Zwierzęce modele chorób dziecięcych mogą doświadczyć wczesnego początku i agresywnego postępu choroby. Klinicznie istotne podanie terapii młodym modelom myszy może być technicznie trudne. Protokół ten opisuje nieinwazyjną metodę wstrzykiwań dożylnych dla nowonarodzonych myszy w ciągu pierwszych dwóch dni życia po urodzeniu.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Wstrzyknięcia dożylne u nowonarodzonych myszy
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Wstrzyknięcie dożylne jest klinicznie stosowanym sposobem dostarczania leków. W przypadku dorosłych gryzoni i większych zwierząt wstrzyknięcia dożylne są technicznie wykonalne i rutynowe. Jednak niektóre modele mysie mogą mieć wczesny początek choroby z szybkim postępem, który utrudnia podawanie potencjalnych terapii. Żyła skroniowa (lub twarzowa) znajduje się tuż przed zatyczką uszną u myszy i jest wyraźnie widoczna przez pierwsze dwa dni po urodzeniu po obu stronach głowy przy użyciu mikroskopu preparacyjnego. W tym oknie można wstrzyknąć do żyły skroniowej objętość do 50 μl. Iniekcja jest bezpieczna i dobrze tolerowana zarówno przez młode, jak i matki. Typowa procedura iniekcji jest wykonywana w ciągu 1-2 minut, po czym szczenię wraca do klatki domowej. W trzeciej dobie po porodzie żyła jest trudna do uwidocznienia, a procedura iniekcji staje się technicznie zawodna. Technika ta została wykorzystana do dostarczania wektorów wirusa związanego z adenowirusem (AAV), które z kolei mogą zapewnić prawie całą cielesną, stabilną ekspresję transgenu przez całe życie zwierzęcia, w zależności od wybranego serotypu wirusa.
Wprowadzenie
Dostarczanie leków do ośrodkowego układu nerwowego (OUN) w mysich modelach chorób dziecięcych pozostaje wyzwaniem. Myszy, które modelują stany chorobowe noworodka, są niewymiarowe i niedojrzałe rozwojowo, a zatem mogą być trudne do bezpośredniego wstrzyknięcia w odpowiednie struktury w obrębie OUN. Donaczyniowe wstrzykiwanie środków leczniczych jest nieinwazyjną, dobrze tolerowaną metodą dostarczania komórek, leków lub wektorów wirusowych do całego organizmu, w tym do OUN1-5 i siatkówki3,5-9. Poprzednie publikacje opisywały iniekcję żyły skroniowej twarzy przy użyciu transiluminatora10,11, bez mikroskopu preparacyjnego11,12 ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie procedury wymienione w protokole zostały zatwierdzone przez Komitet Instytutu Użytkowania i Opieki nad Zwierzętami (IACUC) Uniwersytetu Stanowego Ohio.
1. Przygotowanie przestrzeni roboczej
- Zebrać mokry lód w celu znieczulenia młodych myszy, pustą klatkę w celu oddzielenia matki od ściółki, mikroskop preparacyjny, źródło światła, które można ustawić pod kątem do wstrzyknięcia (użycie źródła światła pod kątem 90° do miejsca wstrzyknięcia zasłania żyłę), czystą powierzchnię do umieszczenia zwierzęcia do wstrzyknięcia, bawełniane waciki, strzykawka insulinowa 3/10 cc z igłą 3/8" 30 G (jedna na zwierzę) i 1% ro....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Podczas prawidłowej iniekcji żyła powinna na chwilę stać się przeźroczysta lub zblednąć. W przypadku wstrzykiwania barwnika całe szczenię powinno w ciągu kilku sekund stać się niebieskie. Jeśli doszło do nieprawidłowej iniekcji, często w okolicy głowy lub szyi pojawia się skoncentrowany bolus podskórny, a wstrzykiwana substancja może wyciekać z miejsca wkłucia. Nieprawidłowe iniekcje mogą również prowadzić do powstania siniaków wokół gardła. Szczenięta, które otrzymały zastrzyki podskórne (i.e. iniekcja nie zost.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Wewnątrznaczyniowe dostarczanie środków do OUN lub w całym ciele jest trudne w mysich modelach choroby u noworodków. Opisany protokół jest szybkim, stosunkowo nieinwazyjnym sposobem dożylnego podawania roztworów noworodkom myszy przy minimalnych wymaganiach sprzętowych. Chociaż żyła skroniowa twarzy może być oglądana gołym okiem, zastrzyki mogą mieć większą dokładność przy użyciu mikroskopu i światłowodowego źródła światła, szczególnie w przypadku niewprawnego wstrzykiwacza. Wstrzyknięcia donaczyniowe u nowonarodzonych m.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Autorzy pragną podziękować NINDS, FightSMA i Families of SMA za wsparcie finansowe. SEGL jest wspierany przez grant szkoleniowy NINDS #5T32NS077984-02.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Strzykawka insulinowa Thinpro | Terumo | SS30M3009 | 3/10 cc, igła 3/8", 30 G, 1 na mysz |
| Niebieski barwnik Evans | Sigma-Aldrich | E2129 | Rozcieńczony do 1% z 1x aplikatory z bawełnianą końcówką buforowaną fosforanem |
| Fisher Scientific | 23-400-101 | ||
| Światłowodowe źródło światła | Fisher Scientific | 12-562-36 | |
| Sekcja mikroskop |
Bibliografia
- Foust, K. D., et al. Intravascular AAV9 preferentially targets neonatal neurons and adult astrocytes. Nature. 27, 59-65 (2009).
- Dominguez, E., et al. Intravenous scAAV9 delivery of a codon-optimized SMN1 sequence rescues SMA mice. ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
