Opracowaliśmy nowatorski model ex vivo do badania działania hormonów w ludzkiej piersi. Opiera się na mikrostrukturach tkankowych wyizolowanych z chirurgicznych próbek tkanki piersi, które zachowują architekturę tkanki, interakcje międzykomórkowe i sygnalizację parakrynną.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Model ex vivo do badania działania hormonów w ludzkiej piersi
W tym artykule
Informacja o sprostowaniu
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Podsumowanie
Streszczenie
Badania nad działaniem hormonów w ludzkiej piersi zostały utrudnione przez brak odpowiednich systemów modelowych. W hodowli in vitro pierwotne komórki nabłonka sutka mają tendencję do utraty ekspresji receptorów hormonalnych. Szeroko stosowane linie komórkowe raka piersi z dodatnim receptorem hormonalnym mają ograniczone znaczenie w sytuacji in vivo. W tym miejscu opisujemy model ex vivo do badania działania hormonów w ludzkiej piersi. Świeże próbki tkanki piersi ludzkiej z materiału chirurgicznego, takiego jak mammoplastyka redukcyjna lub mammektomia, są trawione mechanicznie i enzymatycznie w celu uzyskania fragmentów tkanek zawierających przewody i zraziki oraz wiele typów komórek zrębu. Te mikrostruktury tkankowe utrzymywane w podłożu podstawowym bez czynników wzrostu zachowują swoje kontakty międzykomórkowe, architekturę tkanki i pozostają wrażliwe na hormony przez kilka dni. Są one łatwo przetwarzane w celu ekstrakcji RNA i białek, analizy histologicznej lub przechowywane w pożywce zamrażającej. Sortowanie komórek aktywowane fluorescencją (FACS) może być stosowane do wzbogacania określonych populacji komórek. Protokół ten zapewnia proste, standardowe podejście do badań translacyjnych z bardzo złożonymi, zróżnicowanymi próbkami ludzkimi.
Wprowadzenie
Informacje na temat krajobrazu mutacji w raku piersi rosną w szybkim tempie. Mniej uwagi poświęcono czynnikom ogólnoustrojowym, które wpływają na rozwój raka piersi. Narażenie na hormony rozrodcze ma duży wpływ na postęp choroby1-3. Jednak mechanizmy, za pomocą których hormony rozrodcze oddziałują na ludzką pierś, są słabo poznane. Prace z genetycznie zmodyfikowanymi modelami myszy ujawniły, że obejmują one wewnętrzną i parakrynną sygnalizację komórkową za pośrednictwem kilku efektorów4.
Ograniczona wiedza na temat działania hormonów w ludzkiej piersi jest w dużej mierze spowodowana brakiem odpowiednich modeli. Większo....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Uwagi ogólne: Zawczasu ustal protokół etyczny, przygotuj kwestionariusze dla pacjentów i dopilnuj szkolenia personelu klinicznego. Przed użyciem materiału z operacji mammoplastyki redukcyjnej należy uzyskać autoryzacje i uzyskać zgodę pacjenta. Tkanka może być zakaźna i należy się z nią odpowiednio obchodzić. Protokół ten został zatwierdzony przez komisję etyczną ISREC - Szwajcarskiego Instytutu Eksperymentalnych Badań nad Rakiem.
1. Odzyskiwanie, przetwarzanie i biobankowanie tkanek
Aby zapewnić optymalną jakość próbki do biobankowania, w szpitalu przeprowadza się szereg kroków przed transportem do laboratorium.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Aby zbadać rolę estrogenów i progesteronu oraz lepiej zrozumieć ich funkcje molekularne w ludzkiej piersi, pobieramy świeże próbki tkanki piersi od pacjentek poddawanych redukcyjnej mamoplastyce (Rysunek 1) po uzyskaniu ich świadomej zgody. Pozyskujemy również wywiad medyczny i reprodukcyjny pacjentek, a także próbkę krwi w celu oznaczenia poziomu progesteronu w surowicy w momencie operacji. Tkanka z redukcyjnych mamoplastyk jest dysocjowana mechanicznie i enzymatycznie. Powstałe mikrostruktury tkankowe .......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Opisana tutaj hodowla ex vivo zapewnia mikrostruktury tkanki piersi zawierające nienaruszone przewody i zraziki, wraz z innymi typami komórek normalnie występującymi w piersi ludzkiej kobiety. W przetwarzaniu ludzkiej tkanki piersi zwykle uzyskiwanej z mammoplastyki redukcyjnej, usuwania tkanki tłuszczowej, mechanicznego i enzymatycznego trawienia macierzy zrębu oraz lizy czerwonych krwinek wzbogaca się o fragmenty przewodów mlecznych i końcowe przewodowe jednostki zrazikowe. Delikatne trawienie enzymatyczne w o.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Autorzy dziękują M. Fiche ze Szpitala Uniwersyteckiego w Lozannie za dostarczenie zdjęcia z mammoplastyki, M. Wirth i A. Ayyanan ze Szwajcarskiego Instytutu Eksperymentalnych Badań nad Rakiem, Narodowego Centrum Kompetencji w Badaniach Onkologii Molekularnej, Szkoły Nauk Przyrodniczych, Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne za pomoc techniczną oraz R. Clarke'owi z Uniwersytetu w Manchesterze za krytyczne komentarze. Badania, które doprowadziły do uzyskania tych wyników, otrzymały wsparcie od SNF3100A0-112090, Oncosuisse 531817 oraz Wspólnego Przedsięwzięcia na rzecz Inicjatywy Leków Innowacyjnych w ramach umowy o udzielenie dotacji nr 115188, której środki pochodzą....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Wirówka mikrolitrowa | Heraeus Biofuge Fresco | 75005521 | |
| Wirówka 5810R | Eppendorf | 5810 000.327 | |
| Cryobox | Nalgene | 5100-0001 | |
| Zamrażarka z kontrolowaną szybkością EF600 Grant | Asymptote | EF600 | |
| Inkubator CO2 | Mieszalnik rolkowy Hera Cell Heraeus | 51022391 | |
| SRT9D | Sturt | SRT9D | |
| Medizintechnik | 81-0021-00 | ||
| Sitko do komórek | Falcon | 352340 | |
| Ostrze chirurgiczne Strile | Aesculap | BB536 | |
| Skalpel | Aesculap | BB084R | |
| Kleszcze | Aesculap | BD047R | |
| Nożyczki | Aesculap | BC374R | |
| Forma na bazie parafiny | SAKURA | 4166 | |
| Optymalna temperatura cięcia (OCT) Cryomatrix | Thermoscientific | 6769006 | |
| Penicylina/Streptomycyna | Life Technologies | 15070-063 | |
| Antybiotyk/Antybiotyk | Technologie życia | 15240-062 | |
| DMEM F/12 | Life Technologies | 11039-021 | Podgrzewanie (37 ° C) |
| Kolagenaza | Roche | 11 088 793 001 | Podgrzewana (37 ° C) |
| Technologie życia | w surowicy bydlęcej | 10270 | w surowicy płodów cielęcych |
| Sigma | R7757 | ||
| Dimetylosulfotlenek (DMSO) | Sigma | D2650 | |
| Trypsin-EDTA | Life Technologies | 15400-054 | |
| Agaroza | Invitrogen | 16500-500 | |
| Formaldehyd | Sigma | F1635 | |
| Paraformaldehyd | Roth | 335 | |
| Izopentan | Sigma | M32631 | |
| Etanol | Merck | 1009831000 | |
| Fiolki kriogeniczne (5,0 ml) | VWR, International | 479-0820 | |
| Naczynie hodowlane o bardzo niskim nasadce | Corning, NY 14831 | 3471 |
Bibliografia
- Beral, V. Breast cancer and hormone-replacement therapy in the Million Women Study. Lancet. 362 (9382), 419-427 (2003).
- MacMahon, B., et al. Age at first birth and breast cancer risk. Bull World Health Organ. 43 (2), 209-221 (1970).
- Pike, M. C., Krail....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
Sprostowanie
Formal Correction: Erratum: An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast
Posted by JoVE Editors on 2/01/2015. Citeable Link.
A correction was made to An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast. There was an error with the author, Marie Shamsheddin's, name. The author's name has been corrected to:
Marie Shamseddin
instead of:
Marie Shamsheddin
