocznić "środkową tętnicę mózgową (MCA) / przednią tętnicę mózgową (ACA) / dystalną tętnicę szyjną wewnętrzną (ICA)" w kształcie litery Y do obrazowania skrzepliny NIRF, wytnij dystalne ICA jak najdalej do powierzchni mózgu po delikatnym ściśnięciu podstawy móżdżku, aby odsłonić punkty cięcia (ryc. 1A).
3. Wykonaj obrazowanie NIRF (wzbudzenie / emisja, 675 / 690 nm; ekspozycja 1 s) usuniętej tkanki mózgowej z jej podstawą skierowaną do góry (ryc. 1B, C), która wizualizuje fluorescencyjnie znakowaną chorobę zakrzepowo-zatorową w tętnicach krowy (ryc. 1D). Następnie wykonaj dodatkowe obrazowanie z wierzchołkiem mózgu skierowanym do góry, co uwidoczni korową chorobę zakrzepowo-zatorową. Unikaj wysuszania mózgu, nakładając kilka kropel soli fizjologicznej na tkankę.

Rysunek 1: Przegląd obrazowania zakrzepowo-zatorowego mózgu metodą Ex Viv o Near-Infrared fluorescencyjnym (NIRF). (A i B) Reprezentatywna tkanka mózgowa została usunięta od myszy z udarem zakrzepowo-zatorowym. Podejmij środki ostrożności, aby nie stracić choroby zakrzepowo-zatorowej (czerwona strzałka) w środkowej tętnicy mózgowej (MCA) – obszarze rozwidlenia przedniej tętnicy mózgowej (ACA) dystalnej tętnicy szyjnej wewnętrznej (ICA, niebieskie strzałki) podczas usuwania mózgu. (C oraz D) Ex vivo Obrazowanie skrzepliny NIRF. Tkanka mózgowa jest umieszczana w światłoszczelnej komorze obrazownika NIRF (C) w celu wizualizacji skrzepliny (czerwona strzałka w D) wstępnie znakowanej markerem fluorescencyjnym C15 cyjaniny 5,5 (Cy5,5) przed zatorową niedrożnością obszaru rozwidlenia MCA-ACA.