Wykorzystanie szybkoskanującej woltamperometrii cyklicznej do pomiaru elektrycznie wywołanej dynamiki dopaminy presynaptycznej w skrawkach mózgowych prążkowia.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Dynamika dopaminy presynaptycznej w przekrojach mózgu w obrębie prążka z wykorzystaniem szybkiej woltamperometrii cyklicznej
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Szeroko zakrojone badania skupiły się na neuroprzekaźniku dopaminie ze względu na jej znaczenie w mechanizmie działania substancji psychoaktywnych (np. kokainy i amfetaminy), rolę, jaką odgrywa w chorobach psychiatrycznych (np. schizofrenii i zespole nadpobudliwości z deficytem uwagi), oraz jej zaangażowanie w zaburzenia degeneracyjne, takie jak choroba Parkinsona i choroba Huntingtona. W normalnych warunkach fizjologicznych dopamina reguluje aktywność lokomotoryczną, funkcje poznawcze, uczenie się, afekt emocjonalny oraz wydzielanie hormonów neuroendokrynnych. Jedno z największych zagęszczeń neuronów dopaminergicznych znajduje się w prążkowiu, który można podzielić na dwa odrębne regiony neuroanatomiczne znane jako jądro półleżące oraz jądro ogoniaste i skorupa. Celem jest przedstawienie ogólnego protokołu szybkiej skaningowej woltamperometrii cyklicznej (FSCV) w plastrach prążkowia myszy. FSCV jest dobrze zdefiniowaną techniką elektrochemiczną, która umożliwia pomiar uwalniania i wychwytu dopaminy w czasie rzeczywistym w konkretnych regionach mózgu. W FSCV do wykrywania utleniania dopaminy stosuje się węglowe mikroelektrody włókniste (średnica ~ 7 μm). Przewagą analityczną zastosowania FSCV do wykrywania dopaminy jest zwiększona rozdzielczość czasowa wynosząca 100 milisekund oraz rozdzielczość przestrzenna poniżej dziesięciu mikronów, co dostarcza informacji uzupełniających względem mikrodializy in vivo.
Protokół
1. Podstawy eksperymentu
Wytwarzanie elektrod
- Istnieje wiele metod wytwarzania mikroelektrod z włókna węglowego, ponieważ większość z nich jest produkowana wewnętrznie w laboratoriach. Zazwyczaj o szczegółach wykonania elektrody decyduje technika elektrochemiczna, która będzie stosowana (np. amperometria vs. FSCV). W przypadku FSCV mikroelektrody można wykonać w laboratorium, stosując poniższą procedurę składającą się z trzech kroków. Bardziej szczegółowy opis wytwarzania elektrod z włókna węglowego znajduje się w niedawnym artykule JoVE 1. Należy jednak zauważyć, że opisane poniżej elektrody są cylindryczn....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Przedstawiony tutaj protokół demonstruje, jak przygotować i wykorzystać koronalne skrawki mózgu myszy do eksperymentów FSCV. Chociaż metoda ta jest specyficzna dla pozyskiwania i pomiaru dynamiki dopaminy, inne neuroprzekaźniki, takie jak adenozyna, nadtlenek wodoru, norepinefryna i serotonina, były monitorowane in vivo lub in vitro za pomocą FSCV 3, 8 - 11. FSCV można wykorzystać do monitorowania niektórych z tych innych neurochemikaliów poprzez proste modyfikacje kształtu fali przykładanej .......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Brak zadeklarowanych konfliktów interesów.
Podziękowania
Finansowanie zapewnione przez National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism (NIAAA; AA-016967 oraz AA016967-01S1; TAM), fundusze startowe Wayne State University oraz program grantów badawczych Wayne State University Research Grant Program. Treść opracowania jest wyłączną odpowiedzialnością autorów i nie reprezentuje oficjalnych poglądów NIAAA ani National Institutes of Health.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Chlorek potasu | Fisher Scientific | 7447407 | |
| Chlorek sodu | EMD Millipore | 7647145 | |
| Chlorek magnezu | Fisher Scientific | 7791186 | |
| Chlorek wapnia | Fisher Scientific | 10035048 | |
| Bikarbonat sodu | EMD Millipore | 144558 | |
| Fosforan sodu, dwutlenek | EMD Millipore | 7558794 | |
| D-glukoza | Fisher Scientific | 50997 | |
| Kwas askorbinowy | Fisher Scientific | 50817 | |
| Sacharoza | Fisher Scientific | 57501 | |
| Włókno węglowe | Goodfellow | ||
| Kapilara szklana | A-M Systems | 602000 | |
| Drut srebrny | A-M Systems | 787000 | |
| Elektroda stymulacyjna wolframowa | Plastics One | ||
| Drut platynowy | |||
| Drut ołowiany | Squires Electronics, Cornelius, OR | ||
| Klej chwilowy Loctite 404 | Hankal Corp. | ||
| Ostrze brzytwy | World Precision Instruments, Inc. | ||
| Igła kręgowa BD | BD Biosciences | REF 405234 | |
| Ostrze chirurgiczne | Feather Safety Razor Co, Ltd. | ||
| Oprogramowanie TH | ESA Inc., Chelmsford, MA | ||
| Komora do nagrywania zanurzeniowego | Custom Scientific | ||
| Izolator stymulacji Neorolog |  Digitimer Ltd. | NL800A | |
| Automatyczny regulator temperatury | Warner Instruments | ||
| Mikroskop (SZX7) | Olympus Corporation | ||
| Mikroskop | Fisher Scientific | ||
| System do sekcjonowania Vibratome 3000 | St. Louis, MO. | ||
| Pompa perfuzyjna | Watson-Marlow Pumps Group | H110708 | |
| Wciągarka mikropipet | Narishige International | ||
| Potencjostat ChemClamp | Dagan Corporations |
Bibliografia
- Pike, C. M., Grabner, C. P., Harkins, A. B. Fabrication of Amperometric Electrodes. J. Vis. Exp. (27), e1040-e1040 (2009).
- Lack, A. K., Diaz, M. R., Chappell, A., DuBois, D. W., McCool, B. A. Chronic ethanol and withdrawal differentially modulate pre- a....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
