Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Dwustronne zamknięcie wspólnych tętnic szyjnych jako odpowiedni bodziec prekondycjonujący w celu indukcji wczesnej tolerancji niedokrwiennej na ogniskowe niedokrwienie mózgu

29.6K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/4387

⸱

9 maja 2013

 ,  , 
1Department of Neurology, Center for Stroke Research Berlin, Charité - Universitätsmedizin Berlin, Germany

W tym artykule

Podsumowanie

Przybywa dowodów na to, że przeciwwarunkowanie niedokrwienne (PC) – nieuszkadzający bodziec niedokrwienny dla mózgu – zapewnia przejściową ochronę przed następującym po nim uszkadzającym niedokrwieniem. Zastosowaliśmy obustronną okluzję wspólnej tętnicy szyjnej (BCCAO) jako bodziec przeciwwarunkujący w celu wywołania wczesnej tolerancji na niedokrwienie (IT) w odpowiedzi na przejściowe ogniskowe niedokrwienie mózgu (wywołane okluzją środkowej tętnicy mózgowej, MCAO) u myszy C57Bl6/J.

Streszczenie

Narasta liczba dowodów na to, że prekondycjonowanie niedokrwienne – niedrzcząca stymulacja niedokrwienna mózgu – zapewnia przejściową ochronę przed kolejnym, uszkadzającym incydentem niedokrwiennym. Opracowaliśmy dwustronne zamknięcie wspólnej tętnicy szyjnej jako bodziec prekondycjonujący w celu wywołania wczesnej tolerancji niedokrwiennej na przejściowe ogniskowe niedokrwienie mózgu u myszy C57Bl6/J. W tym filmie zaprezentujemy metodologię zastosowaną w tym badaniu.

Wprowadzenie

Udar niedokrwienny jest chorobą o wysokiej śmiertelności i ogromnym obciążeniu społeczno-ekonomicznym 1. Mimo intensywnych wysiłków naukowych, zarówno w badaniach eksperymentalnych, jak i klinicznych w ostatnich dziesięcioleciach, opcje terapeutyczne dla pacjentów w stanie ostrym udaru niedokrwiennego pozostają bardzo ograniczone 2. W przeciwieństwie do tego, wzrost odsetka osób starszych w krajach rozwiniętych drastycznie zwiększy zapadalność i chorobowość udarów niedokrwiennych w nadchodzących dziesięcioleciach 3. W związku z tym istnieje pilna potrzeba opracowania nowych strategii leczenia pacjentów z udarem niedokrwiennym.

Jednym z podejść jest pogłębienie zrozumienia mechanizmów endogennej adaptacji mózgu w celu radzenia sobie z bodźcem uszkadzającym. Ta pochodząca z mózgu neuroprotekcja jest znana również jako prekondycjonowanie niedokrwienne (PC) lub tolerancja niedokrwienna (IT) i opisuje zjawisko, w którym nieuszkadzający bodziec szkodliwy przyłożony do mózgu indukuje przejściową oporność na późniejszy, uszkadzający incydent niedokrwienny 4. IT występuje w dwóch różnych oknach czasowych: wczesna IT, która pojawia się od kilku minut do kilku godzin po PC, oraz opóźniona IT, która wymaga okresu utajenia wynoszącego kilka godzin 4.

Dotychczas badania nad IT w mózgu koncentrowały się na opóźnionej IT. Mechanizmy wczesnej IT są znacznie słabiej poznane. Celem niniejszego badania jest ustalenie, czy obustronna okluzja tętnic szyjnych wspólnych (BCCAO), która jest uznanym bodźcem indukującym opóźnioną IT, stanowi odpowiedni bodziec PC do indukcji wczesnej IT w odpowiedzi na przejściową ogniskową ischemię mózgu (wywołaną okluzją tętnicy środkowej mózgu, MCAO) u myszy C57Bl6/J.

Podczas obu procedur chirurgicznych (BCCAO i MCAO) przeprowadzono monitorowanie przepływu krwi w mózgu (CBF) za pomocą laserowej flowmetrii dopplerowskiej (LDF).

Procedurę BCCAO przeprowadzono u znieczulonych myszy oddychających spontanicznie. Obie tętnice szyjne wspólne (CCA) zostały odsłonięte i zamknięte na 60 sec, po czym nastąpiły 5 min reperfuzji. Sekwencję BCCAO/reperfuzji powtórzono dwukrotnie. Po operacji myszy szybko doszły do siebie i nie wykazywały objawów upośledzenia czynnościowego. Aby wykluczyć możliwość, że opisany powyżej protokół BCCAO doprowadził do opóźnionej śmierci komórek w mózgu, przeprowadzono barwienie TUNEL (TdT-mediated dUTP-biotin nick end labelling) 72 hr po BCCAO (lub operacji pozorowanej) w oddzielnej grupie.

Model MCAO jest powszechnie stosowanym modelem indukcji ogniskowego niedokrwienia mózgu u gryzoni 5-7. Procedury chirurgiczne przeprowadzono zgodnie ze standardowymi procedurami operacyjnymi (SOP) 8. Po odsłonięciu lewej CCA, do dystalnej części CCA wprowadzono pokryty silikonem monofilament, przesuwając go przez wewnętrzną tętnicę szyjną (ICA) do kręgu Willisa, aż do momentu zamknięcia tętnicy przedniej mózgu (ACA), a tym samym ujścia tętnicy środkowej mózgu (MCA) na określony czas. W niniejszym badaniu zastosowano MCAO przez 45 min, co zazwyczaj prowadzi do powstania zmiany niedokrwiennej w obszarze MCA obejmującej prążkowie oraz obszary korowe mózgu.

W naszym badaniu przeanalizowano profil czasowy wczesnej IT, wykorzystując BCCAO jako bodziec PC. Uzyskane dane wskazały, że optymalny odstęp czasu między BCCAO a MCAO w celu wywołania wczesnej IT wynosi 30 min.

W tym filmie zaprezentujemy obie procedury chirurgiczne, t.j. BCCAO oraz MCAO.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie procedury opisane w niniejszym artykule zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi i przepisami Landesamt für Gesundheit und Soziales w Berlinie w Niemczech.

Procedury przedoperacyjne

1. Przygotowanie monofilamentów

  1. Do przygotowania włókien śródświatowych wykorzystano nylonowe nici monofilamentowe 8-0, które przecięto na odcinki o długości 13 mm każdy.
  2. Do powlekania monofilamentów użyto silikonu Xantopren M mucosa (Heraeus Kulzer GmbH, Hanau, Niemcy), aktywowanego poprzez dodanie kropli roztworu aktywatora (Activator, Universal plus, Heraeus Kulzer GmbH, Hanau, Niemcy).
  3. Monofilament powoli przeciągano przez silikon, aż został nim całkowicie pokryty. Pozwoliło to na równomierne pokrycie monofilamentu silikonem. Należy unikać zbyt długiego oczekiwania, ponieważ aktywowany materiał powlekający szybko twardnieje i wysycha.
  4. Przed rozpoczęciem krzepnięcia silikonu zaleca się usunięcie nadmiaru materiału z włókna poprzez przeciągnięcie go po arkuszu papieru. W ten sposób warstwa silikonu może zostać zredukowana do grubości około 200 μm.
  5. Podstawę monofilamentu pokrytego silikonem wczepiono w plastelinę, aby go wysuszyć przez noc.

Komentarz: W idealnych warunkach do zapewnienia sterylności w miejscu operacyjnym należy używać wyłącznie monofilamentów sterylnych lub przynajmniej zdezynfekowanych. W praktyce sterylizacja lub dezynfekcja monofilamentów wykonanych ręcznie jest bardzo trudna, ponieważ może dojść do pogorszenia ich jakości 9. W związku z tym korzystniejsze może być zastosowanie dostępnych komercyjnie sterylnych monofilamentów.

2. Przygotowanie instrumentów chirurgicznych i zwierząt

  1. Wszystkie narzędzia chirurgiczne przechowywano w 70% alkoholu etylowym. Dodatkowo, przed każdym nowym zabiegiem chirurgicznym wszystkie narzędzia chirurgiczne były dokładnie czyszczone i dezynfekowane przy użyciu 70% alkoholu etylowego.
  2. U wszystkich zwierząt przed przecięciem dokładnie zdezynfekowano obszar operacyjny za pomocą 70% alkoholu etylowego. Przed wykonaniem nacięć pozwolono na całkowite wyschnięcie zdezynfekowanych miejsc. Nie wykonywano dodatkowego strzyżenia sierści, ponieważ może ono powodować powstawanie mikrośladów i wtórne stany zapalne skóry 9.

Procedury chirurgiczne

3. Pozycjonowanie sondy LDF i monitorowanie LDF

  1. W celu indukcji znieczulenia myszy poddano działaniu mieszaniny gazowej składającej się z 30% tlenu, 70% N2O oraz 2,5% izofluranu przy użyciu parownika. Do podtrzymania znieczulenia stężenie izofluranu zredukowano do 1,5%. Przez cały czas trwania procedury chirurgicznej myszy oddychały spontanicznie przez maskę tlenową.
  2. Wprowadzono rektalną sondę temperatury, a myszy unieruchomiono w aparacie stereotaktycznym, odsłaniając obszar ciemieniowy głowy. Podczas operacji myszy spoczywały na podgrzewanym podkładzie sterowanym termostatem, co zapewniało stałą temperaturę wewnętrzną ciała na poziomie 37,0 ± 0,5 °C. Wykonano cięcie w linii środkowej w płaszczyźnie strzałkowej (o długości ok. 1 cm), aby odsłonić kości ciemieniowe czaszki.
  3. Ostrożnie przedyssekpowano lewą stronę czaszki, a sondę światłowodową przymocowano bezpośrednio do czaszki 2 mm w kierunku kaudalnym i 5 mm bocznie od bregmy, używając kleju błyskawicznego. Następnie brzegi rany starannie zespolono, aby zapobiec hipotermii mózgu oraz infekcjom.
  4. Myszy odwrócono, aby odsłonić brzuszna stronę szyi. Sondę światłowodową podłączono do urządzenia LDF (PeriFLUX System 5000, Perimed, Järfälla, Szwecja) za pomocą adaptera sondy łączącej (Master Probe 418-1, Perimed; Järfälla, Szwecja).

Komentarz: Podczas obracania myszy należy ostrożnie zginać sondę światłowodową, aby zapobiec jej odłamaniu od czaszki.

  1. Urządzenie LDF zostało podłączone do komputera przenośnego. Rozpoczęto ciągły zapis wartości LDF przy użyciu oprogramowania PeriSoft dla systemu Windows (Wersja 2.50, Järfälla, Szwecja). Rysunek 1 przedstawia średni przebieg CBF uzyskany z dziesięciu pomiarów LDF podczas BCCAO i reperfuzji.

4. Obustronne zamknięcie wspólnych tętnic szyjnych

  1. Znieczulenie utrzymywano zgodnie z opisem w punkcie 3.1. Myszy położono na grzbiecie. Ogon i łapy zwierzęcia przymocowano do maty grzewczej za pomocą taśmy klejącej. Wykonano nacięcie wzdłuż linii środkowej brzusznej w płaszczyźnie strzałkowej (długość ~ 1cm).
  2. Obie ślinianki ostrożnie odseparowano i odsunęto, aby uwidocznić leżące pod nimi tętnice szyjne wspólne (CCA).
  3. Obie tętnice CCA ostrożnie oddzielono od odpowiadających im nerwów błędnych i towarzyszących żył, dbając o to, aby nie uszkodzić tych struktur. Manipulacje przy nerwach błędnych mogą prowadzić do przejściowej lub trwałej dysfunkcji przywspółczulnego układu nerwowego, co może skutkować wystąpieniem znacznej arytmii serca, a nawet nieodwracalnym zatrzymaniem akcji serca. Dlatego kluczowe jest unikanie jakichkolwiek manipulacji przy nerwach błędnych. Wokół każdej tętnicy CCA wykonano luźną pętlę z nici jedwabnej 5-0.
  4. Między CCA a jedwabnymi szwami po każdej stronie wstawiono małą rurkę silikonową (średnica 2 mm). Rurka ta służyła jako szyna dla tętnic CCA, aby zapobiec uszkodzeniu ścian tętnic podczas zaciśkania szwów (Rycina 4).
  5. Obie tętnice CCA zamknięto na jedną minutę poprzez zaciśnięcie jedwabnych szwów. Do badania włączono wyłącznie myszy, u których sygnał LDF spadł poniżej <10% sygnału bazowego. Po ponownym otwarciu obu tętnic CCA rozpoczęto pięciominutowy okres reperfuzji. Za pomocą LDF upewniono się, że reperfuzja była pełna. Zwierzęta z niepełną reperfuzją (t.j. powrót CBF do poziomu <90% w stosunku do bazowego CBF) zostały wykluczone. Sekwencję jednej minuty BCCAO i pięciu minut reperfuzji powtórzono dwukrotnie, osiągając całkowity czas BCCAO wynoszący 3 min. Rycina 1 przedstawia średni przebieg CBF uzyskany z dziesięciu pomiarów LDF podczas BCCAO i reperfuzji. Podczas procedury zaleca się utrzymywanie rany szyjnej w stanie wilgotnym przy użyciu soli fizjologicznej.
  6. Po ostatniej reperfuzji usunięto wszystkie rurki i szwy, a także sondę światłowodową przymocowaną do czaszki; rany zaszyto, a w celu przeciwbólowego zarządzania wielokrotnie, w razie potrzeby, aplikowano na rany maść z lidokainą (Xylocain 2%; AstraZeneca GmbH, Wedel, Niemcy).
  7. Myszy przeniesiono do wstępnie podgrzanego (30 °C) boksu regeneracyjnego (MediHEAT, PecoServices Ltd., Brough, Cumbria, UK) do czasu odzyskania przez nie pełnej przytomności. Następnie myszy zwrócono do klatek.

5. Zator w środkowej tętnicy mózgowej

  1. Myszy poddano ponownej anestezji, wprowadzono sondę do pomiaru temperatury rektalnej i ułożono zwierzęta na podgrzewanej podkładce, aby odsłonić brzuszna stronę szyi. Następnie unieruchomiono je zgodnie z opisem w sekcji BCCAO.
  2. Wykonano trwałe podwiązanie lewej proksymalnej tętnicy szyjnej wspólnej (CCA) za pomocą długiej nici jedwabnej 7-0, a następnie delikatnie pociągnięto nić w kierunku ogonowym za pomocą kleszczyków typu mosquito (Rysunek 4).
  3. Kolejne trwałe podwiązanie wykonano wokół lewej tętnicy szyjnej zewnętrznej (ECA), a nić pociągnięto w prawą stronę ciała zwierzęcia (Rysunek 4).
  4. Ostrożnie zmobilizowano tkankę łączną otaczającą lewą tętnicę szyjną wewnętrzną (ICA), a nerw językowy delikatnie uniesiono, aby uzyskać dobry wgląd w dystalny przebieg ICA. Lewa ICA odchyla się w lewo, podczas gdy tętnica skrzydłowopodniebna (PPA) biegnie w prawo, podążając za przebiegiem proksymalnej ICA (Rysunek 4).

Komentarz: Należy zidentyfikować kolejną tętnicę, która skręca w prawo w kierunku ogonowym. Jest to tętnica potyliczna, która w zależności od osobniczego zróżnicowania odgałęzia się albo z miejsca rozdziału CCA, albo z proksymalnej części ECA (Rysunek 4).

  1. Za pomocą nici jedwabnej 5-0 wykonano luźną pętlę szwu wokół proksymalnego odcinka ICA.
  2. Używając małego zacisku mikrochirurgicznego, tymczasowo zamknięto światło ICA dystalnie względem luźnej pętli szwu 5-0 (Rycina 4).
  3. Za pomocą nożyczek mikrochirurgicznych wykonano małe nacięcie w dystalnej części CCA, tuż przed rozwidleniem CCA (Rycina 4).
  4. Wcześniej wybrany monofilament w pokryciu silikonowym wprowadzono do CCA przez małe nacięcie i przesunięto w stronę ICA, aż dotarł do zacisku mikrochirurgicznego (Rycina 4).
  5. Zacisk mikrochirurgiczny ostrożnie usunięto z ICA, jednocześnie przesuwając monofilament głębiej do ICA, aż do momentu zatrzymania (Rycina 4). Komentarz: W tym momencie należy obrócić pęsetę w lewej ręce tak, aby nie trzymać jej jak długopisu. Ułatwia to chwytanie filamentu pęsetą. Aplikator zacisku naczyniowego powinien być trzymany w prawej ręce. Może być konieczne niemal całkowite zaciśnięcie luźnego szwu 5-0 wokół ICA, aby zapobiec krwawieniu z miejsca nacięcia.
  6. Określono dokładną lokalizację końcówki monofilamentu, aby sprawdzić, czy został on wprowadzony do ICA, a nie do PPA. Jeśli końcówka monofilamentu trafiła do proksymalnego PPA, filament delikatnie wycofano tuż przed rozwidleniem ICA/PPA. Ponowiono próbę wprowadzenia monofilamentu do ICA, delikatnie odciągając proksymalny odcinek ICA nieco w prawą stronę. W ten sposób symulowano naturalny przebieg dystalnego ICA, co ułatwiło dostęp do tego naczynia.
  7. Po niemal całkowitym wprowadzeniu monofilamentu do ICA zaciśnięto luźną pętlę szwu 5-0 wokół proksymalnego ICA, aby unieruchomić filament. Następnie wszystkie nici jedwabne skrócono, a ranę skórną zaszyto.
  8. Utratę płynów podczas operacji uzupełniono poprzez wstrzyknięcie 1,0 ml soli fizjologicznej i.p. Następnie mysz przeniesiono do wstępnie podgrzanej klatki rekonwalescencyjnej aż do pełnego odzyskania przytomności.
  9. W celu reperfuzji myszy ponownie zanestetyzowano, a monofilament usunięto po ostrożnym poluzowaniu szwu jedwabnego 5-0 wokół proksymalnego ICA. Następnie szew 5-0 ponownie ostrożnie zaciśnięto, aby zapobiec krwawieniu.
  10. Po potwierdzeniu całkowitej hemostazy zaszyto ranę szyi.
  11. W razie potrzeby w celu uśmierzenia bólu miejscowo i wielokrotnie aplikowano maść z lidokainą, a mysz przeniesiono do wstępnie podgrzanej (30 °C) klatki rekonwalescencyjnej aż do pełnego odzyskania przytomności.
  12. Pierwszą oznaką udanego zabiegu MCAO było obserwowane krążenie zwierzęcia zgodnie z ruchem wskazówek zegara. Stopień deficytu funkcjonalnego określono za pomocą skali Bedersona zmodyfikowanej dla myszy 10. Zgodnie z tą zmodyfikowaną skalą Bedersona, oceny neurologiczne stopniurowano następująco: 0 (prawidłowa funkcja motoryczna), 1 (zgięcie tułowia i przeciwległej kończyny przedniej podczas podnoszenia myszy za ogon), 2 (krążenie w stronę przeciwległą podczas trzymania myszy za ogon na płaskiej powierzchni, ale prawidłowa postawa w spoczynku), 3 (pochylenie w stronę przeciwległą w spoczynku) oraz 4 (brak spontanicznej aktywności motorycznej lub śmierć).

6. Operacja pozorowana BCCAO

W przypadku procedur pozorowanych BCCAO, myszy znieczulono na czas trwania rzeczywistej procedury BCCAO PC, zmobilizowano gruczoły ślinowe i odsłonięto tętnice szyjne wspólne (CCA). Kluczowe jest, aby podczas procedury pozorowanej unikać bezpośrednich manipulacji przy tętnicach szyjnych lub nerwach błędnych. Manipulacje przy CCA mogą uszkodzić warstwę śródbłonka, co może skutkować uwalnianiem związków wazoaktywnych ze śródbłonka lub wywołać miejscową zakrzepicę w świetle tętnicy. W konsekwencji po operacji pozorowanej mogą wystąpić zdarzenia zakrzepowo-zatorowe, co stanowiłoby istotny czynnik zakłócający procedurę. Z drugiej strony, manipulacje przy nerwach błędnych mogą prowadzić do przejściowej lub trwałej dysfunkcji układu nerwowego przywspółczulnego, co stwarza ryzyko wystąpienia znacznych arytmii serca, a nawet nieodwracalnego zatrzymania akcji serca. Dlatego niezwykle ważne jest unikanie jakichkolwiek manipulacji przy nerwach błędnych podczas BCCAO.

Procedury pooperacyjne

7. Pomiary objętości zawału

W celu oceny wielkości zawałów myszy przeżyły 72 h po MCAO. Następnie zwierzęta poddano głębokiej anestezji, usunięto mózgi, zamrożono je gwałtownie w metylobutanie, wykonano przekroje i zabarwiono hematoksyliną (zgodnie z protokołem Papanicolau) w celu pomiaru objętości zawału. Przekroje mózgu pobrano w odstępach 600 μm, a objętości zawałów wyznaczono za pomocą analizatora obrazu (MCID core 7.0 Rev.2.0, GE Healthcare Niagara Inc) i skorygowano o obrzęk zgodnie z metodą Lin et al. 7,11.

8. Kryteria włączenia

Do badania włączono wyłącznie zwierzęta, u których podczas każdego z trzech epizodów BCCAO odnotowano redukcję CBF zmierzoną za pomocą LDF o ponad 90%. W idealnych warunkach monitorowanie LDF powinno być prowadzone w obu półkulach mózgu podczas BCCAO. Ze względów praktycznych monitorowanie LDF przeprowadzono wyłącznie w lewych półkulach, które zostaną później poddane MCAO. Podejście to było opisywane wcześniej 6,12. Wymagano, aby reperfuzja po każdym epizodzie BCCAO była całkowita (t.j. powrót do wartości bazowych). Aby skrócić czas przebywania myszy pod narkozą, nie monitorowano CBF podczas operacji MCAO. Jednak w badaniu pilotażowym z oddzielną grupą zwierząt monitorowano CBF za pomocą LDF podczas operacji MCAO. W tej grupie myszy konsekwentnie mierzono redukcję CBF o 90% w porównaniu z wartością bazową przed okluzją CCA. Dodatkowo, po usunięciu monofilamentów CBF powrócił do >90% odpowiednich wartości bazowych po okluzji CCA. Kryteria LDF te są ugruntowane w literaturze i prowadzą do uzyskania spójnych objętości zawałów 7. Włączono tylko zwierzęta, które po wybudzeniu z narkozy po MCAO uzyskały wynik w skali Bedersona co najmniej 1. Ponadto do badania włączono wyłącznie zwierzęta, które przeżyły 72 h po MCAO i nie wykazywały objawów krwawienia wewnątrzczaszkowego.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Zastosowany przez nas protokół BCCAO doprowadził do natychmiastowego i głębokiego (>90%) zmniejszenia CBF w przypadku okluzji obu tętnic CCA (Rysunek 1). Ponowne otwarcie tętnic CCA doprowadziło do całkowitej reperfuzji, co monitorowano za pomocą LDF (Rysunek 1). Po PC u zwierząt nie zaobserwowano oznak niepełnosprawności funkcjonalnej. Ponadto nie wystąpiła śmiertelność. Barwienie TUNEL przeprowadzone 72 h po BCCAO w oddzielnej grupie zwierząt nie wykazało oznak opóźnionej śmierci ko...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

W naszym badaniu wykazaliśmy, że trzy serie BCCAO, z których każda trwała jedną minutę i była poprzedzona reperfuzją przez pięć minut, stanowią odpowiedni izchemiczny bodziec PC do indukowania wczesnego IT.

Ponadto wykazaliśmy, że zastosowany protokół prekondycjonowania jest bezpieczną i mało inwazyjną procedurą, niewykazującą istotnej zachorowalności pooperacyjnej, oznak apoptozy w mózgu ani śmiertelności. Wcześniej opisano kilka różnych protokołów prekondycjonowania 6-7,12. Inni a...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Nie mamy nic do ujawnienia.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Binokularowy mikroskop chirurgicznyZeissStemi 2000 C
Źródło światła do mikroskopuZeissSteREO CL 1500 ECO
Mata grzewcza z sondą rektalnąFST21061-10
Rama stereotaktycznaDavid KopfModel 930
NożyczkiFST91460-11
Pinceta Dumont nr 5FST11251-10
Pinceta Dumont nr 7FST11271-30
Kleszczyk mikronaczyniowyFST00398-02
Aplikator do kleszczykówFST00072-14
Nożyczki sprężynoweFST15372-62
IgłotrzymaczFST12010-14
IgłyFeuerstein, SupramaBER 562-20
Nici jedwabne 5-0Feuerstein, Suprama
Nici jedwabne 7-0Feuerstein,Suprama
Nici jedwabne 8-0Feuerstein, Suprama

Bibliografia

  1. Roger, V. L., et al. Heart disease and stroke statistics--2011 update: a report from the American Heart Association. Circulation. 123, e18-e209 (2011).
  2. Khaja, A. M., Grotta, J. C. Established treatments for acute ischaemic stroke. Lancet. 369, 319-330 (2007).
  3. Foerch, C., Sitzer, M., Steinmetz, H., Neumann-Haefelin, T. Future demographic trends decrease the proportion of ischemic stroke patients receiving thrombolytic therapy: a call to set-up therapeutic studies in the very old. Stroke. 40, 1900-1902 (2009).
  4. Gidday, J. M. Cerebral preconditioning and ischaemic tolerance. Nat. Rev. Neurosci. 7, 437-448 (2006).
  5. Atochin, D. N., Clark, J., Demchenko, I. T., Moskowitz, M. A., Huang, P. L. Rapid cerebral ischemic preconditioning in mice deficient in endothelial and neuronal nitric oxide synthases. Stroke. 34, 1299-1303 (2003).
  6. Cho, S., et al. Obligatory role of inducible nitric oxide synthase in ischemic preconditioning. J. Cereb. Blood. Flow Metab. 25, 493-501 (2005).
  7. Kunz, A., et al. Neurovascular protection by ischemic tolerance: role of nitric oxide and reactive oxygen species. J. Neurosci. 27, 7083-7093 (2007).
  8. Dirnagl, U., et al. Standard operating procedures (SOP) in experimental stroke research: SOP for middle cerebral artery occlusion in the mouse. Nature Precedings. , (2010).
  9. Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model. J. Vis. Exp. (47), e2423(2011).
  10. Bederson, J. B., et al. Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination. Stroke. 17, 472-476 (1986).
  11. Lin, T. N., He, Y. Y., Wu, G., Khan, M., Hsu, C. Y. Effect of brain edema on infarct volume in a focal cerebral ischemia model in rats. Stroke. 24, 117-121 (1993).
  12. Kawano, T., et al. iNOS-derived NO and nox2-derived superoxide confer tolerance to excitotoxic brain injury through peroxynitrite. J. Cereb. Blood Flow Metab. 27, 1453-1462 (2007).
  13. Qi, S., et al. Sublethal cerebral ischemia inhibits caspase-3 activation induced by subsequent prolonged ischemia in the C57Black/Crj6 strain mouse. Neurosci. Lett. 315, 133-136 (2001).
  14. Wu, C., et al. A forebrain ischemic preconditioning model established in C57Black/Crj6 mice. J. Neurosci. Methods. 107, 101-106 (2001).
  15. Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. Rodent Stroke Model Guidelines for Preclinical Stroke Trials (1st Edition). J. Exp. Stroke Transl. Med. 2, 2-27 (2009).
  16. Nishio, S., et al. Hypothermia-induced ischemic tolerance. Ann. N.Y. Acad. Sci. 890, 26-41 (1999).
  17. DeBow, S., Colbourne, F. Brain temperature measurement and regulation in awake and freely moving rodents. Methods. 30, 167-171 (2003).
  18. Colbourne, F., Sutherland, G. R., Auer, R. N. An automated system for regulating brain temperature in awake and freely moving rodents. J. Neurosci. Methods. 67, 185-190 (1996).
  19. Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism? Neuroreport. 13, 1431-1435 (2002).
  20. Li, L., Zuo, Z. Isoflurane preconditioning improves short-term and long-term neurological outcome after focal brain ischemia in adult rats. Neuroscience. 164, 497-506 (2009).
  21. Xiong, L., et al. Preconditioning with isoflurane produces dose-dependent neuroprotection via activation of adenosine triphosphate-regulated potassium channels after focal cerebral ischemia in rats. Anesth. Analg. 96, 233-237 (2003).
  22. Spratt, N. J., et al. Modification of the method of thread manufacture improves stroke induction rate and reduces mortality after thread-occlusion of the middle cerebral artery in young or aged rats. J. Neurosci. Methods. 155, 285-290 (2006).
  23. Zarow, G. J., Karibe, H., States, B. A., Graham, S. H., Weinstein, P. R. Endovascular suture occlusion of the middle cerebral artery in rats: effect of suture insertion distance on cerebral blood flow, infarct distribution and infarct volume. Neurol. Res. 19, 409-416 (1997).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Middle Cerebral Artery OcclusionLaser Doppler FlowmetryCerebral Blood Flow MonitoringStereotactic Frame SurgeryMonofilament MCAO ProcedureInfarct Volume Measurement
Dwustronne zamknięcie wspólnych tętnic szyjnych jako odpowiedni bodziec prekondycjonujący w celu indukcji wczesnej tolerancji niedokrwiennej na ogniskowe niedokrwienie mózgu
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.