Koherentna spektroskopia Ramana antystokesa do wizualizacji mielinizowanych neuronów w tkance mózgowej myszy

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: McCullagh, E. A., et al. Koherentna spektroskopia Ramana Antystokesa (CARS) do obrazowania mielinizacji w wycinkach mózgu. J. Vis. Exp. (2022)

Film demonstruje obrazowanie fluorescencyjne i koherentną spektroskopię Ramana antystokesa (CARS) w celu wizualizacji architektury neuronalnej w tkance mózgowej gryzoni. Barwienie Nissl znakuje ciała komórkowe poprzez wiązanie się z rybosomalnym RNA, podczas gdy obrazowanie CARS celuje w mielinę bogatą w lipidy za pomocą sygnałów indukowanych laserem. Nałożenie na siebie obrazów fluorescencyjnych i CARS zapewnia szczegółowy widok ciał komórkowych i mielinizowanych aksonów.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące próbek zwierzęcych zostały poddane przeglądowi i zatwierdzone przez odpowiednią komisję ds. oceny etycznej zwierząt.

1. Barwienie

Sekcje bez barwników pływających dla Nissl, do wizualizacji ciał komórkowych (1:100), w pożywce z przeciwciałami (pożywka AB: 0,1 M bufor fosforanowy (PB: 50 mM KH2PO4, 150 mM Na2HPO4), 150 mM NaCl, 3 mM Triton-X, 1% albuminy surowicy bydlęcej (BSA)) przez 30 minut w temperaturze pokojowej na standardowym wytrząsarce laboratoryjnej.
1. Chroń sekcje przed światłem za pomocą folii aluminiowej i/lub osłony. Długości fal 550 nm lub niższe są zgodne z obrazowaniem CA....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Rysunek 1: Obrazowanie CARS można połączyć z obrazowaniem immunofluorescencyjnym. Wykresy pokazują, że obrazowanie CARS odbywa się w widmie sygnału czerwonego 660/640 nm. Ta długość fali jest wystarczająco oddalona od zakresu zielonego, nieb.......