Indukcja zapalenia jelit myszy przez adoptywny transfer efektorowych limfocytów T CD4 + CD45RB do myszy z niedoborem odporności

Erin C. Steinbach; Gregory R. Gipson; Shehzad Z. Sheikh

doi:10.3791/52533

Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Indukcja zapalenia jelit myszy przez adoptywny transfer efektorowych limfocytów T CD4 ⁺ CD45RB do myszy z niedoborem odporności

17K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/52533

⸱

21 kwietnia 2015

Erin C. Steinbach¹^,² , Gregory R. Gipson¹ , Shehzad Z. Sheikh¹^,³^,⁴

¹Center for Gastrointestinal Biology and Disease, University of North Carolina at Chapel Hill, ²Department of Microbiology and Immunology, University of North Carolina at Chapel Hill, ³Department of Genetics, University of North Carolina at Chapel Hill, ⁴Curriculum in Genetics and Molecular Biology, University of North Carolina at Chapel Hill

W tym artykule

Podsumowanie

Tutaj prezentujemy protokół indukowania zapalenia jelita grubego u myszy poprzez adoptywny transfer syngenicznych limfocytów T CD4⁺CD45RB do biorców z niedoborem limfocytów T i B. Cechy kliniczne i histopatologiczne naśladują choroby zapalne jelit u ludzi. Metoda ta pozwala na badanie inicjacji zapalenia jelita grubego i postępu choroby.

Streszczenie

Istnieje wiele różnych modeli zwierzęcych do badania patogenezy ludzkich chorób zapalnych jelit (IBD), z których każdy ma swoje zalety i wady. Opisujemy tutaj eksperymentalny model zapalenia jelita grubego, który jest inicjowany przez adoptywny transfer syngenicznych komórek T CD4 ⁺ CD45RB z syngeniczną śledzioną do myszy biorców z niedoborem limfocytów T i B. Populacja limfocytów T o^{wysokiej zawartości} CD4 ⁺ CD45RB, która w dużej mierze składa się z naiwnych komórek efektorowych, jest zdolna do wywoływania przewlekłego zapalenia jelit, bardzo przypominającego kluczowe aspekty ludzkiego IBD. Metodą tą można manipulować w celu zbadania aspektów początku i progresji choroby. Dodatkowo może być wykorzystany do badania funkcji wrodzonych, adaptacyjnych i regulacyjnych populacji komórek odpornościowych oraz roli ekspozycji środowiskowych, tj. mikrobioty, w zapaleniu jelit. W tym artykule ilustrujemy metodologię wywoływania zapalenia jelita grubego za pomocą protokołu krok po kroku. Obejmuje to demonstrację wideo kluczowych aspektów technicznych wymaganych do pomyślnego opracowania tego mysiego modelu eksperymentalnego zapalenia jelita grubego do celów badawczych.

Wprowadzenie

Choroby zapalne jelit (IBD) Choroba Leśniowskiego-Crohna i wrzodziejące zapalenie jelita grubego wynikają z nie do końca zdefiniowanej i złożonej interakcji między odpowiedziami immunologicznymi gospodarza, podatnością genetyczną, czynnikami środowiskowymi i zawartością światła jelitowego¹. Ostatnie badania asocjacyjne całego genomu donoszą o powiązaniach między genami regulatorowymi komórek odpornościowych a podatnością na IBD^2,3. W badaniach tych reprezentowane są zarówno wrodzone, jak i nabyte geny wewnętrzne komórek odpornościowych, co wskazuje na kluczową rolę tych populacji komórek w patogenezie IBD.

Obecnie istn....