Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Wstrzyknięcia domięśniowe na płytkach końcowych silnika
- Szklane mikropipety należy ciągnąć za pomocą ściągacza do mikropipet (zaleca się stosowanie stopniowanych mikropipet z tłokami). Za pomocą mikroskopu preparacyjnego rozbij końcówki mikropipet parą kleszczyków tak, aby wewnętrzna średnica światła mikropipety wynosiła około 0,5 mm.
- Upewnij się, że wszystkie używane narzędzia chirurgiczne są świeżo autoklawowane, a obszar operacyjny jest sterylny.
- Napełnij mikropipety fluoro-złotem (5% w wodzie destylowanej).
- Wywołać znieczulenie u zwierzęcia za pomocą izofluranu (4% wO2) w komorze indukcyjnej. Sprawdź, czy nie ma odruchu prostującego i upewnij się, że go nie ma przed wyjęciem go z komory indukcyjnej. Zabezpiecz stożek nosowy nad pyskiem szczura i podaj izofluran (2% wO2) w celu utrzymania znieczulenia. Uszczypnij palce u nóg zwierzęcia i delikatnie dotknij oka zwierzęcia, aby upewnić się, że zarówno wycofanie pedału, jak i odruchy rogówkowe są nieobecne.
UWAGA: Można również zastosować mieszaninę ketaminy i ksylazyny (odpowiednio 80 i 10 mg/kg, podawane dootrzewnowo). Ketamina jest lekiem z grupy 8 ("kontrolowanym") i niezbędne protokoły związane z zakupem, używaniem, przechowywaniem i utylizacją leku będą musiały być przestrzegane. - Nałóż smar do oczu, aby zapobiec wysuszeniu oczu w trakcie zabiegu.
- Ogol docelową kończynę i użyj gazy, aby przetrzeć ogolony obszar trzema naprzemiennymi peelingami chlorheksydyny i 70% alkoholu. Przenieś zwierzę na obszar operacyjny.
- Umieść zwierzę na czystym podkładzie i ustaw je odpowiednio, aby zapewnić dobry dostęp do docelowego mięśnia (mięśni).
- Użyj kleszczy z uchwytami do zębów, aby unieść skórę nad docelowym mięśniem z dala od leżącego poniżej mięśnia i wykonaj nacięcie w skórze nożyczkami chirurgicznymi. Upewnij się, że nacięcie jest wystarczająco duże, aby całkowicie odsłonić interesujący mięsień (mięśnie). Upewnij się, że przerwa w pracy deski rozdzielczej jest minimalna.
- Użyj zdjęć płyty końcowej silnika (MEP), aby mentalnie przetransponować położenie i kształt obszaru MEP na mięsień(y).
UWAGA: Drobny marker filcowy może pomóc w odtworzeniu obszaru MEP ze zdjęcia na interesujący mięsień (mięśnie). - Wykonaj wielokrotne wstrzyknięcia na całej długości obszaru MEP (w przypadku Fluoro-Gold powinny wystarczyć 3 do 4 wstrzyknięć po 1-2 μl każdy). Delikatnie przetrzyj mięsień (mięśnie), aby usunąć wszelkie przesiąkanie.
- Zbliż do siebie dwa końce naciętej skóry kleszczami i zamknij ranę klipsami chirurgicznymi. Naciekać 0,1 ml bupiwakainy (0,5% w wodzie) (lub innych środków znieczulających miejscowo) na całej długości rany.
- Wyłącz urządzenie anestezjologiczne i monitoruj zwierzę, aż w pełni wyzdrowieje ze znieczulenia.
- Należy odczekać 14 dni między podaniem wstrzyknięć domięśniowych a perfuzją zwierząt.
