1. Rekonstrukcja trójwymiarowych powierzchni kory mózgowej
Ta pierwsza część protokołu wykorzystuje standardowy potok przetwarzania FreeSurfer, zgodnie z opisem w Wiki (http://surfer.nmr.mgh.harvard.edu/fswiki). Należy zauważyć, że szczegółowo opisane tutaj polecenia przedstawiają jeden ze sposobów uzyskania rekonstrukcji powierzchni kory, jednak można zastosować również równoważne polecenia.
- Zaimportuj surowe dane MRI DICOM do programu FreeSurfer i zweryfikuj jakość obrazu (np. czy orientacja jest poprawna, kontrast wystarczający, a obrazy nie są przesunięte). W tym procesie wykorzystuje się następujące polecenia (tekst między <...> (włącznie) należy zastąpić wartościami odpowiednimi dla konkretnego przypadku, a znak "#" oznacza komentarze):
mksubjdirs # tworzy architekturę folderów używaną przez FreeSurfer
cd /mri # przechodzi do folderu mri danego obiektu
mri_convert -cm 001.mgz # konwertuje surowe MRI na format # FreeSurfer
tkmedit 001.mgz # wizualizuje skonwertowaną objętość
- Utwórz trójwymiarowe modele siatki kory mózgowej8,9. Aby poradzić sobie z problemem ukrytych bruzd, FreeSurfer najpierw tworzy jednolity wolumen istoty białej, który służy jako punkt wyjścia dla początkowej powierzchni granicy istoty szarej i białej. Powierzchnia ta jest następnie optymalizowana zgodnie z lokalnym gradientem intensywności i dalej rozszerzana do interfejsu istoty szarej i płynu mózgowo-rdzeniowego (CSF).
recon-all -s # uruchamia rekonstrukcję powierzchni kory mózgowej
Na koniec procesu rekonstrukcji otrzymasz dwa modele siatek składające się z około 150 000 punktów dla każdej półkuli: powierzchnię białą (interfejs istoty szarej i białej) oraz powierzchnię opony miękkiej (interfejs istoty szarej i CSF). Należy zauważyć, że wszystkie powierzchnie i wolumeny pozostają w przestrzeni natywnej, co pozwala na pomiary takie jak objętość, pole powierzchni, grubość lub indeks gyryfikacji bez deformacji.
- Sprawdź dokładność tych zrekonstruowanych powierzchni:
tkmedit T1.mgz ?h.pial # powierzchnia biała jest nałożona na zielono, a powierzchnia opony miękkiej na czerwono
gdzie ?h oznacza półkulę: lh.pial dla półkuli lewej i rh.pial dla półkuli prawej. Rysunek 2 (w 2 wersjach: jako animowany obraz gif do filmu oraz obraz statyczny na stronę internetową) przedstawia przykład poprawnej rekonstrukcji powierzchni białej i opony miękkiej dla obiektu „bert” dostarczonego wraz z pakietem FreeSurfer. Jeśli musisz ręcznie skorygować wynik procesu rekonstrukcji, znajdziesz samouczek w Wiki FreeSurfer (http://surfer.nmr.mgh.harvard.edu/fswiki/FsTutorial/WhiteMatterEdits , http://surfer.nmr.mgh.harvard.edu/fswiki/FsTutorial/PialEdits).
2. Obliczenie lokalnego wskaźnika gyryfikacji
Po upewnieniu się, że powierzchnie są poprawne, oblicz lokalny wskaźnik gyryfikacji (lGI) za pomocą polecenia:
recon-all -lgi -s
Ta komenda zazwyczaj wykonuje się przez około 3 godziny dla obu półkul jednego uczestnika badania, w zależności od wydajności stacji roboczej. poszczególne etapy procesu lGI przedstawiono w schemacie na Rys. 1. Obliczenia rozpoczynają się od utworzenia powierzchni zewnętrznej za pomocą operacji domykania morfologicznego. Powierzchnia zewnętrzna ta, oznaczona jako ?h.pial_outer_smoothed, została dodatkowo zilustrowana na Rys. 3. Następnie na powierzchni zewnętrznej tworzonych jest około 800 nakładających się okrągłych obszarów zainteresowania. Dla każdego z tych obszarów definiowany jest odpowiadający mu obszar zainteresowania na powierzchni pialnej. Cały proces obliczeniowy kończy się utworzeniem indywidualnej mapy zawierającej jedną wartość lGI dla każdego punktu powierzchni kory (tzn. ~150 000 wartości na półkulę).
3. Sprawdzenie wyniku obliczeń lGI dla każdej półkuli
tksurfer ?h pial -overlay /surf/?h.pial_lgi -fthresh 1
Wartości lGI są naniesione na powierzchnię kory mózgowej. Ponieważ prawidłowe wartości lGI zazwyczaj mieszczą się w zakresie od 1 do 5, ustawienie progu minimalnego na 1 (za pomocą opcji fthresh) pozwala na szybką weryfikację: nie powinno być widocznych żadnych szarych obszarów kory. Przykład prawidłowego wyniku indywidualnego przedstawiono na Ryc. 4.
4. Statystyczne porównania grup
Celem jest ilościowe określenie wpływu grupy w każdym wierzchołku na powierzchni kory przy jednoczesnej kontroli wpływu płci oraz wieku. Należy postępować tak samo, jak w przypadku porównywania grubości kory w każdym wierzchołku, ale podając ?h.pial_lgi zamiast ?h.thickness. Do obliczenia statystycznych porównań grupowych możliwe są dwie opcje: w pierwszej kolejności wymieniono klasyczne polecenia, a następnie krótko wspomniano o interfejsie graficznym (Qdec).
- Pierwsza opcja do porównania lWyniki GI pomiędzy grupami uzyskano za pomocą poniższych poleceń; dalsze szczegóły można znaleźć w Analiza grupowa
Analiza grupowa w FreeSurfer umożliwia badaczom porównanie średnich wartości z wielu podmiotów w różnych grupach. Proces ten obejmuje zazwyczaj dwa etapy: tworzenie map średnich dla każdej grupy oraz przeprowadzanie testów statystycznych w celu zidentyfikowania obszarów, w których różnice między grupami są istotne statystycznie.
Tworzenie map średnich
Kluczowym krokiem w analizie grupowej jest obliczenie średniej mapy dla każdej grupy. Mapy te reprezentują średnią wartość dla każdego wierzchołka (vertex) na powierzchni kory mózgu w obrębie danej grupy.
Aby utworzyć mapę średnią, należy użyć narzędzia `mri_avg`. Narzędzie to uśrednia mapy wejściowe z wielu podmiotów, generując jedną mapę reprezentatywną dla całej grupy.
Statystyczne porównywanie grup
Po wygenerowaniu map średnich dla grup można przeprowadzić testy statystyczne, aby sprawdzić, czy różnice między nimi są istotne. Najbardziej powszechnym podejściem jest zastosowanie testu t-studenta dla prób niezależnych.
W FreeSurfer do tego celu służy narzędzie `mri_glm`, które pozwala na dopasowanie modelu liniowego generalizowanego do danych. Model ten może uwzględniać nie tylko przynależność do grupy, ale także współzmienne (covariates), takie jak wiek lub płeć, w celu skorygowania potencjalnych czynników zakłócających.
Korekcja dla wielu porównań
Ponieważ analiza grupowa obejmuje tysiące poszczególnych testów (po jednym dla każdego wierzchołka), istnieje wysokie ryzyko wystąpienia błędów pierwszego rodzaju (wyników fałszywie dodatnich). Aby temu zapobiec, niezbędne jest zastosowanie procedur korekcji dla wielu porównań.
FreeSurfer oferuje kilka metod kontroli odsetka fałszywych odkryć (FDR - False Discovery Rate) oraz korekcję Bonferroniego, które pomagają w rzetelnym wyznaczeniu statystycznie istotnych klastrów.
Wizualizacja wyników
Wyniki analizy grupowej są zazwyczaj prezentowane w formie map statystycznych nałożonych na standardowy mózg (template). Pozwala to na anatomiczną lokalizację obszarów, w których zaobserwowano istotne różnice w grubości kory, powierzchni lub innych parametrach morfometrycznych.
Kluczowe kroki procesu:
1. Przygotowanie danych: Upewnienie się, że wszystkie podmioty przeszły standardowy proces przetwarzania FreeSurfer.
2. Grupowanie: Podział podmiotów na grupy badawcze i kontrolne.
3. Uśrednianie: Generowanie map średnich dla każdej grupy za pomocą `mri_avg`.
4. Modelowanie statystyczne: Wykonanie testów statystycznych przy użyciu `mri_glm`.
5. Korekcja: Zastosowanie odpowiedniej metody korekcji dla wielu porównań.
6. Interpretacja: Wizualizacja i analiza statystycznie istotnych obszarów..
- Najpierw należy utworzyć szablon specyficzny dla badania, wprowadzając do niego wszystkich badanych:
oblicz_średnią_podmiotu --podmioty ...
Powyższe polecenie utworzy obiekt o nazwie „average”. Alternatywnie można użyć obiektu „fsaverage”, który jest dystrybuowany jako część FreeSurfer rozkład.
- Następnie utwórz plik tekstowy zawierający opis podmiotów biorących udział w badaniu (tzw. „Plik deskryptora grupy FreeSurfer"). Plik FSGD.txt powinien wyglądać następująco:
PlikOpisuGrupy 1
Grupa kontrolna_samce
Grupa kontrolna_samice
Grupa Pacjent_Mężczyzna
Grupa Pacjentka_Kobieta
Zmienne: wiek
Proszę podać tekst źródłowy do tłumaczenia. Pacjent_Mężczyzna 20
Proszę podać tekst źródłowy do tłumaczenia. Kontrola_Samiczka 23
<…>
- Przeprowadź ponowne próbkowanie To jest jedyny tekst do przetłumaczenia.dane GI w przestrzeni średniego badanego, używając następującego polecenia dla każdej półkuli:
mris_preproc --fsgd FSGD.txt --target average --hemi ?h --meas pial_lgi --out ?h.lgi.mgh
- Wygładź dane na powierzchni kory w celu zmniejszenia stosunku sygnału do szumu:
mri_surf2surf --hemi ?h --s average --sval ?h.lgi.mgh --fwhm 10 --tval ?h.10.lgi.mgh
- Oblicz porównanie grup na poziomie każdego wierzchołka. W tym celu należy utworzyć tekstowy plik kontrastu (np. w przypadku opisanego powyżej pliku FSGD.txt, plik „contrast.txt” będzie zawierał wartości „1 1 -1 -1 0”, aby obliczyć różnicę między grupą kontrolną a pacjentami, kontrolując wpływ wieku i płci). Na koniec wykonaj porównanie:
mri_glmfit --y ?h.10.lgi.mgh --fsgd FSGD.txt doss --glmdir ?h.lgi.glmdir --surf average ?h --C contrast.txt
- Wizualizacja wyników dla średniego badanego przy użyciu oprogramowania tksurfer:
średnia tksurfer ?h nadmuchiwany
Następnie załaduj jako nakładkę plik sig.mgh znajdujący się w folderze ?h.lgi.glmdir/contrast.txt/sig.mgh. Używając opcji „configure overlay”, możesz dodatkowo zmodyfikować p próg, a także korekta dla wielokrotnych porównań z wykorzystaniem stopy fałszywych odkryć (false discovery rate)10.
- Alternatywną opcją porównywania grup jest zastosowanie Qdec, graficznego interfejsu użytkownika zaimplementowanego w FreeSurferZastosowanie Qdec wraz z lokalnym wskaźnikiem gyryfikacji (Gyrification Index) wymaga wstępnego wygładzenia lDane GI:
recon-all -qcache -measure pial_lgi -average -s
W przypadku programu Qdec plik deskryptora grup FreeSurfera (FreeSurfer Group Descriptor File) zostaje zastąpiony nieco inną wersją – tabelą danych (qdec.table.dat), która zawiera opis poszczególnych grup oraz inne zmienne zakłócające, takie jak wiek. Szczegółowy opis wykorzystania programu Qdec znajduje się w http://surfer.nmr.mgh.harvard.edu/fswiki/FsTutorial/QdecGroupAnalysis.
Warto zauważyć, że jeśli lWskaźnik GI nie jest dostępny na liście zmiennych zależnych w programie Qdec; należy dodać poniższą linię do pliku .Qdecrc znajdującego się w katalogu domowym:
MEASURE1 = pial_lgi
5. Analiza
Alternatywnie, analizy statystyczne można by ostatecznie przeprowadzić na poziomie parcellacji korowej zintegrowanej w programie FreeSurfer11. W tym celu dla 34 obszarów zainteresowania (ROI) zakręty w każdej półkuli można wyodrębnić średnie wartości lGI, a następnie porównać te pomiary pomiędzy różnymi grupami. Taka analiza na poziomie parcell (w przeciwieństwie do opisanej powyżej analizy na poziomie wierzchołków) może być korzystna, ponieważ ogranicza liczbę porównań statystycznych. Należy jednak pamiętać, że lGI w każdym punkcie określa stopień gyrifikacji w otaczającym obszarze kołowym, zatem średnia wartość lGI w danym obszarze zainteresowania zakrętu w pewnym stopniu odzwierciedla również gyrifikację w sąsiednich obszarach zainteresowania.
Na koniec, choć w niniejszym protokole opisano najważniejsze kwestie, rozwiązanie innych problemów, które mogą wystąpić podczas przetwarzania w FreeSurfer lub lGI, można znaleźć w archiwach listy mailingowej FreeSurfer (http://surfer.nmr.mgh.harvard.edu/fswiki/FreeSurferSupport).
6. Reprezentatywne wyniki
Zgodnie z opisem w sekcji 1c protokołu, przed obliczeniem lGI należy zawsze dokładnie sprawdzić poprawność rekonstrukcji powierzchni korowych. Przewijając obraz pomiędzy płatem czołowym a potylicznym, należy zwrócić szczególną uwagę na to, aby naczynia i błony nie były włączone do powierzchni oponowej. Należy również sprawdzić, czy powierzchnia białej substancji dokładnie odpowiada granicy między substancją szarą a białą. Przykład poprawnej rekonstrukcji przedstawiono na Rysunku 2 (całą objętość można zobaczyć na animowanym obrazie gif).
Na koniec lobliczanie GI, należy również sprawdzić wynik dla obu półkul każdego badanego. Nie powinno być żadnego obszaru kory z lWynik GI mniejszy niż 1. Sekcja 3 protokołu oraz rycina 4 pokazują, jak prawidłowo sprawdzić, czy wynik końcowy lObliczenia GI są poprawne.

Rysunek 1. Przegląd obliczeń lGI. W pierwszej kolejności, z surowych obrazów rekonstruowane są trójwymiarowe modele siatek korowych przy użyciu standardowego potoku FreeSurfer. Algorytmy rekonstrukcyjne te wykorzystują binarną objętość istoty białej jako punkt wyjścia, aby rozwiązać problem zakrytych bruzd. Modele siatek korowych zazwyczaj składają się z około 150 000 wierzchołków i są klasycznie używane do obliczania grubości kory w każdym punkcie. Podobnie, lokalny wskaźnik gyryfikacji (lGI) będzie obliczany dla każdego wierzchołka. W tym celu tworzona jest powierzchnia zewnętrzna. Następnie, przy użyciu algorytmu dopasowania, identyfikowane są odpowiadające sobie koliste obszary zainteresowania na powierzchni zewnętrznej i korowej. Po wygenerowaniu około 800 nakładających się obszarów zainteresowania, proces kończy się stworzeniem indywidualnych map lGI. Mapy te można łatwo interpretować: wskaźnik wynoszący 5 oznacza, że w obszarze otaczającym powierzchnia kory wywinięta do wewnątrz w obrębie bruzd jest 5 razy większa niż widoczna powierzchnia kory; wskaźnik 1 oznacza, że kora w obszarze otaczającym jest płaska. Na koniec, na poziomie każdego wierzchołka obliczane są statystyczne porównania grupowe, analogicznie do porównań grubości kory.
Rysunek 1B. Indywidualna mapa korowa lGI. Ten krótki film przedstawia obrót o 360 stopni indywidualnej mapy korowej lGI, takiej jak pokazano na Rys. 1. Uderzające jest to, że obszary kory o wyższych wartościach lGI odpowiadają pierwszym fałdom powstałym podczas życia płodowego: szczelinie Sylwiusza, bruździe skroniowej górnej oraz bruździe wewnątrzciemieniowej w widoku bocznym mózgu, a także bruździe ciemieniowo-potylicznej w widoku przyśrodkowym mózgu. Obejrzyj film

Rysunek 2. Przykład prawidłowej rekonstrukcji powierzchni kory (jeden przekrój czołowy). Po zakończeniu procesu rekonstrukcji powierzchnie kory powinny zostać dokładnie zweryfikowane w całej objętości mózgowia. Wewnętrzna powierzchnia kory (oznaczona jako powierzchnia biała, na obrazie w kolorze zielonym) powinna precyzyjnie mengikutić granicę między istotą szarą a białą. Zewnętrzna powierzchnia kory (tj. granica między istotą szarą a płynem mózgowo-rdzeniowym, oznaczona jako powierzchnia oponowa, tutaj w kolorze czerwonym) nie powinna obejmować żadnego fragmentu naczynia ani błony. Należy zauważyć, że zaprezentowany tutaj przykład wykorzystuje obiekt „bert” dostarczony wraz z pakietem FreeSurfer.
Rysunek 2B. Przykład prawidłowej rekonstrukcji powierzchni kory (pełna objętość). Ten animowany obraz GIF przedstawia powierzchnię kory lewej półkuli badanego „bert” na każdym przekroju wieńcowym, widoczną podczas przewijania od najbardziej przednich do najbardziej potylicznych przekrojów wieńcowych w programie FreeSurfer. Obejrzyj film

Rycina 3. Przykład powierzchni zewnętrznej obliczonej w ramach procesu lGI (jeden przekrój czołowy). Pierwszym krokiem w obliczeniach lGI jest utworzenie powierzchni zewnętrznej otaczającej półkulę. Powierzchnia ta (oznaczona jako ?h.pial_outer_smoothed w programie FreeSurfer) może zostać zweryfikowana za pomocą narzędzia tkmedit. W tym przypadku jako przykład wykorzystano obiekt „bert” dostarczony z oprogramowaniem FreeSurfer.
Rysunek 3B. Przykład zewnętrznej powierzchni obliczonej w ramach procesu lGI (pełna objętość). Ten animowany plik GIF przedstawia zewnętrzną powierzchnię lewej półkuli na każdym przekroju czołowym, widoczną podczas przewijania od najbardziej przednich do najbardziej potylicznych przekrojów czołowych za pomocą programu tkmedit w FreeSurfer. Wyświetl film

Rysunek 4. Przykład poprawnego wyniku lGI w widoku programu FreeSurfer. Różne orientacje powierzchni kory mózgowej badanego osobnika „bert” z nałożonymi wartościami lGI. Kod kolorystyczny to domyślna nakładka „heat” widoczna w tksurfer w programie FreeSurfer. Przy zastosowaniu minimalnego progu wynoszącego 1 wszystkie wierzchołki muszą być pokolorowane, a żadna część kory nie powinna pozostać szara. Należy zauważyć, że nakładka kolorystyczna może zostać zmodyfikowana za pomocą opcji „Configure Overlay” w tksurfer, gdzie można również sprawdzić wartości minimalne i maksymalne oraz histogram całkowitego rozkładu lGI.