Przedstawiono metodę przygotowania katalitycznie aktywnych koloidów Janusa, które mogą "pływać" w płynach i określać ich trajektorie 3D.
Artykuł metodologiczny
Przedstawiono metodę przygotowania katalitycznie aktywnych koloidów Janusa, które mogą "pływać" w płynach i określać ich trajektorie 3D.
Opisujemy metodę przygotowania katalitycznie aktywnych koloidów Janusa, które "pływają" w płynach i opisujemy, jak określić ich ruch 3D za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej. Jedną z powszechnie stosowanych metod wytwarzania katalitycznie aktywnych koloidów w celu wytworzenia zwiększonego ruchu jest asymetryczny rozkład katalizatora. W tym przypadku osiąga się to poprzez powlekanie przędzą rozproszonej warstwy fluorescencyjnych koloidów polimerowych na płaskim płaskim podłożu, a następnie użycie kierunkowego osadzania z pary platyny w celu połowego pokrycia odsłoniętej powierzchni koloidu, tworząc dwustronną strukturę "Janusową". Koloidy Janusa są następnie ponownie zawieszane z płaskiego podłoża do roztworu wodnego zawierającego nadtlenek wodoru. Nadtlenek wodoru służy jako paliwo dla katalizatora platynowego, który rozkłada się na wodę i tlen, ale tylko po jednej stronie koloidu. Asymetria powoduje gradienty, które powodują zwiększony ruch lub "pływanie". Mikroskop fluorescencyjny wraz z kamerą wideo służy do rejestrowania ruchu poszczególnych koloidów. Środek emisji fluorescencyjnej jest znajdowany za pomocą analizy obrazu, aby zapewnić współrzędne x i y dla każdej klatki wideo. Utrzymując stałą pozycję ogniskowej mikroskopu, emisja fluorescencji z koloidu wytwarza charakterystyczny koncentryczny wzór pierścienia, który jest poddawany analizie obrazu w celu określenia położenia cząstek względem z. W ten sposób uzyskuje się trajektorie 3D dla pływającego koloidu, co pozwala na dokładny pomiar prędkości pływania i wykrycie zjawisk fizycznych, takich jak grawitaksja, które mogą wpływać na ruch koloidów.
Urządzenia do pływania katalitycznego to małe, nieskrępowane koloidy, zdolne do autonomicznego generowania ruchu w środowisku fluidycznym. 1,2 Urządzenia te cieszą się dużym zainteresowaniem badawczym, ponieważ mogą potencjalnie umożliwić tworzenie nowych, ekscytujących funkcji, takich jak dostarczanie leków,3 transport chipów w laboratorium4 oraz remediacja środowiska. 5 Jednym z szeroko badanych przykładów są katalityczni pływacy "Janus". 6 Cząstki te zawdzięczają swoją nazwę temu, że mają dwie odrębne strony lub twarze (Janus to rzymski bóg o dwóch twarzach). Jedna strona jest katalitycznie aktywna i zdolna do przeprowadzenia reakcji rozkładu, podczas gdy druga jest obojętna. W obecności odpowiednich rozpuszczonych cząsteczek paliwa, wynikowa asymetryczna reakcja chemiczna tworzy gradienty wokół koloidów, które mogą wytwarzać ruch poprzez samodyfuzję/elektroforezę. 7
Scharakteryzowanie ruchu tych szybko poruszających się obiektów jest wyzwaniem, a wiele dotychczasowych obserwacji eksperymentalnych ograniczało się do 2D. Jednak ewentualne zastosowania prawdopodobnie wykorzystają zdolność urządzeń do pływania katalitycznego do poruszania się w masowych rozwiązaniach w 3D.8 Aby rozwiązać ten problem, poniżej opisujemy protokół, który umożliwia określenie dokładnych trajektorii 3D dla urządzeń pływających. Metoda ta opiera się na interpretacji struktur pierścieniowych wytwarzanych przez nieostre koloidy fluorescencyjne obserwowane przy stałym obiektywie ogniskowym9 i jest łatwa do zastosowania przy użyciu konwencjonalnych mikroskopów niemodyfikowanych. Dzięki jasnemu opisowi tej metody w tym miejscu, inni badacze w tej dziedzinie skorzystają na możliwości uzyskania dostępu do takich informacji 3D. Pomoże to w przyszłości uzyskać wgląd w charakterystykę ruchu urządzeń pływackich. Dowodem na ten potencjał jest niedawny raport o urządzeniach pływających kierowanych przez grawitację,10,11 zachowanie, które najłatwiej można zobrazować poprzez zastosowanie śledzenia 3D. 11
Ten artykuł również wyraźnie opisuje metodę produkcji katalitycznych urządzeń do pływania z cząstkami Janusa, co będzie dodatkowym korzystne dla standaryzacji metod w istniejących grupach badawczych badających te urządzenia, a także dodatkowo poprowadzi nowych badaczy zainteresowanych tworzeniem i badaniem urządzeń do pływania.
UWAGA: Przed użyciem proszę zapoznać się ze wszystkimi odpowiednimi kartami charakterystyki. Nadtlenek wodoru stosowany w tym protokole jest szkodliwy, a wydzielanie się tlenu gazowego pod wpływem platyny stwarza ryzyko wybuchu. Podczas tego protokołu należy stosować wszystkie odpowiednie środki bezpieczeństwa, w tym kontrole inżynieryjne podczas obchodzenia się z roztworami nadtlenku (dygestoria) i środkami ochrony osobistej (okulary ochronne, rękawice i fartuch laboratoryjny).
1. Wytwarzanie katalitycznych cząstek Janusa
2. "Pływające" cząstki janusa
3. Obserwacja mikroskopowa
Rysunek 1 przedstawia typową dyspersję koloidów na czystym szkiełku przedmiotowym przed osadzaniem platyny. Rysunek 2 pokazuje typowy obraz SEM z elektronów wstecznie rozproszonych dla Janus-pływaka pokrytego platyną w połowie; w tym trybie obrazowania obszar pokryty platyną generuje jasny kontrast. Widoczna jest pożądana półkulista warstwa platyny. Rysunek 3 prezentuje wygląd typowego fluorescencyjnego Janus-pływaka w optymalnych warunkach oświetlenia, unieruchomionego w gumie gellan. Pływak ma postać symetrycznego pierścienia, a promień tego pierścienia może być wykorzystany do określenia pozycji z koloidu względem płaszczyzny ostrości. Rysunek 4 pokazuje reprezentatywne przekroje radialnego rozkładu natężenia jasności, który jest wykorzystywany w połączeniu z algorytmami analizy obrazu do precyzyjnego lokalizowania centrum i pozornego promienia koloidu. Rysunek 5 zawiera krzywą kalibracyjną uzyskaną przy użyciu stałej próbki koloidalnej i skalibrowanego stolika mikroskopu z przesuwem w osi z, w celu powiązania pozornego rozmiaru koloidu z odległością od płaszczyzny ostrości. Krzywa ta jest dopasowana do funkcji sześciennej, która służy do przeliczania pozornego promienia na współrzędną z. Na koniec, Rysunek 6 przedstawia typową trajektorię x,y,z dla fluorescencyjnego Janus-pływaka.

Rysunek 1. Obraz optyczny mikrośfer polistyrenowych o średnicy 1.9 µm. Mikrośfery są rozproszone na oczyszczonym szkiełku przedmiotowym przed osadzaniem platyny. Pasek skali reprezentuje 40 µm. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

Rysunek 2. Obraz SEM w trybie elektronów wstecznie rozproszonych dla mikrosfer polistyrenowych o średnicy 1,9 µm. Mikrosfery przedstawiono po napyleniu platyny. Pasek skali odpowiada 2 µm. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

Rycina 3. Obrazy kalibracyjne fluorescencyjnej sfery polistyrenowej o średnicy 4.8 µm unieruchomionej w żelu gellanowym, zarejestrowane przy użyciu obiektywu 20X (0.4 N.A.). Odległości pod każdym obrazem wskazują dystans płaszczyzny ogniskowej obiektywu nad sferą. W miarę odogniskowania obrazu od 0 µm do 200 µm, ostry obraz jasnego dysku zmienia się w jasny pierścień, którego promień zależy od powiększenia, rozmiaru sfery oraz jej odległości od płaszczyzny ogniskowej. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

Rycina 4. Procedura śledzenia cząsteczki w osiach X, y, z. Zestaw autorskich algorytmów jest wykorzystywany do wstępnej lokalizacji środka (x, y) jasnego pierścienia poprzez wyodrębnienie serii linii pionowych i poziomych oraz wyznaczenie średniego punktu środkowego między jasnymi pikami (a). Następnie promień pierścienia jest obliczany na podstawie maksymalnego natężenia splajnu dopasowanego do średnich szarych wartości pikseli promieniujących od środka pierścienia (b). Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tej ryciny.

Rysunek 5. Wykres kalibracyjny współrzędnej Z dla sfer Janus otrzymany poprzez pomiar promienia jasnego pierścienia sfer unieruchomionych w gumie gellan (patrz Rysunki 3 i 4). Wykres kalibracyjny jest wykorzystywany przez nasze algorytmy do przeliczania zmierzonego promienia pierścienia na współrzędną z. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

Rysunek 6. Trajektoria typowego fluorescencyjnego urządzenia pływającego w formie sfery Janus. Sekwencja obrazów poruszającego się urządzenia pływającego była rejestrowana przez okres 30 s przy częstotliwości klatek 33 Hz. Współrzędne (x, y, z) trajektorii uzyskano poprzez lokalizację centrum jasnego pierścienia (Rysunek 4 (a)) i porównanie zmierzonego promienia pierścienia z wykresem kalibracyjnym dla każdego obrazu w sekwencji (Rysunki 4 (b) i 5). Aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku, kliknij tutaj.
Wiele zmiennych w protokole przygotowania cząstek janusa platyny będzie miało wpływ na obserwowane trajektorie. Parametry opisane przy użyciu cząstek o średnicy 2 μm dadzą prędkości napędu rzędu 10 μm na sekundę. Jeśli użyjesz mniejszych cząstek, prędkości wzrosną, podczas gdy wzrost rozmiaru cząstek zmniejszy prędkość napędu. 12 Szczegóły protokołu parowania również zmienią obserwowane trajektorie. W tym obecnym protokole zalecany jest rzadki rozkład koloidów wraz z parowaniem metalu normalnym do orientacji szkiełka. Warunki te skutkują symetrycznymi strukturami Janusa, jak pokazano na rysunku 2, które prowadzą do trajektorii liniowych w granicach dyfuzji rotacyjnej Browna. 13 I odwrotnie, jeśli ciasno upakowane koloidy podlegają osadzaniu się pod kątem spojrzenia, symetria czapeczki Janusa może zostać złamana, aby wywołać zachowanie wirowania. 14 Wytwarzane tu cząstki wykazują względnie izotropowy ruch we wszystkich trzech wymiarach; Jeśli jednak stosuje się grubsze powłoki platynowe lub większe cząstki, można nadać odchylenie w górę lub grawitas. 11 Szczegóły dotyczące przechowywania koloidów janusa po wytworzeniu mogą również mieć wpływ na obserwowane prędkości pływania. Czysta powierzchnia platyny o wysokiej energii powierzchniowej, powstająca na etapie parowania, jest podatna na zanieczyszczenia powierzchniowe, na przykład węglowodorami, a w szczególności tiolami. 15
Ponadto właściwości roztworu, w którym koloidy Janusa są ponownie zawieszone, mają kluczowe znaczenie dla obserwacji napędu. Niskie stężenia nadtlenków spowodują wolniejsze prędkości, ponieważ zmniejsza się szybkość reakcji rozkładu powodującej ruch. 6 Ponadto niskie stężenia soli spowodują drastyczne zmniejszenie prędkości napędu. 7
Kluczową cechą produkowanych tu koloidów jest ich neutralna wyporność, co sprawia, że nadają się do śledzenia 3D. Ogólnie rzecz biorąc, w dziedzinie urządzeń do pływania niewiele uwagi poświęca się efektom 3D, częściowo ze względu na niektóre wybitne przykłady wykonane z gęstych metali, co powoduje ich szybką sedymentację, ale także ze względu na trudności i koszty związane z wykonaniem wymaganych pomiarów. Niektóre uznane metody śledzenia 3D mają wyraźne wady dla tych szybko poruszających się koloidów, na przykład konfokalna skaningowa mikroskopia laserowa może nie mieć rozdzielczości czasowej, aby zarejestrować wystarczającą liczbę obrazów do rozdzielenia trajektorii. W tym kontekście metoda, którą tutaj prezentujemy, ma tę istotną zaletę, że wymaga tylko jednej klatki, aby umożliwić oszacowanie współrzędnej z, co w konsekwencji pozwala na dużą liczbę klatek na sekundę. Ponadto, ponieważ rekonstrukcja współrzędnej Z opiera się tylko na względnym kontraście koloidu nieostrego w pojedynczych klatkach, a nie na bezwzględnej intensywności fluorescencji, jest ona odporna na efekty wygaszania i mrugania we fluoroforze. Zalety te są możliwe kosztem zmniejszonej głębi ostrości, na której możliwa jest rekonstrukcja trajektorii 3D, oraz wymogu dobrze oddzielonych, nienakładających się na siebie koloidów. Mamy nadzieję, że opisanie protokołu pozwoli innym grupom badawczym zainteresowanym zachowaniem 3D w swoich urządzeniach do pływania na bezpośredni i precyzyjny dostęp do tych informacji. Oczywiste jest, że rozszerzenie wiedzy na temat tych urządzeń na 3D otworzy znaczny zakres interesujących przyszłych zjawisk i zastosowań. Czytelników zainteresowanych dalszymi szczegółami analizy trajektorii kierujemy do Odnośnika 17, który opisuje powszechne artefakty w układach napędowych oraz jak zapewnić dokładną kwantyfikację prędkości napędu.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Ta praca została wsparta grantem EPSRC na przyspieszenie kariery EP/J002402/1.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Parownik | Moorfield (Wielka Brytania) | Parownik e-beam Minilab 80 | |
| Mikroskop | Nikon | Eclipse LV100 | |
| Fluorescencyjne źródło światła | Nikon | Nikon B2A | |
| Obiektyw | Nikon | 20X, 0.45 NA | |
| Kuweta | Hellma | topiony kwarc, 40 x 10 x 1 mm | |
| Mieszalnik wirowy | IKA | Lab Dancer S2 | |
| Powlekarka wirowa | Laurell Technologies Corp. | Model WS-400BZ-6NPP/Lite | |
| Kąpiel ultradźwiękowa | Eumax | 2 litry | |
| Chusteczka do soczewek | Whatman | 2105 841 | |
| Nadtlenek wodoru | Sigma-Aldrich | 31642-1L | 30% wag |
| Platyna | Sigma-Aldrich | 267171 | 0,25 mm, 99,99% |
| Koloidy | Mikrosfery Thermo Scientific | Fluoro-Max PS, d = 1,9 mikronów | |
| Szklany roztwór do odkażania | Fisher Scientific | D/0025/15 | Decon 90 |
| Etanol | Fisher Scientific | E/0600DF/17 | Absolutny etanol |
| DI woda | Elga | Purelab Option (15 MW) | |
| Guma gellanowa | Sigma-Aldrich | P8169-100G | "Phytagel" |