Opisano standaryzowany mysi model krwotoku podpajęczynówkowego za pomocą wewnątrzświetlnego koła perforacji Willisa. Perforacja naczynia i krwawienie podpajęczynówkowe są monitorowane za pomocą monitorowania ciśnienia śródczaszkowego. Ponadto rejestrowane i kontrolowane są różne parametry życiowe w celu utrzymania warunków fizjologicznych.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Mysi model krwotoku podpajęczynówkowego
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
W tej publikacji wideo prezentowany jest standaryzowany mysi model krwotoku podpajęczynówkowego (SAH). Krwawienie jest wywoływane przez wewnątrznaczyniowe koło perforacji Willisa (CWp) i potwierdzane przez monitorowanie ciśnienia śródczaszkowego (ICP). W ten sposób uzyskuje się jednorodną dystrybucję krwi w przestrzeniach podpajęczynówkowych otaczających krążenie tętnicze i szczeliny móżdżku. Fizjologia zwierząt jest utrzymywana przez intubację, wentylację mechaniczną i ciągłe monitorowanie on-line różnych parametrów fizjologicznych i sercowo-naczyniowych: temperatury ciała, ogólnoustrojowego ciśnienia krwi, tętna i wysycenia hemoglobiny. W ten sposób ciśnienie perfuzji mózgowej może być ściśle monitorowane, co skutkuje mniej zmienną objętością wynaczynionej krwi. Pozwala to na lepszą standaryzację wewnątrznaczyniowej perforacji filamentu u myszy i sprawia, że cały model jest wysoce powtarzalny. Dzięki temu jest łatwo dostępny do badań farmakologicznych i patofizjologicznych na myszach typu dzikiego i genetycznie zmienionych.
Wprowadzenie
SAH to podtyp udaru o najmniej korzystnym wyniku dla pacjentów: 40% pacjentów umiera w ciągu miesiąca po krwawieniu1, a ci, którzy przeżyli, rzadko mają klinicznie korzystny wynik.
Zdecydowana większość spontanicznych SAH (80%) jest spowodowana pęknięciem tętniaków wewnątrzczaszkowych, które najczęściej znajdują się wzdłuż przedniej i tylnej tętnicy łączącej, tętnicy podstawnej i tętnicy środkowej mózgu (MCA)2.
Takie tętniaki są trudne do modelowania u zwierząt, dlatego też modele zwierzęce SAH są wykonywane albo przez wstrzyknięcie krwi do przestrzeni podpajęczynówkowej/komór mózgowych, alb....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie zabiegi chirurgiczne zostały poddane ocenie etycznej i zatwierdzone przez rząd Górnej Bawarii (numer referencyjny: 55.2-1-54-2532.3-13-13 i -2532-136-11). Zwierzęta to samce myszy C57BL/6 o masie ciała około 25 g.
1. Przygotowanie zwierząt
- Wywołaj znieczulenie, umieszczając mysz w komorze. Przepłukać komorę 5% izofluranem, aż zwierzę straci przytomność.
- Wstępnie zmieszane środki znieczulające wstrzyknąć dootrzewnowo: fentanyl (0,05 mg/kg), midazolam (5 mg/kg) i medetomidynę (0,5 mg/kg). Sprawdzaj refleksy przed i regularnie w trakcie zabiegu. Wstrzykuj ponownie jedną trzecią początkowej ilości co godzinę, aby....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Śmiertelność
Po opanowaniu techniki chirurgicznej procedura ta nie powoduje śmiertelności śródoperacyjnej. Ponadto krwawienie można wywołać u niemal wszystkich zwierząt. Śmiertelność pooperacyjna wynosi 30-40%, przy czym większość zwierząt ginie w 1. dobie po zabiegu (Rycina 5).
Wartości ICP po SAH
ICP przed krwawieniem wynosi około 4 mmHg. Krwawienie powoduje gwałtowny wzrost ICP do 120 mmHg. Następnie wartości ICP stabilizują.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Możliwości leczenia po SAH są rzadkie i w większości nieskuteczne. W związku z tym należy lepiej zrozumieć patofizjologię pokrwotocznego uszkodzenia mózgu, aby zidentyfikować nowe cele terapeutyczne i opracować nowe podejścia terapeutyczne. Standaryzowane i dobrze odtwarzalne modele zwierzęce zwierząt modyfikowanych genetycznie, tj. myszy, mają kluczowe znaczenie dla takich badań. Model CWp stał się szeroko stosowanym modelem SAH, ponieważ bardzo przypomina patofizjologię u ludzi; Jednak jego stosowanie u myszy .......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Obecne badania są finansowane przez Fundację Badawczą Solorza-Zaka.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Equipment | |||
| operation mikroskop | Leica | KL2500 | |
| parownik izofluranowy | Harvard Instruments | Ciągły przepływ waporyzatora | |
| Higo Sachs | |||
| temperatury Hugo Sachs | Type 340 | ||
| FHC | DC Wiertarka | ||
| dentystyczna | Monitor ICP Paggen | Labset-N | |
| Monitor | ICP Monitor ICP | ||
| Ciśnieniomierz | AD Instruments | FE221 | |
| World Precision Instruments | SP101IZ | ||
| pulsoksymetr | Kent Scientific | MouseSTAT | |
| Analogowy monitor danych LDF | Perimed | Periflux 5000 | |
| AD Instruments | Power Lab 16/35 | ||
| Materiał | |||
| cement do mocowania sondy ICP | cementowy | Speiko | |
| do mocowania sondy LDF | Klej cyjanoakrylowy Bob Smith Industries (zestaw Maxi Cure i Insta) | ||
| cewnik żylny | Johnson Johnson | Jelco skrzydlaty cewnik dożylny; REF 4076 | zmodyfikowana rurka intubacyjna |
| do cewnika udowego | Smiths Medical | Fine Bore Polythene Tubing; średnica wewnętrzna: 0,28 mm, średnica zewnętrzna: 0,61 mm; REF 800/100/100 | przycięty do długości 30 cm |
| filament do perforacji naczyń | Ethicon | Prolene 5-0 | przycięty do 12 mm |
| długości sprzęt chirurgiczny | Fine Scientific Instruments | kleszcze medyczne #5, nożyczki do naczyń 8 cm, mikroklips 4 mm szczęka |
Bibliografia
- Cahill, J., Zhang, J. H. Subarachnoid hemorrhage: is it time for a new direction. Stroke. 40, 86-87 (2009).
- van Gijn, J., Kerr, R. S., Rinkel, G. J. Subarachnoid haemorrhage. Lancet. 369, 306-318 (2007).
- Lin, C. L., et al.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
