Tutaj opisujemy szczegółową procedurę niedokrwienia jelit u myszy, która prowadzi do powtarzalnego uszkodzenia bez śmiertelności, aby zachęcić do standaryzacji tej techniki w całej dziedzinie. Ten model uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego jelit może być wykorzystany do badania komórkowych i molekularnych mechanizmów uszkodzenia i regeneracji.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Mysi model uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego jelit
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Niedokrwienie jelit to stan zagrażający życiu, związany z szerokim zakresem stanów klinicznych, w tym miażdżycą, zakrzepicą, niedociśnieniem, martwiczym zapaleniem jelit, przeszczepem jelit, urazami i przewlekłymi stanami zapalnymi. Uszkodzenie jelit spowodowane niedokrwieniem i reperfuzją (IR) jest konsekwencją ostrego niedokrwienia krezki, spowodowanego niewystarczającym przepływem krwi przez naczynia krezkowe, co prowadzi do uszkodzenia jelit. Reperfuzja po niedokrwieniu może jeszcze bardziej nasilić uszkodzenie jelita. Mechanizmy powstawania uszkodzeń spowodowanych podczerwienią są złożone i słabo poznane. W związku z tym eksperymentalne modele małych zwierząt mają kluczowe znaczenie dla zrozumienia patofizjologii uszkodzeń spowodowanych podczerwienią i opracowania nowych terapii.
Tutaj opisujemy mysi model ostrego uszkodzenia jelit IR, który zapewnia powtarzalne uszkodzenie jelita cienkiego bez śmiertelności. Osiąga się to poprzez wywołanie niedokrwienia w okolicy dystalnego odcinka jelita krętego poprzez czasowe zamknięcie obwodowych i końcowych gałęzi pobocznych tętnicy krezkowej górnej przez 60 minut za pomocą klipsów mikronaczyniowych. Reperfuzja przez 1 godzinę lub 2 godziny po urazie powoduje powtarzalne uszkodzenie jelita badane za pomocą analizy histologicznej. Prawidłowe ułożenie klipsów mikronaczyniowych ma kluczowe znaczenie dla zabiegu. Dlatego klip wideo zawiera szczegółowy wizualny opis tej techniki krok po kroku. Ten model uszkodzenia jelit w podczerwieni może być wykorzystany do badania komórkowych i molekularnych mechanizmów urazu i regeneracji.
Wprowadzenie
Jelito jest bardzo wrażliwe na zakłócenia przepływu krwi, co powoduje niedokrwienie i uszkodzenie nabłonka. Reperfuzja po niedokrwieniu zapewnia ponowne dotlenienie tkanki i może dodatkowo sprzyjać patologii. Dlatego niedokrwienie jelit i uszkodzenie reperfuzyjne wiąże się z szerokim zakresem patologii, w tym martwiczym zapaleniem jelit, odrzuceniem przeszczepu allogenicznego po przeszczepie jelita cienkiego, powikłaniami operacji tętniaka aorty brzusznej, pomostowaniem krążeniowo-oddechowym i nieswoistymi zapaleniami jelit 1,2. Uszkodzenie jelit w podczerwieni, zwłaszcza ostre niedokrwienie krezki, jest stanem zagrażającym życiu, powodującym zachorowalność....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Badania na zwierzętach zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi Narodowego Instytutu Zdrowia i zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania Instytutu Trudeau. Do badania użyto 8-12 tygodniowych myszy C57BL/6.
1. Przygotowanie do operacji
- Przygotuj i wysterylizuj narzędzia chirurgiczne.
- Przygotuj system znieczulenia na bazie izofluranu ze stożkiem na nos i podgrzewaną podkładką. Upewnij się, że podgrzewana podkładka nie jest przegrzana (<39 ºC).
- Upewnij się, że kanister z izofluranem jest prawidłowo ustawiony, aby otwory wylotowe na dnie kanistra nie były w żad....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Zoptymalizowaliśmy protokół eksperymentalny operacji IR, aby uzyskać powtarzalne uszkodzenia jelita krętego indukowane niedokrwieniem i reperfuzją u myszy. Reprezentatywne wyniki przedstawiono w tej sekcji.
Rycina 1 przedstawia przykłady rozmieszczenia klipsów naczyniowych w celu wywołania niedokrwienia jelita cienkiego. Czarne strzałki wskazują położenie głównych klipsów zamykających gałęzie pierwszego rzędu tę.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Opracowanie mysich modeli uszkodzenia jelit w podczerwieni znacznie poprawiło zrozumienie mechanizmów uszkodzenia tkanek i pomogło w opracowaniu potencjalnych strategii terapeutycznych w celu zminimalizowania uszkodzeń tkanek 7,9,11,34. Krytycznymi etapami tego protokołu są prawidłowe ustawienie klipsów mikronaczyniowych, prawidłowy czas niedokrwienia i właściwa ocena histologiczna uszkodzenia IR.
Czas trwania niedokrwienia ma kluczowe znaczenie dla późniejszego uszkodzenia nabłonka.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy deklarują brak konfliktu interesów
Podziękowania
Ta praca była wspierana przez Rosyjską Fundację Naukową, grant nr 14-50-00060 i LLC RUSCHEMBIO. Praca ta była również wspierana przez grant 294083 Fundacji Leśniowskiego-Crohna i Zapalenia Jelita Grubego w Ameryce (dla AVT) oraz przez grant NIH RO1 DK47700 (dla C.J.).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Podgrzewana podkładka | Sunbeam | E12107-819 | Alternatywa: Podgrzewana podkładka Braintree Scientific |
| Stołowa maszyna do znieczulenia badawczego | Vasco | UCAP 0001-0000171 | Alternatywa: Parkland Scientific, |
| stożek V3000PS nosa | Parkland Scientific | ARES500 | |
| Kanister i wymienny wkład | Parkland Scientific | 80000, 80120 | |
| Komora indukcyjna | Surgivet | V711802 | |
| Isoflurane | Piramal Healthcare | NDC 66794-013-10 | Substancja kontrolowana, skontaktuj się z IACUC |
| Maszynka do strzyżenia zwierząt | Oster | Oster Golden A5 078005-050-003 | |
| Maść oftalmiczna | Webster | 8804604 | |
| Buprenorphine | McKesson | 562766 | Substancja kontrolowana, skontaktuj się z IACUC |
| Ketaset (Ketamina HCl) | Pfizer | NADA 45-290 | Substancja kontrolowana, skontaktuj się z IACUC |
| Bawełniane końcówki | Puritan produkty medyczne | 806-WC | Autoklaw przed użyciem |
| Betadine | Purdue Products | 67618-150-17 | 10% Powidon-Jod |
| Sterylny roztwór soli | Aspen | 46066-807-60 | Przed użyciem dostosuj temperaturę pokojową |
| Termometr na podczerwień dla gryzoni | BIOSEB | BIO-IRB153 | |
| Klipsy mikronaczyniowe, 70 g | Roboz Surgical | RS5424, RS5435 | Alternatywa: WPI 14121, do okluzji SMA |
| Klipsy mikronaczyniowe, 40 g | Roboz Surgical | RS6472 | Alternatywa:WPI 14120, do okluzji naczyń bocznych |
| Klips do nakładania kleszczyków | World Precision Instruments | 14189 | Alternatywa: Roboz #RS-5410 lub #RS-5440 |
| Gill's 3 hematoksylina | Thermo Scientific | 14-390-17 | |
| Zszywki chirurgiczne, Reflex 9 mm | Cell Point Scientific | 201-1000 | |
| Aplikator Autoclip | Beckton Dickinson | 427630 | |
| Podkładka piankowa Byopsy | Simport | M476-1 | |
| Kaseta na chusteczki | Fisher Healthcare | 15182701A | Histosette II kombinowana pokrywka i podstawa |
| 10% buforowana formalina | Fisher Scientific | 245-684 | |
| Chirurgiczne nożyczki do tęczówki | World Precision Instruments | 501263-G SC | Alternatywa: Roboz RS6816 |
| Nożyczki operacyjne | World Precision Instruments | 501219-G | Alternatywa: Roboz RS6814 |
| Kleszcze opatrunkowe | Roboz Surgical | RS-5228, RS-8122 | Alternatywa: World Precision Instruments 1519-G |
| Heparyna, bez endotoksyn, 300 jednostek USP/fiolkę, 50 mg | Sigma | 2106 | |
| Odruchowe szczypce do usuwania ran | Roboz Surgical | RS-9263 | Alternatywa: World Precision Instruments: |
| 500347 Myszy C57BL/6J | Jackson Laboratory | Nr magazynowy 0664 | |
| Nieprzylegające opatrunki Telfa, 3 x 4, sterylne | Pipety transferowe Coviden | 1050 | |
| Fisherbrand | Fischer Scientific | 13-711-5AM | Użyj pipet, aby kroplami dodać sól fizjologiczną |
Bibliografia
- Eltzschig, H. K., Eckle, T. Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation. Nat Med. 17, 1391-1401 (2011).
- Lenaerts, K., et al. New insights in intestinal ischemia-reperfusion injury: implications for intestinal transplantation. <....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
