Artykuł metodologiczny
Hormony gonadalne, takie jak estrogen, modulują tworzenie pamięci w wielu eksperymentalnych paradygmatach, w tym w pamięci wygaszania strachu. Protokół ten opisuje zestaw metod badania wpływu hormonów gonad, szczególnie podczas wymierania u naturalnie zmieniających się na cyklach samic, w tym monitorowanie cyklu rujowego i egzogenne podawanie estrogenów.
Wygaśnięcie warunkowego strachu było szeroko badane u samców gryzoni. Ostatnio pojawia się coraz więcej badań wskazujących, że mechanizmy neuronalne dla niektórych zadań behawioralnych i zachowań reagowania są różne u kobiet i mężczyzn. Wykorzystanie kobiet w badaniach naukowych może stanowić wyzwanie ze względu na zmienność hormonów gonad podczas ich cyklu rujowego. Protokół ten opisuje dobrze ugruntowane procedury, które są przydatne w badaniu roli estrogenu w wygaszaniu strachu, konsolidacji pamięci u samic szczurów. Faza cyklu rujowego i podanie egzogennego estrogenu przed treningiem wygaszania może wpływać na wycofanie się z wygaszania 24 godziny później. Opisana tutaj technika pobierania wymazów z pochwy w celu identyfikacji fazy rujowej pomaga w badaniu i manipulacji naturalnie krążącymi hormonami gonadalnymi. Zastosowanie tego podstawowego modelu gryzoni może dodatkowo nakreślić mechanizmy, za pomocą których estrogen może modulować pamięć wygaszania strachu u samic.
Wrodzone różnice płci są obserwowane w różnych zachowaniach poznawczych i paradygmatach uczenia się zarówno u ludzi, jak i u gryzoni. Na przykład doniesiono, że kobiety mają na ogół silniejsze zdolności werbalne i zorientowane na szczegóły, podczas gdy mężczyźni mają lepsze zdolności przestrzenne1-3. Te różnice między płciami mogą wynikać częściowo z wpływu hormonów gonadalnych. Wysoki poziom estradiolu poprawia wydajność w zadaniach, w których kobiety są lepsze, ale pogarsza wydajność w zadaniach, które mężczyźni zazwyczaj wykonują dobrze4-6. Chociaż dowody te są przekonujące, ograniczona zdolność do całkowitej kontroli środowisk eksperymentalny....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
UWAGA: Wszystkie procedury w tym protokole zostały zatwierdzone przez Podkomitet ds. Badań nad Zwierzętami, który służy jako Instytucjonalny Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami (IACUC) dla Massachusetts General Hospital i są zgodne z wytycznymi National Institutes of Health.
1. Procedura trzymania i obchodzenia się ze zwierzętami
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
W niniejszym protokole przypominania wygaszania lęku wskaźnikiem lęku był procentowy poziom zamrożenia (freezing). Zwierzęta, u których wygaszanie przebiegło pomyślnie i które zachowały pamięć o treningu wygaszania, wykazywały niski poziom lęku w ostatnim dniu testów behawioralnych podczas przypominania wygaszania. Samce i samice szczurów nie różnią się znacząco w ekspresji warunkowego lęku podczas faz kondycjonowania, wygaszania i przypominania (Rysunek 2). Jednakże różnica płciowa staje się widoczna, g.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wygaszanie strachu było szeroko badane u samców szczurów, a mechanizmy neuronalne pośredniczące w warunkowym wygaszaniu strachu zostały zidentyfikowane i ocenione na podstawie różnych manipulacji. Stosunkowo niewiele badań dotyczyło samic szczurów lub roli hormonów gonad w wymieraniu strachu. Aby dokładnie zbadać wpływ estrogenu na wygaszanie strachu, naturalnie jeżdżące na rowerze samice szczurów są poddawane trzydniowemu paradygmatowi behawioralnemu. Procedura ta składa się z faz habituacji/warunkowania, wygaszania i p.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy tego manuskryptu nie mają konkurencyjnych interesów finansowych ani innych konfliktów interesów, które mogliby ujawnić.
Mohammed R. Milad jest wspierany przez grant NIMH R01 MH097880 oraz fundusze instytucjonalne z Wydziału Psychiatrii MGH.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Komora kondycjonująca strach | Coulbourn Instruments | ||
| Graphic State | Coulbourn Instruments | ||
| Skrzynka tłumiąca dźwięk | Med Associates, Inc. | NIR-022MD | |
| Estradiol | Sigma-Aldrich | E1024 | W oleju sezamowym do wstrzykiwań podskórnych |
| Olej sezamowy | Sigma-Aldrich | S3547-250ML | |
| Freezescan | Cleversys, Inc. | ||
| Zanurz szybkie barwienie | Jorgensen Laboratories, Inc. | J0322A1, J0322A2, J0322A3 | |
| Aplikatory z bawełnianą końcówką | Fisher Scientific | 23-400-114 | 6-calowe, sterylne |
| 0,9% sól fizjologiczna | LabChem, Inc. | LC23460-2 | Chlorek sodu ze |
| szkiełkami mikroskopowymi Selectfrost | Fisher Scientific | 12-550-003 | |
| Virex II 256 | Diversey, Inc. | 5019317 | Rozcieńczyć w stosunku 1:256 wodą |
| Luer-Lok Tip 1ml Strzykawki | Becton Dickinson | 309628 | |
| Jednorazowe igły podskórne | Exelint International, Co. | 26402 | rozmiarze 26 |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE
Poproś o pozwolenie