$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Mysi model niedrożności tętnicy środkowej mózgu (MCAO)
- Użyj samców myszy C57BL/6 w wieku 6 tygodni i o wadze 22-25 g. Zapewnij wszystkim zwierzętom swobodny dostęp do standardowej karmy i wody oraz trzymaj je w środowisku o kontrolowanej temperaturze (22 ±1°C) i 12-godzinnym cyklu światła/ciemności.
- Podziel myszy na grupy po sześć myszy każda, które powinny składać się z pozorowanych grup normalnych, kontrolnych i leczonych Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GRex).
- Wykonaj operację MCAO w grupie kontrolnej i grupie leczonej GRex za pomocą stereomikroskopu.
- Wywołaj znieczulenie wziewne u myszy za pomocą 2% izofluranu w 70% podtlenku azotu (N₂O) i 30% tlenu (O₂). Znieczulenie jest uważane za wystarczające, gdy mysz przestaje reagować na bodziec mechaniczny przyłożony do jej ogona. Utrzymuj temperaturę ciała myszy na poziomie 36,5 ± 0,5 °C za pomocą koca utrzymującego temperaturę ciała podłączonego do termometru.
- Usuń wszystkie włosy na klatce piersiowej i szyi myszy poprzez golenie, a następnie użycie kremu do depilacji. Zdezynfekuj miejsce operowane skóry peelingiem betadynowym na przemian dwukrotnie z alkoholem, a następnie wykonaj nacięcie o długości około 2 cm za pomocą ostrza chirurgicznego na środku szyi. Ostrożnie odizoluj lewą tętnicę szyjną wspólną (LCCA), tętnicę szyjną zewnętrzną i odgałęzienie tętnicy szyjnej wewnętrznej od otaczających tkanek łącznych.
- Podwiązać tętnicę szyjną zewnętrzną i tętnicę szyjną wspólną za pomocą szwu chirurgicznego (szew jedwabny 4-0, węzeł półzaczepiający), aby tymczasowo zablokować przepływ krwi do tętnicy szyjnej wewnętrznej podczas operacji.
- Wprowadzić nylonowy szew pokryty silikonem (żyłka 8-0 o długości 11 mm) przez tętnicę szyjną wewnętrzną do początku lewego MCA. Dostosuj grubość pokrytej silikonem części filamentu w zakresie 0,10-0,12 mm.
- Zmierz spadek względnego przepływu krwi w mózgu (rCBF) w MCA za pomocą laserowego przepływomierza dopplerowskiego. MCAO zostanie potwierdzone, gdy rCBF zostanie utrzymany na poziomie < 20% wartości stanu spoczynku przez cały okres niedokrwienia.
- Przymocuj wprowadzony filament do naczynia krwionośnego na 2 godziny, podczas gdy tętnica mózgowa jest niedrożna, a następnie ostrożnie wycofaj włókno, aby przywrócić przepływ krwi przez 22 godziny reperfuzji. Zszyj skórę, szyjąc w pięciu miejscach (szew jedwabny 3-0, dwa węzły półzaczepowe) i pozwól każdej myszy obudzić się ze znieczulenia.