Wywoływanie ostrego napadu elektrowstrząsowego w modelu szczurzym

Streszczenie

Źródło: Jang, S., et al, Electroconvulsive Seizures in Rats and Fractionation of Their Hippocampi to Examine Seizure-induced Changes in Postsynaptic Density Proteins. J. Vis. Exp. (2017)

Ten film pokazuje indukcję ostrego napadu elektrowstrząsowego (ECS) w modelu szczurzym w celu zbadania neuroplastyczności wywołanej napadem. Naukowcy stosują stymulację elektryczną za pomocą elektrod z klipsem do ucha, wywołując nadpobudliwość neuronów i klonus. Model ten pomaga badać plastyczność synaptyczną, mechanizmy napadów i efekty terapeutyczne związane z terapią elektrowstrząsową (ECT).

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Indukcja ostrego ECS

UWAGA: Patrz rysunek 1B, górny panel.

1. Zwilż klipsy do uszu sterylną solą fizjologiczną i upewnij się, że są nasycone.
2. Zwilż uszy szczura sterylną solą fizjologiczną, owijając je gazą nasączoną solą fizjologiczną. Gdy będą mokre, usuń gazę.
3. Przymocuj jeden klips na ucho i umieść poza głównym pasmem chrząstki.
4. Potwierdź na maszynie ECS, że ustanowiona została prawdziwa pętla; jeśli nie, na maszynie pojawi się komunikat o błędzie lub odczyt liczby "1".
5. Noś grubą, niemetalową rękawicę. Trzymając szczura delikatnie w dłoni w rękawiczce, naciśnij przycisk "SHOCK" przez kilka sekund i powoli zwolnij uchwyt szczura, aby obserwować napad. W przypadku pozorowanej kontroli "bez napadu" (NS) należy obchodzić się ze szczurem w identyczny sposób, ale nie dostarczać prądu.
6. Odłącz klipsy uszne, gdy zaczyna się klonus i rejestruj zachowanie napadowe zgodnie ze zmienioną skalą Racine'a, która obejmuje "ruchy ust i twarzy" (etap 1), "głową" (etap 2), "klonus kończyn przednich" (etap 3), "wychowywanie z klonusem kończyn przednich" (etap 4) oraz "podnoszenie i opadanie z klonusem kończyn przednich" (etap 5). Napad powinien trwać około 10 sekund; Zapisz czas trwania napadu za pomocą timera.
7. Po zakończeniu napadu należy zwrócić szczura do jego klatki domowej. Monitoruj szczura przez kolejne 5 minut, aby upewnić się, że szczur wyzdrowieje po napadach. Trzymaj go pojedynczo w klatce i zwróć klatkę do sali pooperacyjnej.
8. Powtórz indukcję ECS na następnym szczurze.
9. Monitoruj szczury przez pozostałą część dnia i co najmniej raz rano i raz po południu następnego dnia, aż zostaną poddane eutanazji do eksperymentów.
   UWAGA: Metoda indukcji ECS może prowadzić do objawów klinicznych jako przypadkowego efektu ubocznego, który wymaga uwagi. Na przykład protokół indukcji ECS może wywołać napady trwające dłużej niż 15 s i powodować niepotrzebny stres u szczurów. W takim przypadku należy przerwać napad za pomocą diazepamu (10 mg/kg, i.p.) lub pentobarbitalu (25 - 30 mg/kg, i.p.). Jeśli u szczurów rozwinie się niewydolność oddechowa lub poważne nieprawidłowości behawioralne po ustaniu napadów, należy je poddać eutanazji przez wdychanie dwutlenku węgla, a następnie ścinanie głowy.

Wyniki

Rysunek 1: Schemat indukcji ostrego ECS i przewlekłego ECS. (A) Szczur został podłączony do generatora impulsów za pomocą elektrod z klipsem do ucha, a wstrząs elektryczny (55 mA, 100 impulsów / s przez 0,5 s) został zastoso...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Sprague-Dawley szczur	Charles River Laboratories		ECS dostarcza
generator impulsów	Ugo Bsile, Comerio, Włochy	57800	ECS dostarcza