$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Opracuj matrycę próbkowania, aby zapewnić systematyczne i kompleksowe pobieranie próbek z lizymetru
- Podziel lizymetr na woksele o ustalonej długości, szerokości i głębokości.
- Użyj euklidesowego układu współrzędnych przestrzeni i podziel całkowitą odległość wzdłuż każdego kierunku (X, Y i Z) na odpowiednią liczbę równomiernie rozmieszczonych przedziałów. Rozważ wyrzucenie gleby w pobliżu ścianek lizymetru, aby uniknąć efektów granicznych.
UWAGA: W tym eksperymencie przyjęto bufor o długości 5 cm wzdłuż czterech ścian, aby uniknąć efektów granicznych, przy jednoczesnym zapewnieniu, że objętość zebranej gleby jest wystarczająca.
- Przypisz każdej próbce unikalną lokalizację XYZ i zidentyfikuj ją jako woksel.
UWAGA: W tym wykopie X oznacza położenie wzdłuż szerokości zbocza, Y oznacza położenie wzdłuż długości zbocza, a Z oznacza położenie wzdłuż głębokości zbocza. Rozmiar interwałów w każdym wymiarze określa szerokość, długość i głębokość wokseli. Rysunek 2 przedstawia podział lizymetru po wyznaczeniu odstępów wraz z wybranym początkiem układu XYZ. Podział w obecnym schemacie wykopalisk ma 9 interwałów zarówno w kierunku Y, jak i Z oraz 4 interwały wzdłuż kierunku X, co daje w sumie 324 woksele o wymiarach 10 cm x 20 cm x 10 cm (ryc. 3).
UWAGA: Wybrana strategia próbkowania zapewnia, że cały system jest równomiernie próbkowany przy minimalnym uszkodzeniu czujników. Granice każdego woksela (1-2 cm) są odrzucane, aby ograniczyć zanieczyszczenie krzyżowe z sąsiednich wokseli. Ponadto wymiary wokseli zapewniają, że dostępna jest wystarczająca ilość materiału glebowego do pobrania próbek mikrobiologicznych, geochemicznych i hydrologicznych w każdym wokselu.

Rysunek 1. Widok z boku lizymetru. Widok lizymetru od czoła przesiąkania. Widoczne są również trzy obszary czujników (białe rurki PCV) wzdłuż zbocza i system zraszaczy w czterech rogach.

Rysunek 2. Schemat pobierania próbek. Schemat pobierania próbek lizymetru wzdłuż XYZ. ZA. Wymiar X dzieli szerokość na 4 sekcje o długości 10 cm, a wymiar Y dzieli długość na 20 cm. Wymiar Z oznacza głębokość i został podzielony na 9 warstw o głębokości 10 cm. Określono granicę 5 cm wzdłuż krawędzi lizymetru, aby zapobiec pobieraniu próbek, które mogą potencjalnie wykazywać efekt graniczny. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.

Rysunek 3. Trójwymiarowa reprezentacja woksela. Schemat wizualny jednego woksela wzdłuż płaszczyzny XYZ lizymetru. Całe zbocze zostało podzielone na 324 takie woksele, z których każdy reprezentował pojedynczą jednostkę próbkowania. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.
2. Dodaj barwnik Brilliant Blue FCF, aby śledzić infiltrację wody na zboczu
- Nałóż jaskrawoniebieski barwnik na powierzchnię gleby, wystarczający do pokrycia 105 cm powierzchni wzdłuż kierunku Y. Przykryj pozostałą glebę plastikowymi arkuszami.
- Wybierz stężenie (tutaj 10 g/l), aby zagwarantować kontrast z czarną glebą bazaltową. Dodaj barwnik do zbiorników systemu irygacyjnego i rozcieńczyć wodą do pożądanego stężenia.
- Zdecyduj o czasie trwania nawadniania w oparciu o pożądaną głębokość frontu infiltracji i szybkość dostarczaną przez system nawadniający.
UWAGA: W tym badaniu szybkość nawadniania wynosząca 30 mm/h przez 20 minut (rysunek 4) przed wykopaniem jest uważana za wystarczającą w celu zidentyfikowania niejednorodnych wzorców infiltracji wody w ciągu pierwszych kilku centymetrów.
- Po nałożeniu barwnika daj czas na zatrzymanie infiltracji i zrównoważenie stanów wilgotności w lizymetrze. W przypadku tego badania odpowiedni był okres 10 godzin (noc) między nałożeniem barwnika a wykopaliskiem.
3. Rozgraniczenie wokseli
- Przymocuj taśmę mierniczą wzdłuż zbocza, aby zapewnić system odniesienia in-situ do prowadzenia podczas wyznaczania wokseli.
- Zaznacz wymiar każdego woksela glebowego za pomocą taśmy mierniczej. Narysuj linie siatki dla każdej warstwy za pomocą osłon z aluminiowymi ostrzami i plastikowych szpachli (Rysunek 4). Wyrzuć materiały graniczne (5 cm od każdej ściany, aby zapobiec skutkom granic).

Rysunek 4. Widok lizymetru z góry. Ten widok pokazuje barwioną powierzchnię warstwy 2 (10 cm głębokości). Widoczne są również siatki narysowane na powierzchni gleby w celu ułatwienia pobierania próbek, wraz z obszarami otworów rdzeniowych przy każdym wokselu po pobraniu próbki mikrobiologicznej.
4. Pobieranie próbek mikrobiologicznych
- Próbki mikrobiologiczne należy pobierać w asepcji z każdego woksela przed analizami hydrologicznymi i geochemicznymi, aby zapobiec zanieczyszczeniu krzyżowemu próbek. Upewnij się, że wszyscy członkowie wykonujący wykopy noszą nowe rękawice, aby zmniejszyć zanieczyszczenie ludzką skórą.
- Do pobrania próbek mikrobiologicznych należy użyć rdzenia glebowego o średnicy 1 cm i wysokości 20 cm oraz cienkiej szpatułki. Wyczyść rdzeń i szpatułkę wodą destylowaną, wytrzyj do sucha czystymi chusteczkami i spłucz 75% etanolem za pomocą butelki z rozpylaczem. Pozostaw rdzeń i szpatułkę do wyschnięcia na powietrzu.
- Zanotuj czas pobrania każdej próbki. Użyj rdzenia, aby wydrążyć rdzeń na głębokość 10 cm w każdym miejscu woksela, a szpatułki opróżnij próbkę gleby do wstępnie wysterylizowanych plastikowych toreb (rysunek 5). Należy pamiętać, aby otworzyć worek tuż przed złożeniem próbki. Ręczną homogenizację saszetek na próbki.
- Podczas pobierania próbek należy przechowywać worek na próbkę w chłodziarce do lodu i jak najszybciej przenieść do zamrażarki o temperaturze -80 °C.

Rysunek 5. Pobieranie próbek mikrobiologicznych. Mały ręczny rdzeń o wymiarach 20 cm x 1 cm, sterylne worki i szpatułka są pokazane tutaj podczas pobierania próbek mikrobiologicznych. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.
5. Pobieranie próbek z geochemii i hydrologii
- Sfotografuj barwione obszary w płaszczyznach X i Y podczas wykopalisk na głębokościach, na których obserwuje się barwnik. Użyj karty kolorów, aby podać odniesienie do obserwowanego koloru (Rysunek 6). Upewnij się, że obecne jest odpowiednie naturalne oświetlenie, aby prawidłowo udokumentować intensywność kolorów.
- Przenośny spektrometr fluorescencji rentgenowskiej (pXRF) należy kalibrować codziennie przed rozpoczęciem pomiarów. Szczegółowe informacje na temat kalibracji i pomiarów znajdują się w instrukcjach producenta13 (Rysunek 7). Krótko mówiąc, umieść instrument na uchwycie i skieruj okno belki bezpośrednio na fabryczny metalowy koralik. Wybierz "Cal" i odczekaj 30 sekund, aby umożliwić zakończenie kalibracji.
- Wyczyść okno belki przed wykonaniem każdego pomiaru. Zmierz powierzchnię każdego woksela w trzech powtórzeniach w trzech różnych miejscach. Umieść przyrząd pXRF na powierzchni gleby i odczekaj 90 sekund, aby umożliwić zakończenie pomiaru.
UWAGA: Promieniowanie rentgenowskie może przenikać na dużą odległość w kierunku wiązki. Dlatego upewnij się, że tylko przeszkolony personel obsługuje sprzęt i utrzymuje odpowiednie protokoły bezpieczeństwa.

Rysunek 6. Karta kolorów do naśladowania infiltracji barwnika. Każde miejsce z widoczną penetracją barwnika zostało sfotografowane za pomocą karty kolorów służącej jako odniesienie. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.

Rysunek 7. Przenośny spektrometr fluorescencji rentgenowskiej. Ręczny pXRF umieszczony na powierzchni woksela. Pomiary zarejestrowano w trzech różnych miejscach na powierzchni każdego woksela, a następnie uśredniono.
- Czyste rdzenie metalowe (wysokość = 3 cm, średnica = 5,7 cm) i rdzenie poliwęglanowe (wysokość = 6 cm, średnica = 5,7 cm) w celu pomiaru gęstości nasypowej (BD) i przewodności hydraulicznej (Ksat) pożądanych wokseli (rysunek 8).
- Włóż pionowo metalowe rdzenie i rdzenie poliwęglanowe (pionowy Ksat) do żądanych wokseli, uważając, aby nie uszkodzić czujników lub przewodów czujników. Zrób to, delikatnie wbijając rdzenie w glebę, uważając, aby między rdzeniem a młotkiem użyć płaskiej powierzchni, takiej jak drewniany klocek, aby zminimalizować zakłócenia gleby. Dodatkowo, gdy rdzeń znajdzie się w połowie w glebie, umieść drugi rdzeń na pierwszym rdzeniu. Umieść drewniany klocek na drugim rdzeniu i delikatnie wbijaj klocek, aż pierwszy rdzeń zostanie osadzony w glebie z nadal widoczną krawędzią rdzenia.
- Włóż rdzenie do poziomego Ksat, gdy boczna powierzchnia woksela otwiera się z sekwencyjnym wydobyciem. Użyj drewnianego klocka i drugiego rdzenia, jak wspomniano w kroku 5.4, aby zminimalizować zagęszczenie.
- Należy upewnić się, że pobierany jest woksel odizolowany od granic i sąsiednich wokseli przed pobraniem próbki geochemicznej. W tym celu należy użyć plastikowych szpachli, a następnie ręcznych kielni, aby pobrać próbki gleby wokół rdzeni metalowych lub polipropylenowych do oznaczonych worków na próbki geochemiczne (GC), aż rdzenie będzie można łatwo usunąć (np. Rysunek 9a, b).

Rysunek 8. Gęstość nasypowa i przewodność hydrauliczna rdzeni. Rdzenie polipropylenowe (po lewej) służyły do pobierania pionowych i poziomych próbek przewodności hydraulicznej, natomiast rdzenie metalowe (po prawej) służyły do pobierania próbek o gęstości nasypowej.

Rysunek 9. Rozgraniczenie wokseli. Plastikowe szpachelki użyto do (A) odizolowania granic wokseli przed (B) geochemicznym, objętościowym i hydraulicznym zbieraniem rdzenia. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.
- Usuń metalowy rdzeń, zetrzyj nadmiar materiału z obu końców i przenieś próbkę z rdzenia do oznaczonej torby na próbki BD. Zważyć każdy worek z próbką z próbką i zanotować masę całkowitą.
- Usuń rdzenie polipropylenowe. Przykryj obie strony czerwonymi plastikowymi nasadkami i oznacz pionowy rdzeń polipropylenowy jako "V", a poziomy rdzeń polipropylenowy jako "H", a następnie identyfikator próbki.
- Zbierz pozostały materiał z woksela do worka na próbkę GC, pozostawiając kilka centymetrów gleby ze wszystkich czterech stron, aby zapobiec zanieczyszczeniu krzyżowemu z następnym wokselem.
- Powtórz kroki od 5.1 do 5.9 dla pozostałych wokseli w jednej warstwie.
- Gdy wszystkie woksele z jednej warstwy zostaną zakończone, powtórz kroki od 3.2 do 5.10 dla kolejnej warstwy.
UWAGA: Krok 5.1 należy wykonać tylko dla wokseli, które mają widoczny barwnik. Patrz rysunek 10, aby wyświetlić reprezentatywny diagram woksela z zaznaczonymi wszystkimi próbkami pobranymi z każdego woksela.
-

Rysunek 10. Reprezentatywny woksel. Czerwona przerywana linia oznacza rdzeń pobrany do próbki mikrobiologicznej, zielona przerywana linia oznacza poziomy rdzeń przewodności hydraulicznej, żółta linia przerywana oznacza pionowy rdzeń przewodności hydraulicznej, fioletowa przerywana oznacza rdzeń o gęstości nasypowej, a niebieska owalna granica wskazuje pozostałą próbkę z woksela używanego do analizy geochemicznej. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.
6. Przykładowa analiza
- Próbki pobrane do analiz mikrobiologicznych należy wykorzystać do analiz molekularnych (ekstrakcja DNA drobnoustrojów glebowych)14 i hodowlanych (liczba płytek heterotroficznych)15. Wyekstrahowane DNA należy wykorzystać do ilościowych reakcji łańcuchowych polimerazy (qPCR)16 i eksperymentów z sekwencjonowaniem genów o wysokiej przepustowości17,18.
- Wykorzystaj próbki pobrane do analiz geochemicznych do pomiaru wielu właściwości geochemicznych, w tym pH (metoda US EPA 150.2), przewodności elektrycznej (EC) (metoda US EPA 120.1), zawartości węgla i azotu (metoda US EPA 415.3, sekwencyjna ekstrakcja pierwiastków19 oraz spektroskopia dyfrakcji rentgenowskiej (XRD) i rozszerzonej spektroskopii absorpcji promieniowania rentgenowskiego (EXAFS) zgodnie ze specyfikacjami Laboratorium Promieniowania Synchrotronowego w Stanford, do badania przemian mineralnych.
- Próbki rdzeniowe pobrane do analiz hydrologicznych należy wykorzystać do eksperymentów laboratoryjnych, takich jak gęstość nasypowa20 i przewodność hydrauliczna21.