Niniejszy protokół opisuje izolację komórek zrębowych pochodzących z tkanki tłuszczowej z aspiratu tłuszczowego oraz stworzenie krytycznego ubytku w kalwaru o rozmiarze 4 mm w celu oceny regeneracji szkieletu.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Naprawa modelu krytycznego ubytku kalwarii z wykorzystaniem stromalnych komórek pochodzących z tkanki tłuszczowej pozyskanych z lipoaspiratu
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Naprawa i regeneracja szkieletu czaszkowo-twarzowego daje nadzieję na tworzenie tkanek de novo poprzez podejście komórkowe z wykorzystaniem komórek macierzystych. Stromalne komórki pochodzące z tkanki tłuszczowej (ASCs) okazały się być obfitym źródłem multipotencjalnych komórek macierzystych zdolnych do różnicowania osteogennego, chondrogennego, adipogennego i miogennego. W wielu badaniach analizowano potencjał osteogenny tych komórek in vivo z zastosowaniem różnych biomateriałów rusztowaniowych do dostarczania komórek. Wykazano, że dzięki zastosowaniu osteokondukcyjnego rusztowania z kopolimeru kwasu mlekowego i glikolowego powleczonego hydroksyapatytem (HA-PLGA) zasiedlonego komórkami ASCs, w krytycznym defekcie czaszkowym – definiowanym jako ubytek, który nie ulega samoistnemu zagojeniu w ciągu całego życia zwierzęcia – można skutecznie uzyskać silną regenerację kostną. Ten model in vivo demonstruje podstawy podejść translacyjnych mających na celu regenerację tkanki kostnej – komponent komórkowy oraz macierz biologiczną. Metoda ta służy jako model dla docelowego zastosowania klinicznego komórek progenitorowych w naprawie specyficznego defektu tkankowego.
Protokół
1. Izolacja i namnażanie komórek
- Wszystkie zgody pacjentów oraz protokoły eksperymentalne zostały przeanalizowane i zatwierdzone przez Instytucjonalną Komisję Recenzencką Uniwersytetu Stanforda (protokół nr 2188 i nr 9999).
- Pozyskaj ludzką podskórną tkankę tłuszczową podczas zabiegów planowej lipoaspiracji przeprowadzanych w znieczuleniu miejscowym lub ogólnym.
- W lipoaspiracie powstaną dwie warstwy (Rysunek 1A). Nadpływ zawiera zdecydowaną większość przetworzonego materiału komórkowego. Warstwa dolna to głównie wstrzyknięta sól fizjologiczna. Komórki pochodzące z tkanki tłuszczowej (ASCs) można pozyskać z obu wa....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Od czasu izolacji komórek pochodzących z tkanki tłuszczowej (adipose-derived stromal cells)2 z lipoaspiratu, komórki te były różnicowane w szeroką gamę linii komórkowych. Tkanka tłuszczowa ma pochodzenie mezo-dermalne, w związku z czym multipotentne komórki pochodzące z tkanki tłuszczowej będą prawdopodobnie najskuteczniejsze w zastosowaniach ukierunkowanych na linię mezo-dermalną. Zdolność do generowania tkanki szkieletowej jest szczególnie istotna, biorąc pod uwagę niedobór miejsc pobrania dla autotransplant.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Brak zadeklarowanych konfliktów interesów.
Podziękowania
Pragniemy podziękować dr. George'owi Commonsowi oraz dr. Deanowi Vistnesowi za wsparcie i współpracę w naszych badaniach. Praca ta jest wspierana przez granty National Institute of Dental and Craniofacial Research nr 1 R21 DE019274-01, R01EB009689 oraz RC2 DE020771- 02, fundację Oak Foundation oraz Hagey Laboratory for Pediatric Regenerative Medicine przyznane M.T.L. Dr Hyun otrzymuje wsparcie z Saint Joseph Mercy Hospital GME.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Pozyskiwanie lipoaspiratu | |||
| PBS | Gibco | 10010-023 | |
| Zrównoważony roztwór soli Hanksa | Cellgro | 21-023-CV | |
| Kolagenaza | Sigma | C6885-500MG | |
| Sito do komórek 100 μm | BD Falcon | 352360 | |
| Filtr sterylizujący Steri-top 500 ml 0,22 μm | Millipore | SCGPT05RE | |
| Defekt sklepienia czaszki | |||
| Bezczuistkowy mikrosilnik Z500 UM50C | NSK | NSKZ500 | |
| Nóż okrągły 4,0 mm | Xemax Surgical | CK40 |
Bibliografia
- Levi, B., James, A. W., Nelson, E. R. Human adipose-derived stromal cells heal critical size mouse calvarial defect. PLoS One. 5, (2010).
- Zuk, P. A., Zhu, M., Ashjia, P. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13, 42....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
