1. Pojedyncza i podwójna stymulacja TMS mięśni FCR i ES
- Podstawowe środki ostrożności: Przed przeprowadzeniem TMS u człowieka konieczne jest uprzednie przeprowadzenie przesiewowej oceny bezpieczeństwa pod kątem narażenia na pole magnetyczne. W naszym laboratorium stosujemy wytyczne przesiewowe opracowane przez Institute for Magnetic Resonance Safety, Education and Research. 10W naszym laboratorium rutynowo wykluczamy również osoby z rodzinną historią napadów padaczkowych. Wymagamy także, aby osoby poddawane TMS mięśni ES nosiły zatyczki do uszu oraz ochraniacz na zęby ze względu na mniej ogniskowy charakter i większe natężenie stymulacji.
- Rejestracje elektryczne: Aby zbadać odpowiedzi na TMS w układzie ruchowym, konieczne jest rejestrowanie sygnałów elektromiograficznych (EMG) z mięśni szkieletowych. W przypadku mięśnia FCR umieszczamy elektrody powierzchniowe na przedramieniu, stosując bipolarny układ elektrod rozmieszczonych podłużnie nad mięśniem na ogolonej i zeskórnowanej skórze, zgodnie z naszym wcześniejszym opisem. 7,11W przypadku mięśni prostowników grzbietu stosujemy podobny układ elektrod, rozmieszczony podłużnie nad mięśniami na poziomie kręgów L3-L5 na ogolonej i zeskrobanej skórze. 8.
- Orientacja cewki TMS: Aby w sposób przeważający aktywować neurony korowo-rdzeniowe transsynaptycznie, konieczne jest odpowiednie ustawienie cewki TMS. 12W przypadku mięśni FCR cewkę TMS w kształcie ósemki o rozmiarze 70 mm umieszczamy stycznie do skóry głowy, pod kątem 45 stopni względem linii środkowej, tak aby indukowany prąd płynął w kierunku boczno-tylnym do przyśrodkowo-przedniego. W przypadku mięśni ES stosujemy cewkę dwustożkową, która charakteryzuje się większą głębokością penetracji, co jest konieczne ze względu na głębsze położenie reprezentacji tych mięśni w homunkulusie. W tym przypadku cewka jest ustawiona tak, aby prąd płynął w kierunku przednio-tylnym. Nasza cewka została zmodyfikowana poprzez dodanie autorskiego systemu mocowania laserowego, który ułatwia późniejsze ponowne pozycjonowanie cewki dwustożkowej.
- Identyfikacja „hotspotu”Konieczne jest określenie miejsca stymulacji, które wywołuje największy potencjał wywołany ruchowo. W przypadku mięśnia zginacza promieniowego nadgarstka (FCR) wykonujemy to poprzez delikatne przesuwanie cewki TMS w bardzo małych odstępach i ustalenie miejsca, w którym obserwujemy największą amplitudę potencjału wywołanego ruchowo. Po zlokalizowaniu tego miejsca zaznaczamy je niezmywalnym tuszem na skórze głowy lub czepku z lycry. TMS mięśni prostowników grzbietu (ES) jest dla badanych znacznie bardziej niekomfortowy niż TMS mięśni kończyn górnych. W związku z tym usprawniliśmy protokół TMS dla mięśni ES, aby zwiększyć jego tolerancję i wykonalność. W tym przypadku, zamiast lokalizować tzw. „hotspot”, wykorzystujemy pomiary antropometryczne do zidentyfikowania wierzchołka czaszki. Konkretnie, za wierzchołek uznajemy punkt przecięcia płaszczyzny strzałkowej (między nasionem a inionem) i czołowej (pomiędzy tragusami) czaszki.
- Pozycjonowanie biomechaniczne: W naszym laboratorium podczas przeprowadzania TMS mięśni FCR badani siedzą z ramieniem spoczywającym w pozycji wyprostowanej w dynamometrze BioDex System 4 (Rysunek 2). Należy jednak zauważyć, że jest to jedynie przykład jednej z możliwych konfiguracji do pomiaru wywieranych sił. W przypadku mięśni ES badani są proszeni o przyjęcie wyprostowanej pozycji siedzącej z dłońmi spoczywającymi na kolanach (Rysunek 3). Siedzą oni na krześle obrotowym z udem w pozycji 90° w stosunku do tułowia, podudzie w ~45° w stosunku do uda, a kręgosłup lędźwiowy w pozycji neutralnej8.
- Kwantyfikacja progu motorycznegoW przypadku mięśnia zginacza promieniowego nadgarstka (FCR) próg motoryczny (MT) wyznaczamy poprzez podawanie pojedynczych impulsów przy stopniowo zwiększanej intensywności stymulacji, aż do momentu, gdy potencjały wywołane ruchowo osiągną amplitudę od szczytu do szczytu większą niż 50 mikrowoltów w ponad 50% prób (Rycina 4). Aby usprawnić protokół TMS oraz zwiększyć tolerancję i wykonalność badania, nie wyznaczamy progu motorycznego w mięśniach ES z taką samą precyzją, jak w przypadku mięśni kończyny górnej. Zamiast tego rozpoczynamy protokół TMS od podania początkowego pojedynczego impulsu o natężeniu 50% maksymalnej mocy stymulatora, aby ustalić, czy intensywność ta znajduje się powyżej czy poniżej progu motorycznego. Jeśli przy tej intensywności stymulacji zaobserwowany zostanie MEP — zdefiniowany jako możliwy do rozróżnienia MEP w stosunku do poziomu tła EMG — intensywność zostaje zmniejszona do 40% mocy stymulatora, aby określić, czy ta intensywność stymulacji jest pod- czy nadprogowa. 8.
- Ilościowe oznaczanie amplitudy MEP przy użyciu jednopulsowej TMSAby zbadać amplitudę potencjału wywołanego ruchowo (MEP) mięśnia FCR, podajemy pojedynczy impuls TMS w obrębie „hotspotu” z natężeniem równym 130% progu ruchowego, a następnie obliczamy amplitudę od szczytu do szczytu. Zazwyczaj normalizujemy ten wynik do maksymalnego złożonego potencjału czynnościowego włókien mięśniowych, zaobserwowanego po supramaksymalnej stymulacji elektrycznej nerwu pośrodkowego. Należy zauważyć, że wielkość MEP jest silnie zależna od stopnia pobudliwości kory. W związku z tym, gdy impuls TMS jest podawany podczas skurczu tła, kiedy pobudliwość kory jest zwiększona, wielkość MEP gwałtownie wzrasta. W przypadku mięśni ES podajemy pojedynczy impuls TMS w obrębie wierzchołka z natężeniem o 40 lub 50% wyższym od natężenia podprogowego. 8Niestety, ze względu na brak możliwości zastosowania stymulacji elektrycznej nerwów obwodowych unerwiających mięśnie ES, nie jesteśmy w stanie znormalizować tych potencjałów wywołanych ruchowo do złożonego potencjału czynnościowego włókien mięśniowych.
- Kwantyfikacja czasu trwania okresu ciszy z wykorzystaniem jednopulsowej TMSPodanie impulsu TMS do kory podczas skurczu mięśnia wywołuje potencjał wywołany ruchowy, po którym następuje wyciszenie elektryczne przed wznowieniem aktywności; zjawisko to świadczy o hamowaniu korowo-rdzeniowym i jest powszechnie określane jako okres ciszy. 13 (Rysunek 5). Aby określić czas trwania okresu ciszy, podajemy pojedynczy impuls TMS w tzw. „hotspot” z intensywnością równą 130% progu motorycznego, podczas gdy uczestnik badania wykonuje skurcz mięśnia zginacza nadgarstka z siłą wynoszącą 15% jego maksymalnej możliwości. Wcześniej nie określaliśmy ilościowo czasu trwania okresu ciszy w mięśniach ES; należy jednak zauważyć, że anegdotycznie obserwowaliśmy jego występowanie w tej grupie mięśniowej, gdy impuls TMS był podawany podczas skurczu tła.
- Kwantyfikacja ułatwienia wewnątrzkorowego z wykorzystaniem TMS z podwójnym impulsem: Stosujemy TMS z podwójnym impulsem w celu ilościowego określenia ułatwienia wewnątrzkorowego 6,7 (Rycina 6 i 7 przedstawiają ten pomiar odpowiednio dla mięśnia FCR i ES). W przypadku mięśnia FCR najpierw określamy natężenie bodźca niezbędne do wywołania potencjału wywołanego ruchowo o amplitudzie od 0,5 do 1,0 mV. Następnie, 15 ms przed nadprogowym impulsem testowym, podajemy podprogowy impuls warunkujący, który w naszym laboratorium jest zazwyczaj ustawiany na poziomie 70% progu ruchowego. Impuls warunkujący podany w tym odstępie czasu przed impulsem testowym zwiększy, czyli ułatwi, amplitudę potencjału wywołanego ruchowo w stopniu większym niż pojedynczy impuls nieuwarunkowany o tym samym natężeniu. Dla grupy mięśni ES natężenie impulsu warunkującego ustawia się na zaobserwowane natężenie podprogowe (40% lub 50% wyjścia stymulatora), a natężenie impulsu testowego ustawia się na wartość o 40% wyższą od poziomu podprogowego (80% lub 90% wyjścia stymulatora).8Należy zauważyć, że intensywność impulsów warunkujących może być zmieniana w zależności od celu badania. Podobnie odstępy między impulsami mogą się różnić w zależności od mięśnia i jego położenia względem kory.
- Ilościowe określanie krótkiego odstępu wewnątrzkorowej inhibicji z wykorzystaniem TMS z podwójnym impulsem: Stosujemy również TMS z podwójnym impulsem w celu ilościowego określenia krótkookresowej inhibicji wewnątrzkorowej 6,7 (Rysunki 6 i 7 przedstawiają ten pomiar odpowiednio dla mięśni FCR i ES). W tym przypadku dla obu mięśni, FCR i ES, procedury są takie same, jak opisano przy pomiarze ułatwienia wewnątrzkorowego, z wyjątkiem tego, że odstęp międzybodźcowy między dwoma impulsami zostaje skrócony do 3 ms. Ten impuls warunkujący, podany w tym przedziale czasowym przed impulsem testowym, zmniejszy lub zahamuje amplitudę potencjału wywołanego ruchowo w większym stopniu niż pojedynczy impuls niewarunkujący o tej samej intensywności.
- Kwantyfikacja długointerwałowego hamowania wewnątrzkorowego z wykorzystaniem TMS z podwójnym impulsem: Podanie dwóch identycznych nadprogowych impulsów testowych w odstępie 100 milisekund może być również wykorzystane do oceny długointerwałowego hamowania wewnątrzkorowego 6,7W tym przypadku – w odniesieniu do mięśnia FCR – potencjał wywołany motorycznie związany z drugim impulsem będzie mniejszy lub silniej zahamowany niż potencjał związany z pierwszym impulsem (rycina 8). Wcześniej nie ilościowo określaliśmy hamowania wewnątrzkorowego w długich odstępach czasu w mięśniach ES ze względu na obawy dotyczące tolerancji u badanych.
2. Reprezentatywne wyniki:
Po podaniu nadprogowego impulsu TMS, stymulowane mięśnie powinny wykazać łatwo obserwowalną odpowiedź EMG (MEP) (przedstawioną na rysunkach 4-8). Latencja między początkiem bodźca a MEP będzie różnić się w zależności od badanych grup mięśniowych, ale dla FCR wynosi ona zazwyczaj 16-19 msec (rysunek 6), a dla ES 17-22 msec (rysunek 7; należy jednak zauważyć, że u niektórych osób początek MEP w mięśniach ES jest trudniejszy do zidentyfikowania wizualnie). Należy odnotować, że podczas badania grupy mięśni ES kilka innych grup mięśniowych jest również widocznie i gwałtownie stymulowanych jednocześnie (w tym mięśnie kończyny dolnej, które są reprezentowane w tym samym ogólnym obszarze homunkulusa). Podczas pomiaru facylitacji wewnątrzkorowej amplituda MEP jest zazwyczaj większa niż ta zaobserwowana przy pojedynczym impulsie nieuwarunkowanym (rysunek 6 i 7). Jednak w naszym doświadczeniu stopień facylitacji różni się między grupami mięśni, a niektóre z nich – takie jak FCR – wykazują u wielu osób jedynie niewielką facylitację. W przypadku pomiaru krótkookresowej i długookresowej inhibicji wewnątrzkorowej zazwyczaj obserwuje się spadek amplitudy MEP w porównaniu z pojedynczym impulsem nieuwarunkowanym o tej samej intensywności (rysunki 6-8).

Rycina 1. Podstawowe mechanizmy TMS. Cewka TMS indukuje pole magnetyczne, które przenika przez skórę głowy i indukuje prąd wirowy w korze ruchowej. Prąd wirowy ten jest następnie w stanie stymulować neurony w mózgu. Rycina przedrukowana z McGinley and Clark, In Press14.

Rycina 2. Układ do przeprowadzania TMS mięśnia FCR. Zauważ rejestrację sygnałów elektromiograficznych (EMG) z przedramienia oraz cewkę TMS umieszczoną nad korą ruchową. Zazwyczaj rejestrujemy również siły mięśniowe i stosujemy elektryczną stymulację nerwów obwodowych w celu uzyskania maksymalnego złożonego potencjału czynnościowego włókien mięśniowych, co jest przydatne w interpretacji wartości amplitudy (np. można wyrazić MEP w stosunku do maksymalnej odpowiedzi mięśniowej, zamiast podawać bezwzględną wartość w mV, która może być w dużym stopniu wpływana przez czynniki niefizjologiczne, takie jak tkanka tłuszczowa podskórna). Rycina przedrukowana z następujących publikacji: Clark et al. 20089, Clark et al., 20106 oraz McGinley et al. 20107.

Rycina 3. Układ do przeprowadzania TMS mięśni prostowników grzbietu. Rycina przedrukowana z Goss et al. 20118.

Rycina 4. Przykład wyznaczania progu motorycznego. Zapisy EMG przedstawiają odpowiedź w postaci potencjału wywołanego motorycznie (MEP) na stopniowo zwiększane natężenia bodźca (wyrażone jako procent wyjściowej mocy stymulatora (SO)). Należy zauważyć, że przy niższych natężeniach (28-30% SO) wywołano bardzo małe MEP (podprogowe), natomiast przy 32% SO wywołano MEP, który osiągnął próg motoryczny (zazwyczaj definiowany jako MEP o amplitudzie p-p > 50 μV).
Rycina powtórzona z opracowania McGinley and Clark, In Press14.

Rysunek 5. TMS podczas skurczu: potencjał wywołany ruchowy i okres ciszy. Okres ciszy obserwuje się, gdy badany wykonuje lekki skurcz, a do kory ruchowej przyłożony zostaje pojedynczy bodziec. Pierwsza część okresu ciszy wynika z hamowania rdzeniowego, natomiast druga przypisana jest hamowaniu korowemu, a konkretnie receptorom GABAB. Nie istnieje jedna uzgodniona metoda kwantyfikacji czasu trwania okresu ciszy, jednak nasze wyniki wskazują, że najbardziej wiarygodne jest definiowanie go od momentu rozpoczęcia bodźca lub rozpoczęcia MEP do momentu powrotu sygnału elektromiograficznego interferencyjnego z aktywności dobrowolnej15.
Rysunek przedrukowano z Clark and Quick, 201116 oraz McGinley and Clark, In Press14.

Rysunek 6. Zmiana amplitudy potencjału wywołanego ruchowo podczas TMS z podwójnym impulsem w mięśniu FCR. Pomiar krótkodystansowego wewnątrzkorowego hamowania (SICI) oraz wewnątrzkorowego ułatwienia (ICF). Aby ilościowo określić SICI i ICF, impuls warunkujący (CP) ustawia się poniżej progu ruchowego, a impuls testowy (TP) tak, aby wywołać MEP o amplitudzie od 0,5-1 mV. Przy krótkich odstępach międzyimpulsowych (np. 3 ms) CP hamuje MEP w porównaniu do samego TP (SICI), natomiast przy dłuższych odstępach międzyimpulsowych (np. 15 ms) ułatwia ono MEP (ICF).
CP: impuls warunkujący, TP: impuls testowy Rycina przedrukowana z Clark et al., 20106, McGinley et al. 201014, Clark and Quick, 201116 oraz McGinley and Clark, w druku14.

Rycina 7. Zmiana wielkości potencjału wywołanego ruchowo podczas TMS z podwójnym impulsem w mięśniu ES. Przykład zapisów EMG z mięśni prostowników grzbietu oraz pomiar krótkookresowego hamowania wewnątrzkorowego (SICI) i ułatwienia wewnątrzkorowego (ICF).
Rycina przedrukowana z Goss et al. 20118.

Rycina 8. Zmiana amplitudy potencjału wywołanego ruchowo podczas TMS z podwójnym impulsem. Pomiar długookresowego wewnątrzkorowego hamowania (LICI). Aby określić LICI, podaje się dwa impulsy testowe w odstępie międzybodźcowym 100 ms. Skutkuje to zahamowaniem drugiego MEP w porównaniu z pierwszym MEP.
Rycina przedrukowana z Clark et al., 20106, McGinley et al. 20107 oraz McGinley i Clark, w prasie14.