Obrazowanie bioluminescencyjne immunokompetentnego mysiego modelu glejaka

Streszczenie

Źródło: Clark, A.J., et al. Obrazowanie bioluminescencyjne immunokompetentnego modelu zwierzęcego glejaka. J. Vis. Exp. (2016)

Ten film przedstawia obrazowanie bioluminescencyjne w celu śledzenia progresji glejaka w immunokompetentnym modelu myszy, przy użyciu komórek nowotworowych eksprymujących lucyferazy i lucyferyny do nieinwazyjnego ilościowego określenia wzrostu guza.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Obrazowanie bioluminescencyjne wzrostu guza GL261

1. Rozpyl dużą ilość środka dezynfekującego (0,05% roztworu chlorku dimetyloamonu) na czysty ręcznik papierowy. Użyj ręcznika papierowego nasączonego środkiem dezynfekującym, aby dokładnie wytrzeć arkusz, stożki nosowe i przegrodę wewnątrz komory obrazowania, w której zwierzęta będą miały kontakt z urządzeniem. Dokładnie wytrzyj wszystkie powierzchnie czystym, suchym ręcznikiem papierowym. Powtórz to jeszcze raz i odczekaj 5 minut.
2. Zainicjuj stację obrazowania.
3. Znieczulić mysz mieszaniną 300 μl zawierającą 200 μl ketaminy/ksylazyny i 100 μl lucyferyny (sól potasowa D-lucyferyny, 150 mg/kg) przez wstrzyknięcie dootrzewnowe.
4. Odczekaj 10 minut po wstrzyknięciu i sprawdź, czy myszy są całkowicie pod narkozą, szczypiąc ogon. Aby skonfigurować system obrazowania, wybierz "Luminescencyjny", "Auto" czas ekspozycji i "Średni" bining. Umieść myszy na stacji obrazowania i kliknij przycisk "Pobierz", aby rozpocząć obraz. Upewnij się, że czas po wstrzyknięciu jest zgodny z każdą sesją obrazowania.
5. Po pomyślnym pobraniu obrazu powinno pojawić się okno obrazu i paleta narzędzi. Kliknij obszar zainteresowania (ROI) lub "Narzędzia ROI" i wybierz "auto" z ikony koła. Aby zdefiniować ROI, okrąż obszar sygnału na obrazie, a następnie wykonaj pomiary ROI jako jednostkę fotonów/s/sr/cm2.
6. Wyjmij myszy z komory obrazowania i monitoruj je, aż zaczną poruszać się i zachowają normalną aktywność. Zazwyczaj czas rekonwalescencji wynosi około 15 minut. Nie należy wracać myszy do klatki z innymi zwierzętami, dopóki w pełni nie wyzdrowieją ze znieczulenia.
7. Monitoruj wzrost guza za pomocą obrazowania bioluminescencyjnego dwa razy w tygodniu, aż zwierzęta wykażą następujące objawy: utrata masy ciała (utrata ponad 20% w stosunku do masy przed implantacją), brak apetytu (całkowita anoreksja przez 24 godziny) i brak trwałej, celowej reakcji na delikatne bodźce (słaba próba wstania), w którym to czasie powinny zostać poddane eutanazji.
8. Znormalizuj wartości luminescencji dla każdego dnia w stosunku do odpowiadających im odczytów uzyskanych w pierwszym dniu obrazowania bioluminescencyjnego (ryc. 1A).
9. Do analizy statystycznej należy wygenerować krzywe przeżycia za pomocą estymatora Kaplana-Meiera i porównać różnice między krzywymi przeżycia za pomocą testu logarytmicznego.

Wyniki

Rysunek 1. Ekspresja lucyferazy nie wpływa na wzrost guza in vivo i przeżycie zwierząt. (A) Monitorowanie bioluminescencji wykazuje postępujący wzrost wewnątrzczaszkowego GL261. Guz Luc (komórki glejaka GL261 wyrażające lucyferazę) u myszy C57BL / 6. (B) ...

Materiały