Opisujemy proste podejście do diagnozowania cuchnącego oddechu u psów, jak również dietetyczne podejście do jego leczenia. Protokół ten może zostać rozszerzony na leczenie halitozy u ludzi w najbliższej przyszłości.
Artykuł metodologiczny
Opisujemy proste podejście do diagnozowania cuchnącego oddechu u psów, jak również dietetyczne podejście do jego leczenia. Protokół ten może zostać rozszerzony na leczenie halitozy u ludzi w najbliższej przyszłości.
Halitoza jest częstą dolegliwością związaną z problemami społecznymi i komunikacyjnymi u ludzi, a także wpływa na relację zwierzę-właściciel. W tej randomizowanej, kontrolowanej placebo ocenie klinicznej oceniliśmy skuteczność dedykowanego suplementu diety w łagodzeniu przewlekłego cuchnącego oddechu u 32 psów różnych ras i w różnym wieku. Protokół ten opisuje, w jaki sposób można ocenić obecność doustnych lotnych składników supurowych, np. merkaptanu metylu, siarkowodoru i siarczku dimetylu, za pomocą przenośnego urządzenia do chromatografu gazowego sprzężonego ze strzykawką, która służyła do pobierania wydychanego powietrza, oraz dedykowanego oprogramowania, które pozwala operatorowi monitorować stężenie każdego związku podczas każdego pomiaru, w stosunkowo krótkim czasie (8 min).
Znaczącą modyfikację parametrów halitozy zaobserwowano po 30 dniach od rozpoczęcia leczenia (p <0,05), podczas gdy długotrwały efekt obserwowano nawet 20 dni po zawieszeniu leczenia. Przenośny chromatograf gazowy, który jest również szeroko stosowany w praktyce klinicznej, może być zatem używany do potwierdzania i kontrolowania halitozy u ludzi i zwierząt. Mimo że gatunki ludzi i zwierząt wykazują pewne różnice, ta innowacyjna i alternatywna terapia w leczeniu cuchnącego oddechu może zostać rozszerzona na praktykę kliniczną u ludzi jako uzupełniające podejście dietetyczne.
Nieprzyjemny zapach z ust, znany również pod terminem cuchnący oddech, jest częstą dolegliwością, która powoduje zakłopotanie w interpersonalnych relacjach społecznych1 tak samo jak nieprzyjemny zapach ciała2. Chociaż większość danych epidemiologicznych dotyczących nieprzyjemnego zapachu w jamie ustnej jest ograniczona pod względem dokładności i wrażliwości ze względu na subiektywną samoocenę, badania donoszą, że 30-50% populacji jest dotknięta tą patologią3-6. Niektóre badania dowiodły również, że występuje częściej u mężczyzn niż u kobiet, niezależnie od wieku, w stosunku 3:1, a stosunek ten jest nieco wyższy u osób powyżej 20 roku życia7.
Halitoza może być etapowana w zależności od jej etiologii: typ 1 (oralny), typ 2 (drogi oddechowe), typ 3 (żołądkowo-przełykowy), typ 4 (przenoszony przez krew) i typ 5 (subiektywny); jednak postawiono hipotezę, że cuchnący oddech może być potencjalnie uważany za sumę tych typów w dowolnej kombinacji, nałożoną na fizjologiczny zapach obecny w zdrowiu (Typ 0)8,9. Scully i wsp., którzy szeroko opisali i scharakteryzowali etiopatogenezę i leczenie halitozy, stwierdzili, że u niektórych pacjentów ma ona etiologię pozaustną, a u kilku z nich w grę wchodzą anomalie metaboliczne10. Autorzy zwrócili uwagę, że za nieprzyjemny zapach odpowiedzialne są głównie lotne związki siarki (VSC) oraz niektóre czynniki predysponujące, np. zła higiena jamy ustnej, hipoślinotok, aparaty stomatologiczne, choroby dziąseł i przyzębia oraz choroby błon śluzowych. Ponadto zaproponowali poprawę zdrowia jamy ustnej, terapie przeciw nieprzyjemnym zapachom i środki przeciwdziałające nieprzyjemnemu zapachowi jako podstawowe konwencjonalne podejście. Co więcej, zaproponowali również stosowanie probiotyków i szczepionek przeciwko bakteriom wywołującym nieprzyjemny zapach.
Ludzcy i zwierzętnicy, tj. koty i psy, mogą być dotknięci niepożądanymi reakcjami związanymi z żywnością, które mogą obejmować kilka układów, takich jak układ pokarmowy, skórny, otologiczny, oczny, moczowy i oddechowy11-13. Jednak kilka badań na zwierzętach wykazało, że komora nosowa jest jednym z najbardziej zaangażowanych układów, w których dość często występuje kamień nazębny14, zapalenie jamy ustnej15 i cuchnący oddech16. Ponadto bakterie wywołujące halitozę mogą być przenoszone ze zwierząt towarzyszących na ludzi17. Iwanicka-Grzegorek określiła ilościowo zawartość związków siarki i amin o niskiej masie cząsteczkowej w ślinie 84 pacjentów cierpiących na cuchnący oddech i 40 zdrowych osób z grupy kontrolnej. Ponad 80% pacjentów należących do grupy cuchnącego oddechu zgłosiło, że miało zwierzęta domowe w dzieciństwie (P <0,001), a ponad 70% nadal posiadało zwierzę domowe (P <0,001).
Dlatego odżywianie może być stosowane do kontrolowania halitozy. Co więcej, odżywianie odgrywa kluczową rolę w rozwoju zębów, integralności tkanek jamy ustnej i dziąseł, odporności kości, a nawet w leczeniu chorób zębów i jamy ustnej18. Opierając się na tych rozważaniach, w Centrum Włoskiego Stowarzyszenia Badań Onkologicznych nad Chorobami (AIRMO) przeprowadzamy randomizowaną, kontrolowaną placebo krzyżową ocenę kliniczną z udziałem 32 psów cierpiących na cuchnący oddech w celu zbadania skuteczności suplementu diety w porównaniu z dostępną na rynku karmą dla zwierząt domowych.
Ta ocena kliniczna została zaplanowana zgodnie z prawodawstwem europejskim (86/609/EU), a protokół eksperymentalny został zatwierdzony przez Komitet ds. Etyki i Dobrostanu Zwierząt Centrum Badawczego AIRMO (Mediolan, Włochy).
1. Psy i wybór karmy
2. Chromatograf gazowy
Uwaga: Chromatograf gazowy to przenośne urządzenie, które mierzy lotne związki siarki (VSC), siarkowodór, merkaptan metylu i siarczek dimetylu, które są głównymi czynnikami wywołującymi halitozę, dostarczając informacji o stężeniu każdego mierzonego gazu. Pomiar każdego VSC pomaga zidentyfikować przyczynę halitozy i ocenić skuteczność leczenia.
3. Ustawienie chromatografu gazowego
4. Pobieranie próbek i analiza oddechu psów
Zarówno placebo, jak i suplement diety zostały dostosowane w celu zapewnienia podobnej podaży składników odżywczych i kalorii oraz zaspokojenia zapotrzebowania żywieniowego w szczególności dorosłych psów. Ich skład analityczny wynosił: białko surowe 26%, oleje i tłuszcze surowe 13%, włókno surowe 2.5%, popiół surowy 8% oraz energia metabolizowalna (EM) 3464 kcal/kg. Energię metabolizowalną obliczono zgodnie z wytycznymi żywieniowymi dotyczącymi pełnych i dopełniających karm dla kotów i psów opracowanymi przez Europejską Federację Przemysłu Karm dla Zwierząt Domowych. Placebo składało się z dehydratyzowanego mięsa z kurczaka, ryżu, tłuszczu zwierzęcego, dehydratyzowanych jaj, owsa, suszonego pulpy buraczanej, nasion lnu, hydrolizowanych białek zwierzęcych, oleju rybnego, oleju roślinnego, węglanu wapnia, suszonego ekstraktu drożdżowego, fosforanu jednowapniowego oraz chlorku sodu. Suplement diety różnił się od placebo obecnością substancji aktywnych zawartych w specjalnych tabletkach w kształcie serca tłoczonych na zimno (patent europejski nr EP 2526781), które stanowiły 6-7% pełnej karmy, a także źródłem białka – mączką rybną zamiast mączki z kurczaka. Tabletki zawierały propolis (0.0161%), Salvia officinalis (0.0087%), białko jaja kurzego (lizozym 0.0078%), dehydratyzowany ekstrakt z pomarańczy (bioflawonoidy 0.0077%), Thymus vulgaris (0.0127%) oraz Ribes nigrum (0.0040%).
Dane zostały przeanalizowane, przedstawione jako średnie ± błąd standardowy średniej i sprawdzone pod kątem rozkładu normalnego za pomocą testu normalności D’Agostino-Pearsona. Do porównania zmian w wyniku VSCs w wizycie kontrolnej w stosunku do wartości wyjściowej dla każdej metody leczenia zastosowano wielokrotny test t.
Rycina 1A przedstawia istotny spadek stężenia siarkowodoru u zwierząt leczonych, z wartości wyjściowej 0,43 ng/ml do 0,06 ng/ml po 30 dniach leczenia. Rycina 1B przedstawia istotny spadek stężenia metylomerkaptanu u zwierząt leczonych, z wartości wyjściowej 0,30 ng/ml do 0,06 ng/ml po 30 dniach leczenia. Rycina 1C przedstawia istotny spadek stężenia siarczku dimetylu u zwierząt leczonych, z wartości wyjściowej 0,28 ng/ml do 0,13 ng/ml po 30 dniach leczenia.
Rysunek 2A przedstawia istotny spadek stężenia siarkowodoru, z wartości bazowej 0,37 ng/ml do 0,10 ng/ml, po 20 dniach leczenia. Na Rysunku 2B podobny trend zaobserwowano również w przypadku metylomerkaptanu, który wykazuje istotny spadek stężenia związku, z wartości bazowej 0,24 ng/ml do 0,05 ng/ml, po 30 dniach leczenia. W odniesieniu do siarczku dimetylu, Rysunek 2C, po 30 dniach leczenia zaobserwowano istotny spadek stężenia związku, z wartości bazowej 0,32 ng/ml do 0,11 ng/ml.
| MASA CIAŁA (Kg) | DZIENNA DAWKA SUPLEMENTU DIETETYCZNEGO (g) |
| 1 - 10 | 30 - 180 |
| 11 - 20 | 190 - 300 |
| 21 - 35 | 310 - 455 |
| 36 - 50 | 465 - 595 |
Tabela 1: Dzienna ilość pokarmu podawanego psom.

Rysunek 1: (A) Graficzna reprezentacja trendu stężenia siarkowodoru w grupie badanej (n = 16) vs grupie kontrolnej (n = 16) podczas 30-dniowego okresu leczenia; *p <0.05; (B) Graficzna reprezentacja trendu stężenia metanotiolu w grupie badanej (n = 16) vs grupie kontrolnej (n = 16) podczas 30-dniowego okresu leczenia; *p <0.05; (C) Graficzna reprezentacja trendu stężenia siarczku dimetylu w grupie badanej (n = 16) vs grupie kontrolnej (n = 16) podczas 30-dniowego okresu leczenia; *p <0.05.

Rycina 2: (A) Przedstawienie graficzne trendów stężenia siarkowodoru w grupie traktowanej (n = 16) vs kontrolnej (n = 16) po 10-dniowym okresie wypłukiwania; *p <0.05; (B) Przedstawienie graficzne trendu stężenia metylomerkaptanu w grupie traktowanej (n = 16) v.s. kontrolnej (n = 16) po 10-dniowym okresie wypłukiwania; *p <0.05; (C) Przedstawienie graficzne trendów stężenia siarczku dimetylu w grupie traktowanej (n = 16) v.s. kontrolnej (n = 16) po 10-dniowym okresie wypłukiwania; *p <0.05.
Halitoza jest częstym problemem u psów, stanowiącym problem psychospołeczny znacząco wpływający na relację zwierzę-właściciel19. Nieświeży oddech wynika z mikrobiologicznego metabolizmu zarówno egzogennych, jak i endogennych substratów białkowych w jamie ustnej20 , co powoduje produkcję lotnych związków siarki i jest pogarszane przez inne czynniki, w tym ostre martwicze wrzodziejące zapalenie dziąseł, zakażone miejsce ekstrakcji, zanieczyszczenia pod aparatami dentystycznymi, owrzodzenia, migdałki i niską higienę21-23. Głównymi czynnikami odpowiedzialnymi za produkcję nieświeżego oddechu są bakterie Gram-ujemne24 , a ich wzrost związany jest z pogrubieniem płytki nazębnej25. Właściwa higiena jamy ustnej wraz ze specjalną dietą może zmniejszyć obciążenie mikrobiologiczne do poziomu fizjologicznego, zmniejszając halitozę i unikając zapalenia narządów płciowych i chorób przyzębia, które mają nieprzyjemny wpływ na oddech26.
Pogląd ten potwierdza nasze badanie, z którego wynika, że po 10 dniach przyjmowania suplementu diety ogólną poprawę zaobserwowano u 29 z 32 psów (90%) wykazujących umiarkowany lub ciężki nieprzyjemny zapach, a pod koniec oceny 19 z 29 psów (65%), które osiągnęły poprawę, uzyskało stabilny stan fizjologiczny dotyczący stężenia VSC.
Nasze dochodzenie porusza bardzo intrygującą kwestię możliwego podawania suplementu diety psom z nieprzyjemnym zapachem oddechu poprzez wprowadzenie hydrolizowanych białek rybnych, szałwii, Ribes nigrum L., tymianku, lizozymu, propolisu, bioflawonoidów i witaminy C do codziennego harmonogramu żywienia. Związki te, szeroko stosowane w medycynie tradycyjnej, okazały się już skuteczne zarówno in vitro , jak i in vivo.
W szczególności białka ryb zostały wybrane na podstawie wcześniejszych badań chromatograficznych, które wykazały obecność dużych ilości siarkowodoru, metanotiolu, etanotiolu, siarczku dimetylu i siarczku etylenu w białkach wołowych27. Badania literaturowe wykazały również aktywność przeciwdrobnoustrojową szałwii i Ribes nigrum L. przeciwko Streptoccocus mutans , o którym wiadomo, że jest jednym z patogenów jamy ustnej (wraz z Porphyromonas gingivalis i Candida albicans) odpowiedzialnymi za nieprzyjemny zapach jamy ustnej i powstawanie próchnicy28-30. Bioflawonoidy i witamina C zostały uznane zarówno za środki przeciwzapalne, jak i bakteriostatyczne ograniczające wzrost niektórych bakterii związanych z chorobami przyzębia31.
Jeśli chodzi o propolis i tymianek, zmniejszenie produkcji nieprzyjemnego zapachu z inkubowanej całej śliny wykazano Sterer i wsp. 32 Aktywność bakteriostatyczna propolisu została szeroko wykazana w literaturze, począwszy od ograniczenia ilości płytki bakteryjnej33-37 do zmniejszenia tolerancji mikroorganizmów na kwaśne pH38, wykazując większą skuteczność niż roztwory glukonianu chlorheksydyny39. Ponadto udowodniono, że propolis jest skuteczny w zmniejszaniu próchnicy zębów u szczurów, ograniczając liczbę mikroorganizmów, spowalniając syntezę nierozpuszczalnych glukanów i aktywność glukozylotransferazy40.
Nasze badanie przedstawia pewne ograniczenia, takie jak czułość instrumentu w porównaniu z innymi dostępnymi technikami (np. wyboista nanostruktura hemitubowa WO3 wspomagana modyfikacją powierzchni plazmy O2 z funkcjonalizacją materiału na bazie grafenu41, elektroprzędzone nanowłókna SnO2 uczulone zredukowanymi nanoarkuszami tlenku grafenu42, test benzoilo-DL-arginino-naftyloamidu (BANA)43, wysokosprawna chromatografia cieczowa (HPLC)44 oraz chromatografia gazowa z mikroekstrakcją w fazie stałej/spektrometria mas (SPME-GC/MS45). Z drugiej strony, urządzenie zastosowane w tym badaniu może pozwolić na przykład na szybkie zebranie danych w celu szybkiego uzyskania wczesnej diagnozy wirusowego zapalenia wątroby typu B, które charakteryzuje się również podwyższonym poziomem siarczku dimetylu46 lub ustalenia stanu choroby układowej i/lub układu oddechowego (takiej jak zapalenie płuc, rozedma płuc i zapalenie oskrzeli), które charakteryzują się podwyższonym poziomem siarkowodoru. merkaptan metylu i siarczek dimetylu47.
Podczas zabiegu zdaliśmy sobie sprawę, że czas dostępny na zebranie oddechu z pyska psa był nieco krótszy niż wymagany (kilka sekund wobec 30 sekund sugerowanych przez producenta). Problem ten udało się przezwyciężyć poprzez trzykrotne powtórzenie każdego pomiaru. Kluczowym krokiem podczas eksperymentu było zbieranie oddechu. Aby nie zostawiać psa z otwartym pyskiem zbyt długo bez uszkodzenia strzykawki, umieściliśmy strzykawkę w spoidle wargowym psa w celu bezpiecznego zbierania oddechu.
Jak zaobserwowano u ludzi, dalszymi zastosowaniami tej techniki będzie profilaktyka chorób związanych z oddechem, tj. ogólnoustrojowych i oddechowych, u psów i ogólniej u zwierząt domowych. Podsumowując, nasze badanie wykazało, że suplement diety był skuteczny w zmniejszaniu przewlekłego cuchnącego oddechu u psów. Nasze wyniki mogą być również zgodne z tym, co proponują Porter i wsp., którzy wysunęli hipotezę o możliwej interakcji między cuchnącym oddechem a przewodem pokarmowym, sugerując, że terapia cuchnącego oddechu pochodzenia doustnego może również mieć pewien wpływ na skład bakterii jelitowych, o których wiadomo, że są odpowiedzialne, w niektórych przypadkach, za produkcję lotnych związków siarki48. Niemniej jednak, Dysbioza może również wystąpić po masowym stosowaniu antybiotyków49 lub mięsa pochodzącego z intensywnych hodowli zwierząt i powszechnie stosowanego w większości żywności dla zwierząt i ludzi50,51.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Ta recenzja nie była wspierana przez granty. Dziękujemy firmie Sanypet S.p.a. (Padwa, Włochy) za uprzejme udostępnienie suplementu diety i placebo zastosowanych w tym badaniu. Dziękujemy również społeczności San Patrignano, która uprzejmie wzięła udział w badaniu, dostarczając wszystkie psy.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| OralChroma CHM-1 | FIS Inc. | 10061285 | przenośny kromatograf gazowy |
| FORZA10 Oral Active | SANYpet . Spółka z ograniczoną odpowiedzialnością | suplement diety | |
| InJ/Light-100 PCS | Rays S.p.a. | INJ5171112 | strzykawki jednorazowe |