Marcowe wydanie Journal of Visualized Experiments (JoVE) zaczyna się od artykułu, który skupia się na trzech fundamentalnie ważnych testach do pomiaru zachowania lokomotorycznego Drosophila. W szczególności testy te obejmują test pełzania larw (dla funkcji motorycznych larw), test RING (dla funkcji motorycznych dorosłych) oraz test zalotów (w celu oceny koordynacji i zdolności sensorycznych).
Test pełzania larw polega na pobraniu larw i wystawieniu młodych much na działanie eksperymentalnego leku, który jest przedmiotem zainteresowania. Zwierzęta są następnie przenoszone na szalkę Petriego umieszczoną na arkuszu papieru milimetrowego i można obliczyć liczbę linii siatki przeciętych na minutę.
Protokół RING (Rapid Iterative Negative Geotaxis) polega na umieszczaniu dorosłych much w specjalistycznych fiolkach, gdzie są one zmuszane do opadania na dno poprzez delikatne stukanie. Muszki owocówki instynktownie pełzają w górę, wbrew grawitacji. Dzięki analizie obrazu można określić zakres zdolności lokomotorycznych dorosłego osobnika, mierząc, jak daleko w górę mogą wspiąć się muchy w krótkim czasie.
Aby ocenić bardziej złożone zachowanie sterowane sensorycznie, stosuje się test zalotów, który rozpoczyna się od umieszczenia seksualnie naiwnych samców i samic w specjalistycznym aparacie znanym jako koło godowe. Podczas sesji eksperymentalnych badacze rejestrują czas, w którym samiec muchy wykazuje kilka charakterystycznych zachowań godowych. Imponujące jest to, że w ciągu kilku minut samiec muchy zorientuje się w kierunku samicy, stuknie ją w brzuch, wygeneruje piosenkę skrzydłem, poliże samicę i ostatecznie kopuluje.
Razem wzięte, te testy reprezentują serię potężnych testów behawioralnych, które mogą pomóc wyjaśnić czynniki genetyczne i środowiskowe, które przyczyniają się do zachowania drosophila.
Później w tym miesiącu, JoVE skupia się na fizjologii ćwiczeń, gdzie badacze z Uniwersytetu w Sau Paulo prezentują metodę mającą na celu odkrycie wpływu różnych systemów energetycznych na złożone ćwiczenia, takie jak sport. Jako przykład nasi autorzy wybrali judo do swojego pokazu. Za pomocą starannie umieszczonego przenośnego analizatora gazów, zużycie tlenu może być mierzone podczas ćwiczeń judo w kontrolowanych warunkach. Porównując zużycie tlenu przed, w trakcie i po wysiłku, można określić wkład energetyczny tlenowego i amlekowego metabolizmu beztlenowego. Pobieranie krwi przed i po wysiłku, a następnie analiza elektrochemiczna służy do określenia wkładu energetycznego metabolizmu mlekowego w sport judo. W połączeniu, dane dotyczące zużycia tlenu i stężenia mleczanu w osoczu można wykorzystać do określenia względnego wkładu różnych systemów energetycznych w określone aspekty złożonych ćwiczeń, takich jak ulubiony rzut judo.
Również w marcu, JoVE planuje opublikować badanie rozwojowe dotyczące ekspozycji na alkohol u danio pręgowanego. Gdy zarodki rozwiną się do pożądanego punktu czasowego, wpływ ekspozycji na alkohol na ekspresję genów można ocenić poprzez oczyszczanie mRNA i przeprowadzanie qPCR oraz hybrydyzację in situ całego montażu. Za pomocą mikroskopii świetlnej można również ocenić zmiany morfologiczne, takie jak kształt somitów. Jeśli zaobserwuje się, że gen będący przedmiotem zainteresowania zmniejsza się lub zwiększa w wyniku ekspozycji na etanol, do zarodka można wstrzyknąć mRNA lub morfolino z osłoniętym tonerem, gdzieś w okolicach stadium dwukomórkowego, w celu uratowania fenotypu wywołanego alkoholem. Nasi autorzy wykazują, że ekspozycja na alkohol u rozwijającego się danio pręgowanego skutkuje podobnymi fenotypami morfologicznymi i profilami ekspresji genów do obserwowanych u ssaków, a także wykazują, że wstrzyknięcie mRNA może odwrócić wpływ alkoholu na nieprawidłowości rozwojowe.
W Immunologii i Infekcji, JoVE przedstawia eksperyment z parazytologii roślin z UC Riverside. W szczególności naszych autorów interesuje nicień węzła korzeniowego - obowiązkowy pasożyt roślinny, który swobodnie porusza się po wilgotnej glebie, aby zainfekować korzenie roślin i żerować. Po pierwsze, opisano metody przetwarzania zainfekowanych roślin i zbierania nicieni węzłów korzeniowych. Gdy młode robaki rozwiną się do stadium o wysokiej zakaźności, gleba może zostać zaszczepiona. Później korzenie można zabarwić i ocenić pod kątem obecności charakterystycznych węzłów korzeniowych generowanych przez te pasożyty. Oprócz eksperymentów z roślinami doniczkowymi, nasi autorzy pokazują, w jaki sposób można przeprowadzać testy węzłów korzeniowych na roślinach uprawianych w przezroczystych torebkach, co pozwala na łatwe oglądanie korzeni i ułatwia wysokoprzepustowe badania przesiewowe pod kątem obecności tej niszczycielskiej infekcji, która odpowiada za 5% globalnych strat w uprawach rocznie.
To podsumowanie zawartości JoVE za marzec przedstawia cztery z ponad pięćdziesięciu artykułów zaplanowanych do wydania w tym miesiącu. Inne godne uwagi eksperymenty obejmują metody obrazowania reakcji wywołanych zapachem w antenie muszek owocowych, wykorzystanie elektronicznego nosa do analizy lotnych związków z owoców oraz zmianę przeznaczenia zwykłego sprzętu biurowego do dostarczania makrocząsteczek do żywych komórek.