$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Mikroby zazwyczaj żyją w społecznościach. Uważa się, że organizacja przestrzenna komórek w społeczności wpływa na przetrwanie i funkcjonowanie społeczności1. Techniki przekroju optycznego, w tym mikroskopia konfokalna i dwufotonowa, okazały się przydatne do obserwacji organizacji przestrzennej zbiorowisk bakteryjnych i archeonów2,3. Połączenie obrazowania konfokalnego i fizycznego podziału kolonii drożdży ujawniło wewnętrzną organizację komórek4. Jednak bezpośrednia sekcja optyczna przy użyciu mikroskopii konfokalnej lub dwufotonowej była w stanie dotrzeć tylko do kilku warstw komórek w głąb kolonii drożdży. To ograniczenie jest prawdopodobnie spowodowane silnym rozpraszaniem światła z komórek drożdży4.
Tutaj prezentujemy metodę opartą na utrwalaniu i kriosekcji w celu uzyskania przestrzennego rozmieszczenia komórek fluorescencyjnych w społecznościach Saccharomyces cerevisiae. Używamy metanolu jako utrwalacza, aby zachować przestrzenne rozmieszczenie komórek. Stałe społeczności są infiltrowane związkiem OCT, zamrażane i kriowycinane w kriostacie. Obrazowanie fluorescencyjne skrawków ujawnia wewnętrzną organizację komórek fluorescencyjnych w społeczności.
Przykłady społeczności drożdży składających się ze szczepów wyrażających czerwone i zielone białka fluorescencyjne pokazują potencjał metody kriosekcji do ujawnienia przestrzennego rozmieszczenia komórek fluorescencyjnych, jak również ekspresji genów w koloniach drożdży2,3. Mimo że skupiliśmy się na zbiorowiskach Saccharomyces cerevisiae, tę samą metodę można potencjalnie zastosować do badania innych zbiorowisk drobnoustrojów.