Wizualizacja zakrzepów mózgowych myszy za pomocą obrazowania fluorescencyjnego w bliskiej podczerwieni

Streszczenie

Źródło: Kim, D. E., et al. Połączone obrazowanie fluorescencyjne w bliskiej podczerwieni i mikrotomografia komputerowa do bezpośredniej wizualizacji choroby zakrzepowo-zatorowej mózgu. J. Vis. Exp. (2016)

Ten film przedstawia obrazowanie fluorescencyjne w bliskiej podczerwieni (NIRF) w celu wizualizacji skrzeplin w wyciętej tkance mózgowej znakowanej sondą specyficzną dla fibryny. Światło bliskiej podczerwieni pobudza sondę, powodując fluoryzację skrzepliny, umożliwiając wizualizację skrzeplin o wysokim kontraście w głównej tętnicy mózgowej i małych korowych naczyniach krwionośnych.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące próbek zwierzęcych zostały poddane przeglądowi i zatwierdzone przez odpowiednią komisję ds. oceny etycznej zwierząt.

1. Obrazowanie skrzepliny ex vivo w bliskiej podczerwieni (NIRF) tkanki mózgowej

1. Po dekapitacji usuń skórę głowy i przetnij czaszkę nożyczkami od otworu wielkiego w kierunku szwu strzałkowego. Usuń sklepienie czaszki, ostrożnie podnosząc krawędzie naciętej czaszki za pomocą nożyczek, unikając obrażeń leżącego poniżej mózgu, odsłaniając w ten sposób półkule.
2. Wytnij nerwy wzrokowe w podstawie mózgu jak najbliżej powierzchni mózgu, ponieważ mogą one nakładać się na krąg tętnic Willisa (COW), które powinny być uwidocznione na obrazowaniu fluorescencyjnym w bliskiej podczerwieni (NIRF). Następnie, aby uwidocznić "środkową tętnicę mózgową (MCA) / przednią tętnicę mózgową (ACA) / dystalną tętnicę szyjną wewnętrzną (ICA)" w kształcie litery Y do obrazowania skrzepliny NIRF, wytnij dystalne ICA jak najdalej do powierzchni mózgu po delikatnym ściśnięciu podstawy móżdżku, aby odsłonić punkty cięcia (ryc. 1A).
3. Wykonaj obrazowanie NIRF (wzbudzenie / emisja, 675 / 690 nm; ekspozycja 1 s) usuniętej tkanki mózgowej z jej podstawą skierowaną do góry (ryc. 1B, C), która wizualizuje fluorescencyjnie znakowaną chorobę zakrzepowo-zatorową w tętnicach krowy (ryc. 1D). Następnie wykonaj dodatkowe obrazowanie z wierzchołkiem mózgu skierowanym do góry, co uwidoczni korową chorobę zakrzepowo-zatorową. Unikaj wysuszania mózgu, nakładając kilka kropel soli fizjologicznej na tkankę.

Wyniki

Rysunek 1: Przegląd obrazowania zakrzepowo-zatorowego mózgu metodą Ex Viv o Near-Infrared fluorescencyjnym (NIRF). (A i B) Reprezentatywna tkanka mózgowa została usunięta od myszy z udarem zakrzepowo-zatorowym. Po...

Materiały