Adaptacja neuronalna do powtarzającego się kondycjonowania wstępnego hipoksyjnego u myszy

Streszczenie

Źródło: Poinsatte, K., et al., K. Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Ocluzion in Mys. J. Vis. Exp. (2015)

Ten film pokazuje metodę powtarzalnego kondycjonowania wstępnego hipoksyjnego (RHP) poprzez wystawienie myszy na kontrolowane cykle hipoksji przed wywołaniem udaru niedokrwiennego. Eksperyment ocenia jego wpływ na stabilność bariery krew-mózg, adaptację neuronów i stan zapalny.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Powtarzalne kondycjonowanie wstępne hipoksyjności

:

1. Zaprojektuj na zamówienie cztery przepływomierze na regulatorach gazu i przymocuj je do standardowych 15-litrowych komór indukcyjnych z rurkami z polichlorku winylu (PVC), aby umożliwić przepływ sprężonego gazu ze zbiorników tlenu (O₂) do komór przez otwór wlotowy.
2. Podziel myszy na 2 grupy: grupę powtarzającego się kondycjonowania wstępnego hipoksyjnego (RHP), która otrzymuje jednocześnie ekspozycję na 8% i 11%_O2, oraz grupę kontrolną, która otrzymuje jednocześnie ekspozycję na 21% O₂ (powietrze w pomieszczeniu).
3. Zdejmij górną pokrywę filtra z każdej klatki i umieść klatkę z nienaruszonymi butelkami z żywnością i wodą w komorach podłączonych do odpowiednich zbiorników O₂ . Zamknij i zabezpiecz pokrywę komory.
   1. Otwórz główny zawór gazowy dla zbiorników i ustaw początkowy przepływ dla każdej komory indukcyjnej na 2 litry na minutę (LPM) przez pierwsze 5 minut ekspozycji. Zmniejsz natężenie przepływu do 1 l/min przez pozostałą część ekspozycji.
   2. Pod koniec ekspozycji zmniejsz przepływ do 0 l/min i zamknij zawory gazowe w zbiornikach.
   3. Otwórz pokrywy komory i załóż górną pokrywę filtra na każdą klatkę. Umieścić koszyki w standardowej obudowie do czasu następnej ekspozycji na niedotlenienie.
4. Po każdym użyciu spryskaj każdą komorę indukcyjną NPD (Steris) lub równoważnym środkiem dezynfekującym/dezodorantem.
5. Wystawiaj zarówno myszy 21%, jak i RHP o tej samej porze dnia przez dwa tygodnie.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Przepływomierze, regulatory	VetEquip, Inc	Zamówienie specjalistyczne	Cztery przepływomierze są przymocowane do elastycznej rurki PVC o średnicy 6,0 mm, która łączy się z portem wlotowym w każdej komorze indukcyjnej za pomocą plastikowego złącza żeńskiego. Te przepływomierze są przykręcone do metalowego pręta o wymiarach 6,5" x 1" x 1". Ten metalowy pręt jest przykręcony do manometru MI-246-P z wylotem DISS. Ten manometr i przepływomierz można przymocować do każdej nowej butli z gazem za pomocą klucza.
Zbiornik 21% O₂	AirGas	OX USP200
11% Zbiornik O₂	AirGas	Zamówienie
8% Zbiornik O₂	AirGas	Specjalistyczne zamówienie
Komory indukcyjne 15 L	VetEquip	941454

specjalne