Artykuł metodologiczny

Śmierć komórki związana z nieprawidłową mitozą obserwowana przez obrazowanie konfokalne w żywych komórkach rakowych

DOI:

10.3791/50568

⸱

21 sierpnia 2013

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Cancer Research Center, Sheba Medical Center, 2The Neufeld Cardiac Research Institute, Tel-Aviv University, 3Department of Physiology and Pharmacology, Tel-Aviv University, 4Imaging Unit, Sackler Faculty of Medicine, Tel-Aviv University, 5Biotechnology and Cell Signaling, Ecole Superieure de Biotechnologie Strasbourg, 6Department of Human Molecular Genetics and Biochemistry, Tel-Aviv University

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Cytotoksyczna aktywność fenantrydyny PJ-34 w komórkach nowotworowych przechodzących mitozę została udokumentowana w czasie rzeczywistym za pomocą obrazowania konfokalnego na żywo. PJ-34 zlikwidował ludzkiego raka piersi Komórki MDA-MB-231 zawierające extracentrosomy w mitozie. W przeciwieństwie do normalnej dwuogniskowej mitozy, pozacentrosomy nie były skupione w dwóch biegunach wrzeciona w obecności PJ-34.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pochodne fenantrenu działające jako silne inhibitory PARP1 zapobiegały dwuogniskowemu grupowaniu nadliczbowych centrosomów w wielocentrosomalnych ludzkich komórkach nowotworowych w mitozie. Fenantrydyna PJ-34 była najsilniejszą cząsteczką. Deklasteryzacja ekstracentrosomów powoduje awarię mitotyczną i śmierć komórki w komórkach wielocentrosomalnych. Większość litych nowotworów u ludzi ma wysokie występowanie ekstracentrosomów. Aktywność PJ-34 została udokumentowana w czasie rzeczywistym poprzez obrazowanie konfokalne żywych ludzkich komórek raka piersi MDA-MB-231 transfekowanych wektorami kodującymi fluorescencyjną γ-tubulinę, która jest bardzo obfita w centrosomach oraz fluorescencyjny histon H2b obecny w chromosomach. W transfekowanych komórkach MDA-MB-231 po leczeniu PJ-34 wykryto nieprawidłowe układy chromosomów i zdegrupowane ogniska γ-tubuliny reprezentujące zdegrupowane centrosomy. Nieskupione extracentrosomy w dwóch biegunach wrzeciona poprzedzały śmierć komórki. Wyniki te po raz pierwszy powiązały niedawno wykrytą wyłączną aktywność cytotoksyczną PJ-34 w ludzkich komórkach nowotworowych z deklasowaniem pozacentrosomów w mitozie i niewydolnością mitotyczną prowadzącą do śmierci komórki. Zgodnie z wcześniejszymi odkryciami zaobserwowanymi przez obrazowanie konfokalne komórek stałych, PJ-34 eliminował wyłącznie komórki rakowe za pomocą wielu centrosomów bez uszczerbku dla normalnych komórek przechodzących mitozę za pomocą dwóch centrosomów i wrzecion dwuogniskowych. Ta cytotoksyczna aktywność PJ-34 nie była wspólna dla innych silnych inhibitorów PARP1 i była obserwowana w MEF z niedoborem PARP1 zawierającym ekstracentrosomy, co sugeruje jego niezależność od hamowania PARP1. Obrazowanie konfokalne na żywo dostarczyło użytecznego narzędzia do identyfikacji nowych cząsteczek eliminujących komórki podczas mitozy.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Inhibitory PARP1 pochodzące z fenantrenu, w tym PJ-34, zostały zaprojektowane w celu ochrony komórek w stanie spoczynku przed apoptotyczną śmiercią komórek indukowaną przez energochłonną naprawę DNA za pośrednictwem PARP1 w warunkach stresu (udar lub zawał mięśnia sercowego)1. Jednak ostatnio odkryliśmy, że PJ-34, w stężeniu dwukrotnie wyższym niż ten, który indukuje hamowanie PARP1, może powodować śmierć komórek wyłącznie w ludzkich komórkach rakowych2,3. Im szybsza była proliferacja komórki, tym skuteczniejsza była eliminacja komórek. Aktywność cytotoksyczną PJ-34 przypisano degrupowaniu ekstracentrosomów w mitozie2. Wiele ludzkich komórek nowotworowych zawiera multicentrosomy4,5. Inkubacja ludzkich komórek raka piersi MDA-MB-231, które zawierają nadliczbowe centrosomy, z 20 μM PJ-34 skutecznie wyeliminowała te komórki w ciągu 72-96 godzin bez uszczerbku dla komórek w stanie spoczynku lub niektórych łagodnych komórek proliferujących zawierających dwa centrosomy w mitozie2,3. Łagodne komórki obejmowały ludzkie komórki nabłonka sutka MCF-10, ludzkie komórki śródbłonka (huvec) oraz pierwotne komórki mezenchymalne przygotowane z ludzkiej grasicy. Komórki te były oporne na cytotoksyczne działanie PJ-34. PJ-34 nie zakłócał ich cyklu komórkowego podczas 96-godzinnej inkubacji ani nie wpływał na ich centrosomy i tworzenie dwuogniskowego wrzeciona2,3.

Dwubiegunowy montaż centrosomów jest kluczowy dla tworzenia dwubiegunowego wrzeciona w mitozie4,5. Dlatego komórki z więcej niż dwoma centrosomami rozwinęły słabo poznany mechanizm molekularny, grupując swoje dodatkowe centrosomy na dwóch biegunach 4-9. Niepowodzenie dwubiegunowego składania ich centrosomów może powodować wielobiegunowe zniekształcone wrzeciona i nieprawidłową segregację chromosomów, która zatrzymuje cykl komórkowy w zatrzymaniu G2 / M i prowadzi do śmierci komórki przypisywanej niewydolności mitotycznej4,5. Mechanizmy molekularne leżące u podstaw deklastracji ekstracentrosomów są intensywnie badane10. Zrozumienie tego mechanizmu śmierci umożliwi wyłączną eliminację komórek nowotworowych przy jednoczesnym oszczędzaniu zdrowych tkanek 5,10.

Tak więc, związki, które aktywują mitotyczną katastroficzną śmierć komórki, oferują nowy tryb selektywnej terapii przeciwnowotworowej, która może być skuteczna w szerokim zakresie ludzkich nowotworów litych. Nasze wyniki sugerują, że obrazowanie konfokalne może być wykorzystane do identyfikacji cząsteczek wpływających na grupowanie się pozacentrosomów w mitozie2,3, co sprawia, że związki te są kandydatami na leki ukierunkowane na raka.

Udokumentowaliśmy cytotoksyczną aktywność fenantrydyny PJ-34 poprzez skanowanie stałych i żywych ludzkich komórek rakowych (z dużym udziałem ekstracentrosomów w mitozie) w porównaniu z normalnymi komórkami. Poniżej znajduje się opis krok po kroku procedur obrazowania stosowanych do identyfikacji aktywności cytotoksycznej PJ-34 w ludzkich komórkach nowotworowych.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Przygotowanie hodowli komórkowej

Komórki MDA-MB-231 zostały zakupione w ATCC (American Type Culture Collection) i przechowywane w ciekłym azocie.

  1. Wysiew 106 komórek MDA-MB-231 na szalce Petriego o średnicy 92 mm w 10 ml kompletnej pożywki zawierającej Dulbeco Modified Eagle Medium (DMEM), 10% surowicy końskiej, 1% L-glutaminy i 1% Penstrep-Amfoterycyny B. Pozwól komórkom namnażać się do około 80-100% konfluencji.
  2. Usuń pożywkę hodowlaną z naczynia i wyrzuć.
  3. Umyj krótko warstwę komórkową 0,25% (w/v) roztworem trypsyny-EDTA, aby usunąć wszelkie ślady surowicy.
  4. Dodać 2,0 ml roztworu trypsyny-EDTA do naczynia i obserwować komórki pod odwróconym mikroskopem, aż warstwa komórkowa zostanie zdyspersjonowana (zwykle w ciągu 5 do 15 minut).
  5. Dodać 18 ml kompletnej pożywki wzrostowej i delikatnie odessać komórki pipetą. Przełóż do tuby.
  6. Odwirować zawiesinę komórek z prędkością 1 200 obr./min.
  7. Zawiesić osad komórkowy w 24 ml pożywki hodowlanej.
  8. Dodać 2 ml zawiesiny komórkowej do naczyń ze szklanym dnem o średnicy 35 mm (około 25% konfluencji) i umieścić w inkubatorze (5%CO2, 37 °C).
  9. Rozwiązania:
    1. Kompletna pożywka do proliferacji komórek: DMEM z 10% FBS, 1% antybiotykami (100 jednostek/ml penicyliny G, 100 μg/ml streptomycyny, roztwór Pen-Strep-Ampho) i 2 mM L-glutaminy.
    2. Roztwór trypsyny-EDTA, zawierający 0,25% trypsyny-EDTA.
  10. Dania:
    Szalki Petriego o średnicy 92 mm.
    Naczynia hodowlane ze szkła o średnicy 35 mm pokryte poli-D-lizyną.

2. Przygotowanie komórek do obrazowania konfokalnego na żywo

  1. Nasiona 2 x 105 komórek MDA-MB-231 w szalkach hodowlanych ze szklanym dnem w 2 ml kompletnej pożywki, jak wspomniano w sekcji 1. Gdy hodowla komórkowa osiągnie zbieg 60-70% (około 3-4 x 105 komórek na talerzu), przystąp do transfekcji.
  2. Transfekcję komórek dwoma plazmidami kodującymi białka fuzyjne γ-tubulina-GFP (do fluorescencyjnego wykrywania centrosomów) i histon-RED (H2b-RED, do fluorescencyjnego wykrywania chromosomów) przy użyciu odczynnika do transfekcji liposomalnej Jet-PI, zgodnie z protokołem wytwarzania. Krótko wymieszaj 2 μg z każdego plazmidu w probówce ze 100 μl NaCl (150 mM). Zmieszać odczynnik do transfekcji (100 μl) ze 100 μl NaCl (150 mM) w drugiej probówce i inkubować przez 5 minut w temperaturze pokojowej (RT). Następnie połącz oba roztwory, wymieszaj (używając łagodnego wiru) i odwiruj. Inkubować przez 30 minut w temperaturze pokojowej.
  3. Podczas inkubacji mieszaniny do transfekcji przemyć komórki raz PBS i zastąpić pożywkę komórkową 2 ml ciepłego DMEM bez dodatków (37 °C).
  4. Delikatnie dodać mieszaninę transfekcji do komórek w DMEM, a następnie umieścić komórki z powrotem w inkubatorze (37 °C, 5% CO2) na 8 godzin.
  5. Po 8 godzinach inkubacji zastąpić DMEM 2 ml kompletnej pożywki i inkubować komórki w inkubatorze przez 24 godziny.
  6. 24 godziny po transfekcji zastąpić pożywkę komórek 2 ml kompletnej pożywki zawierającej 20 μM PJ-34.
  7. Inkubować komórki przez dodatkowe 18 godzin (37 °C, 5% CO2 ).
  8. Poddać komórki obrazowaniu konfokalnemu na żywo przez co najmniej 16 godzin w komorze obrazowania, utrzymując komórki w temperaturze 5% CO2 i 37 °C.
  9. Równolegle zbadaj skuteczność transfekcji 36 godzin po transfekcji za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej w następujący sposób:
    1. Wysiew 2 x 105 komórek MDA-MB-231 na płytce 6-dołkowej zawierającej 1 szkiełko nakrywkowe na basenik w 2 ml kompletnego podłoża.
    2. Przetransfekować komórki, jak wspomniano w punktach 2.2-2.5.
    3. 36 godzin po transfekcji utrwalić transfekowane komórki zamontowane na szkiełku nakrywkowym przez inkubację w zimnym roztworze metanolu: acetonu (1:1), 7 min, -20 °C.
    4. Zassać roztwór utrwalający i pozostawić szkiełko nakrywkowe z zamontowanymi komórkami do wyschnięcia w kapturze chemicznym.
    5. Nałóż odczynnik zapobiegający blaknięciu ProLong Gold z DAPI i pozostaw szkiełko nakrywkowe do wyschnięcia w ciemności przez 6 godzin.
    6. Zbadaj szkiełko pod mikroskopem fluorescencyjnym i oblicz procent transfekowanych komórek (sygnały czerwone i zielone) w całkowitej populacji komórek (barwienie DNA przez DAPI). Pożądany procent transfekcji wynosi około 20-40%, gdy zlicza się 100-200 komórek.

3. Parametry techniczne ustawień skanera obrazowania konfokalnego na żywo

  1. Tryb skanowania XYZT; Otworek [airy] 1.00; Powiększenie 3,5; Rozdzielczość: 8 bitów; Laser DPSS 561 nm; Argon, laser widzialny 488 nm; Laser He/Ne widzialny 633 nm; Obiektyw HCX PL APO CS 63X 1.40 OIL UV; Przysłona numeryczna 1,4; Prędkość skanowania 700 Hz; Współczynnik załamania światła 1,52.
  2. Prezentacja obrazu 3D została przygotowana przez oprogramowanie IMARIS Imaging Software 7.0.

4. Konfokalne obrazowanie mitozy w komórkach stałych

  1. Nasiona 2 x 105 komórek raka piersi MDA-MB-231 (ATCC), normalnych mysich fibroblastów zarodkowych (MEF) lub MEF z niedoborem PARP1 (PARP-/-, przygotowane przez dr Francoise Dantzer) na szklanych szkiełkach nakrywkowych na płytce 6-dołkowej w 2 ml kompletnego podłoża. Szkiełka nakrywkowe przemyto 96% etanolem, a następnie przemyto sterylną wodą DD, suszono przez 2 godziny i umieszczano w każdej studzience 6-dołkowego naczynia.
  2. Dodaj PJ-34 (10-30 μM) do pożywki i inkubuj komórki przez wymagany okres (zwykle do 96 godzin).
  3. Jednorazowo przemyć szkiełka nakrywkowe PBS (sól fizjologiczna buforowana fosforanami) i utrwalić komórki za pomocą inkubacji w lodowatym roztworze metanolu: acetonu (1:1), 7 min, -20 °C.
  4. Zassać roztwór utrwalający i pozostawić szkiełka nakrywkowe do wyschnięcia w kapturze chemicznym (na tym etapie szkiełka nakrywkowe można przechowywać w temperaturze -20 °C przez kilka tygodni).
  5. Przemyj szkiełka nakrywkowe raz PBST (PBS uzupełniony 0,1% Tween-20) w celu przepuszczalności błon komórkowych i zablokuj komórki 10% NDS (normalna surowica osła) w PBST ("roztwór blokujący") przez 1 godzinę w RT.
  6. Inkubować permeabilizowane utrwalone komórki z pierwszorzędowymi przeciwciałami przez 2 godziny w temperaturze pokojowej (do barwienia wrzecion i centrosomów). Przeciwciała rozcieńcza się w roztworze blokującym w następujący sposób: tubulina anty-α (rozcieńczenie 1:250) i tubulina anty-γ (rozcieńczenie 1:200). Przeciwciała pierwszorzędowe nakłada się w następujący sposób: nanieść 100 μl (w kropli) mieszaniny przeciwciał w roztworze blokującym na każde szkiełko nakrywkowe na pokrywie płytki 6-dołkowej (osłonka jest odwrócona do góry nogami). Delikatnie połóż szkiełko nakrywkowe na kropli przeciwciał, komórki nasienne skierowane w stronę kropli. Inkubować szkiełka nakrywkowe skierowane w stronę przeciwciał przez 2 godziny w temperaturze pokojowej.
  7. Umieść szkiełka nakrywkowe z powrotem w studzienkach i umyj komórki 3 razy PBST. Następnie należy zastosować tę samą procedurę, opisaną w ppkt 4.6, do znakowania komórek na szkiełkach nakrywkowych fluorescencyjnymi przeciwciałami drugorzędowymi. Inkubować komórki na szkiełkach nakrywkowych z przeciwciałami drugorzędowymi przez 1 godzinę RT w ciemności. Przeciwciała rozcieńcza się w roztworze blokującym w następujący sposób: Alexa Fluor 488 (rozcieńczenie 1:1,000; zielony) i Alexa Fluor 568 (rozcieńczenie 1:1,000; czerwony).
  8. Zamontuj szkiełka nakrywkowe za pomocą odczynnika zapobiegającego blaknięciu ProLong Gold z DAPI (do barwienia chromosomów) i inkubuj przez noc w temperaturze pokojowej w ciemności do wyschnięcia.
  9. Zbadaj szkiełka nakrywkowe za pomocą mikroskopii konfokalnej.

5. Żywotność komórek mierzona produkcją ATP

Produkcja ATP jest mierzona za pomocą zestawu do wykrywania luminescencyjnego ATP.

  1. Wysiewaj komórki na 96-dołkowej płytce, około 20 000 komórek w pożywce 800 μl w każdym dołku. Do wyznaczenia luminescencji tła podłoża należy użyć trzech ślepych studzienek.
  2. Przygotować serię rozcieńczeń wzorca ATP od około 10 μM do 100 μM i przechowywać na lodzie.
  3. Do każdego dołka dodać 50 μl detergentu i potrząsać płytką przez 5 minut w wytrząsarce orbitalnej z prędkością 700 obr./min.
  4. Rozpuścić rozpuszczenie zawartości każdej fiolki "liofilizowanego substratu" w 5 ml znajdującego się w zestawie "buforu substratowego".
  5. Dodać 50 μl odtworzonego roztworu substratu do studzienek i wstrząsać płytką przez 5 minut na wytrząsarce orbitalnej z prędkością 700 obr./min.
  6. Trzymaj talerz w ciemności przez 10 minut.
  7. Zmierz luminescencję każdej studzienki za pomocą czytnika mikropłytek ELISA.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

PJ-34 jest stabilną, rozpuszczalną w wodzie fenantrydyną1 (Rysunek 1). Nasze wcześniejsze wyniki wykazały śmierć komórek oraz rozproszenie dodatkowych centrosomów w kilku typach utrwalonych wielocentrosomalnych komórek nowotworowych traktowanych PJ-34. Z kolei normalne komórki proliferujące nie uległy uszkodzeniu2,3. Centrosomy w utrwalonych komórkach z dodatkowymi centrosomami zidentyfikowano poprzez podwójne znakowanie przeciwciałami skierowanymi przeciwko centrine1 i γ-tubulinie<...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Obrazowanie konfokalne na żywo dostarczyło dokumentacji cytotoksycznego działania PJ-34 w żywych komórkach wielocentrosomalnych podczas mitozy (ryc. 3 i informacje dodatkowe). Była to pierwsza żywa dokumentacja przypisująca cytotoksyczność PJ-34 w ludzkich komórkach nowotworowych dodatkowym centrosomom degrupowaniu i śmierci komórki, co sugeruje indukcję mitotycznej śmierci komórki katastrofy przez PJ-345-9. W przeciwieństwie do tego, dwuogniskowe grupowanie nadliczbowych centrosomów zaobserwo...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródła finansowania tych badań: wspólny fundusz firmy zajmującej się transferem technologii Uniwersytetu w Tel Awiwie, RAMOT i Centrum Medycznego Sheba (M. C-A. i S.I.), ICRF - Izraelska Fundacja Badań nad Rakiem (M. C-A.) i Izraelska Fundacja Naukowa (S.I.).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
ODCZYNNIKI
DMEMInvitrogen (GIBCO)41965 
FBS (Surowica bydlęca płodu)Invitrogen (GIBCO)12657 
Roztwór Pen-Strep-AmphoBiological Industries, Izrael03-033-1B 
L-glutaminaInvitrogen (GIBCO)25030-024 
0,25% Tripsin-EDTAInvitrogen (GIBCO)25200 
92 mm szalki PetriegoNunc,Thermo scientific150350 
35 mm naczynia do hodowli ze szkła powlekanego poli-D-lizynąMatTek Corporation, USAP35GC-0-14-C 
Zestaw do detekcji luminescencyjnej ATPAbcamab113849 
NDS (Normalna surowica osła)Jackson ImmunoResearch017-000-121 
Przeciwciało anty &alfa;-tubulinoweSigmaT9026rozcieńczenie 1:250 (IF)
Przeciwciało anty γ-tubulinoweSigmaT5192rozcieńczenie 1:200 (IF)
Alexa Fluor 488 Goat Anti-Mouse IgGInvitrogenA-110171:1,000 rozcieńczenie (IF)
Alexa Fluor 568 Donkey Anti-Rabbit IgGInvitrogenA-100421:1,000 rozcieńczenie (IF)
Odczynnik przeciwblaknięcie ProLong Gold z DAPI (mocowanie)InvitrogenP36935 
JetPEI (odczynnik do transfekcji liposomalnej )Polyplus101-10 
EQUIPMENT
Mikroskop konfokalnyLeica (Mannheim, Niemcy)TCS SP5II 

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Jagtap, P., et al. Novel phananthridine inhibitors of poly(adenosine 5'-diphosphate-ribose) synthetase: Potent cytoprotective and antishock agents. Crit. Care Med. 30, 1071-1082 (2002).
  2. Castiel, A., et al. A small molecule exclusively eradicates human cancer cells: Extra-centrosomes de-clustering agent. BMC Cancer. 11 (1), 412(2011).
  3. Inbar-Rozensal, D., et al. A selective eradication of human nonhereditary breast cancer cells by phenanthridine -derived polyADP-ribose polymerase inhibitors. Breast Cancer Res. 11 (6), R78(2009).
  4. Gergely, F., Basto, R. Multiple centrosomes: together they stand, divided they fall. Genes Dev. 22, 2291-2296 (2008).
  5. Godinho, S. A., Kwon, M., Pellman, D. Centrosomes and cancer: how cancer cells divide with too many centrosomes. Canc. Met. Rev. 28, 85-98 (2009).
  6. Doxsey, S. Re-evaluating centrosome function. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2, 688-698 (2001).
  7. Walczak, C. E., Heald, R. Mechanisms of mitotic spindle assembly and function. International Rev. of Cytology. 265, 111-158 (2008).
  8. Ogden, A., Rida, P. C. G., Aneja, R. Let's huddle to prevent a muddle: centrosome declustering as an attractive anticancer strategy. Cell Death Differ. 19, 1255-1267 (2012).
  9. Kramer, A., Anderhub, S., Maier, B. Mechanisms and Consequences of centrosomes clustering in cancer cells. The Centrosome: Cell and Molecular mechanisms of functions and disfunctions in disease. Schatten, E. , Humana Press Springer. 255-277 (2012).
  10. Galimberti, F., et al. Anaphase Catastrophe Is a Target for Cancer Therapy. Clin. Cancer Res. 17, 1218-1222 (2011).
  11. Kanai, M., et al. Haploinsufficiency of poly(ADP-ribose) polymerase-1-mediated poly(ADP-ribosyl)ation for centrosome duplication. Biochem. Biophys. Res. Commun. 359, 426-430 (2007).
  12. Gartner, E. M., Burger, A. M., Lorusso, P. M. Poly(ADP-ribose) polymerase inhibitors: a novel drug class with a promising future. Cancer J. 16, 83-90 (2010).
  13. Wahlberg, E., et al. Family-wide chemical profiling and structural analysis of PARP and tankyrase inhibitors. Nature Biotechnology. 30, 283-288 (2012).
  14. Rouleau, M., Patel, A., Hendze, M. J., Kaufmann, S. H., Poirier, G. G. PARP inhibition: PARP1 and beyond. Nature Rev. Cancer. 10, 293-301 (2010).
  15. Leber, B., et al. Proteins Required for Centrosome Clustering in Cancer Cells. Sci. Transl. Med. 2 (33), 33-38 (2010).
  16. Kwon, M., et al. Mechanisms to suppress multipolar division in cancer cells with extra centrosomes. Gene Dev. 22, 2189-2203 (2008).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

PJ 34rozgrupowanie centrosom wobrazowanie konfokalne ywych kom rekniepowodzenie mitozymier kom rek nowotworowychgamma tubulinahistona H2bkom rki wielocentrosomalneinhibicja PARP1MDA MB 231

Powiązane artykuły