1. Opracowanie macierzy próbkowania w celu zapewnienia systematycznego i kompleksowego próbkowania lizymetru
- Podziel lizymetr na woksle o stałej długości, szerokości i głębokości.
- Użyj kartezjańskiego układu współrzędnych i podziel całkowitą odległość w każdym kierunku (X, Y i Z) na odpowiednią liczbę równomiernie rozmieszczonych odstępów. Rozważ odrzucenie gleby znajdującej się przy ściankach lizymetru, aby uniknąć efektów brzegowych.
UWAGA: W tym eksperymencie przyjęto strefę buforową o szerokości 5 cm wzdłuż czterech ścianek, aby uniknąć efektów brzegowych, zapewniając jednocześnie pobranie wystarczającej objętości gleby.
- Przypisz każdej próbce unikalną lokalizację XYZ i zidentyfikuj ją jako woksel.
UWAGA: W tym wykopywaniu X oznacza położenie wzdłuż szerokości stoku, Y oznacza położenie wzdłuż długości stoku, a Z oznacza położenie wzdłuż głębokości stoku. Wielkość odstępów w każdym wymiarze determinuje szerokość, długość i głębokość woksli. Rysunek 2 przedstawia podział lizymetru po ustaleniu odstępów wraz z wybranym początkiem układu XYZ. Podział w obecnym schemacie wykopów obejmuje 9 odstępów w kierunkach Y i Z oraz 4 odstępy w kierunku X, co daje łącznie 324 woksle o wymiarach 10 cm x 20 cm x 10 cm (Rysunek 3).
UWAGA: Wybrana strategia próbkowania zapewnia równomierne pobranie próbek z całego systemu przy minimalnym uszkodzeniu czujników. Granice każdego woksla (1-2 cm) są odrzucane, aby ograniczyć zanieczyszczenia krzyżowe z sąsiednich woksli. Dodatkowo wymiary woksli zapewniają dostępność wystarczającej ilości materiału glebowego do pobrania próbek mikrobiologicznych, geochemicznych i hydrologicznych z każdego woksla.

Rysunek 1. Widok boczny lizymetru. Widok lizymetru od strony powierzchni przesiąkania. Widoczne są również trzy obszary czujników (białe rurki PVC) wzdłuż stoku oraz system zraszający w czterech narożnikach.

Rysunek 2. Schemat próbkowania. Schemat próbkowania lizymetru wzdłuż osi XYZ. A. Wymiar X dzieli szerokość na 4 sekcje po 10 cm każda, natomiast Y dzieli długość na odcinki 20 cm. B. Wymiar Z wskazuje głębokość i został podzielony na 9 warstw o głębokości 10 cm. Wzdłuż wszystkich krawędzi lizymetru wyznaczono granicę 5 cm, aby zapobiec pobieraniu próbek, które mogą potencjalnie wykazywać efekt brzegowy. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.

Rysunek 3. Trójwymiarowa reprezentacja woksla. Schemat wizualny jednego woksla w płaszczyźnie XYZ lizymetru. Cały stok został podzielony na 324 takie woksle, z których każdy stanowi pojedynczą jednostkę próbkowania. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.
2. Dodanie barwnika Brilliant Blue FCF w celu śledzenia infiltracji wody w stoku
- Nanieś barwnik błękitny na powierzchnię gleby, w ilości wystarczającej do pokrycia górnych 105 cm powierzchni w kierunku Y. Pozostałą część gleby przykryj arkuszami plastikowymi.
- Wybierz stężenie (tutaj 10 g/L), aby zagwarantować kontrast z czarną glebą bazaltową. Dodaj barwnik do zbiorników systemu irygacyjnego i rozcieńcz wodą do pożądanego stężenia.
- Ustal czas trwania irygacji na podstawie pożądanej głębokości frontu infiltracji i wydajności systemu irygacyjnego.
UWAGA: W niniejszym badaniu uznano, że natężenie irygacji 30 mm/hr przez 20 min (Rysunek 4) przed wykopaniem jest wystarczające do zidentyfikowania heterogenicznych wzorów infiltracji wody w ciągu pierwszych kilku centymetrów.
- Po aplikacji barwnika odczekaj, aż infiltracja ustanie, a stany wilgotności w lizymetrze się ustabilizują. W tym badaniu okres 10 hr (cała noc) między aplikacją barwnika a wykopami był odpowiedni.
3. Wyznaczanie woksli
- Przymocuj miarę wzdłuż długości stoku, aby stworzyć system odniesienia in-situ służący jako pomoc podczas wyznaczania woksli.
- Wyznacz wymiary każdego woksla glebowego za pomocą miary. Narysuj linie siatki dla każdej warstwy, używając osłon z aluminiowych ostrzy i plastikowych szpachli (Rysunek 4). Odrzuć materiały brzegowe (5 cm od każdej ścianki, aby uniknąć efektów brzegowych).

Rysunek 4. Widok z góry lizymetru. Ten widok przedstawia zabarwioną powierzchnię warstwy 2 (głębokość 10 cm). Widoczne są również narysowane na powierzchni gleby siatki ułatwiające próbkowanie, a także obszary otworów rdzeniowych w każdym wokslu po pobraniu próbek mikrobiologicznych.
4. Pobieranie próbek mikrobiologicznych
- Pobierz próbki mikrobiologiczne aseptycznie z każdego woksla przed analizami hydrologicznymi i geochemicznymi, aby zapobiec zanieczyszczeniu krzyżowemu próbek. Upewnij się, że wszyscy członkowie wykonujący wykopy noszą nowe rękawiczki, aby zmniejszyć zanieczyszczenie z ludzkiej skóry.
- Do pobierania próbek mikrobiologicznych użyj pobieraka do gleby o średnicy 1 cm i wysokości 20 cm oraz cienkiej szpatułki. Oczyść pobierak i szpatułkę wodą destylowaną, wytrzyj do sucha czystymi chusteczkami i opłucz 75% etanolem za pomocą butelki z rozpylaczem. Pozostaw pobierak i szpatułkę do wyschnięcia na powietrzu.
- Zanotuj czas pobrania każdej próbki. Użyj pobieraka, aby pobrać rdzeń do głębokości 10 cm w lokalizacji każdego woksla, a szpatułki, aby opróżnić próbkę gleby do uprzednio wysterylizowanych plastikowych woreczków (Rysunek 5). Pamiętaj, aby otworzyć woreczek tuż przed umieszczeniem w nim próbki. Homogenizuj woreczki z próbkami ręcznie.
- Przechowuj woreczki z próbkami w chłodziarce z lodem podczas próbkowania, a następnie jak najszybciej przenieś je do zamrażarki -80 °C.

Rysunek 5. Pobieranie próbek mikrobiologicznych. Przedstawiono mały ręczny pobierak o wymiarach 20 cm x 1 cm, sterylne woreczki i szpatułkę podczas próbkowania mikrobiologicznego. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.
5. Pobieranie próbek geochemicznych i hydrologicznych
- Fotografuj zabarwione obszary w płaszczyznach X i Y podczas wykopów dla głębokości, na których zaobserwowano barwnik. Użyj karty kolorów, aby zapewnić punkt odniesienia dla zaobserwowanego koloru (Rysunek 6). Zapewnij odpowiednie naturalne oświetlenie, aby prawidłowo udokumentować intensywność koloru.
- Kalibruj przenośny spektrometr fluorescencji rentgenowskiej (pXRF) codziennie przed rozpoczęciem pomiarów. Szczegóły dotyczące kalibracji i pomiarów znajdują się w instrukcjach producenta13 (Rysunek 7). W skrócie: umieść instrument na uchwycie i skieruj okno wiązki bezpośrednio na fabryczny metalowy koralik. Wybierz opcję „Cal” i odczekaj 30 s, aż kalibracja zostanie zakończona.
- Oczyść okno wiązki przed każdym pomiarem. Zmierz powierzchnię każdego woksla w trzech powtórzeniach w trzech różnych lokalizacjach. Umieść instrument pXRF na powierzchni gleby i odczekaj 90 s, aż pomiar zostanie zakończony.
UWAGA: Promienie rentgenowskie mogą przenikać na dużą odległość w kierunku wiązki. Dlatego upewnij się, że sprzętem posługuje się wyłącznie przeszkolony personel i przestrzega odpowiednich protokołów bezpieczeństwa.

Rysunek 6. Karta kolorów do śledzenia infiltracji barwnika. Każda lokalizacja z widoczną penetracją barwnika została sfotografowana z kartą kolorów służącą jako punkt odniesienia. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.

Rysunek 7. Przenośny spektrometr fluorescencji rentgenowskiej. Ręczny pXRF umieszczony na powierzchni woksla. Pomiary rejestrowano w trzech różnych lokalizacjach na powierzchni każdego woksla, a następnie wyciągnięto z nich średnią.
- Oczyść rdzenie metalowe (wysokość = 3 cm, średnica = 5,7 cm) i rdzenie poliwęglanowe (wysokość = 6 cm, średnica = 5,7 cm) do pomiarów gęstości objętościowej (BD) i przewodności hydraulicznej (Ksat) odpowiednio dla wybranych woksli (Rysunek 8).
- Wprowadź pionowo rdzenie metalowe i poliwęglanowe (pionowe Ksat) do wybranych woksli, uważając, aby nie uszkodzić czujników ani przewodów czujników. Zrób to, delikatnie wbijając rdzenie w glebę, używając płaskiej powierzchni, takiej jak drewniany klocek, pomiędzy rdzeniem a młotkiem, aby zminimalizować zaburzenie struktury gleby. Dodatkowo, gdy rdzeń znajdzie się w połowie głębokości w glebie, umieść drugi rdzeń na wierzchu pierwszego. Połóż drewniany klocek na drugim rdzeniu i delikatnie uderzaj młotkiem, aż pierwszy rdzeń zostanie całkowicie osadzony w glebie, a krawędź rdzenia pozostanie widoczna.
- Wprowadź rdzenie do pomiaru poziomego Ksat w momencie, gdy boczna ściana woksla odsłoni się podczas sekwencyjnego wykopu. Użyj drewnianego klocka i drugiego rdzenia, jak opisano w kroku 5.4, aby zminimalizować zagęszczenie.
- Przed pobraniem próbki geochemicznej upewnij się, że pobierany woksel jest odizolowany od granic i sąsiednich woksli. W tym celu użyj plastikowych szpachli, a następnie ręcznych łopatek, aby zebrać próbki gleby wokół rdzeni metalowych lub polipropylenowych do oznakowanych woreczków na próbki geochemiczne (GC), aż rdzenie będą można łatwo wyjąć (np. Rysunek 9a, b).

Rysunek 8. Rdzenie do pomiaru gęstości objętościowej i przewodności hydraulicznej. Rdzenie polipropylenowe (po lewej) służyły do pobierania próbek pionowej i poziomej przewodności hydraulicznej, natomiast rdzenie metalowe (po prawej) służyły do pobierania próbek gęstości objętościowej.

Rysunek 9. Wyznaczanie woksli. Plastikowe szpachle zostały użyte do (A) izolacji granic woksla przed (B) pobraniem rdzeni do analizy geochemicznej, gęstości objętościowej i przewodności hydraulicznej. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.
- Wyjmij rdzeń metalowy, oczyść nadmiar materiału z obu końców i przenieś próbkę z rdzenia do oznakowanego woreczka na próbkę BD. Zważ każdy woreczek z próbką i zanotuj całkowitą masę.
- Wyjmij rdzenie polipropylenowe. Zakryj obie strony czerwonymi plastikowymi nakrętkami i oznakuj pionowy rdzeń polipropylenowy jako „V”, a poziomy rdzeń polipropylenowy jako „H”, dodając identyfikator próbki.
- Zbierz pozostały materiał z woksla do woreczka na próbki GC, pozostawiając kilka centymetrów gleby z każdej z czterech stron, aby zapobiec zanieczyszczeniu krzyżowemu z następnym wokselem.
- Powtórz kroki od 5.1 do 5.9 dla pozostałych woksli w jednej warstwie.
- Po zakończeniu wszystkich woksli z jednej warstwy, powtórz kroki od 3.2 do 5.10 dla kolejnej warstwy.
UWAGA: Krok 5.1 należy wykonać tylko dla woksli, w których widoczny jest barwnik. Odnieś się do Rysunku 10, aby zobaczyć reprezentatywny schemat woksla z wyróżnionymi wszystkimi próbkami pobranymi z każdego woksla.
-

Rysunek 10. Reprezentatywny woksel. Czerwona przerywana linia wskazuje rdzeń pobrany do próbki mikrobiologicznej, zielona przerywana linia wskazuje rdzeń poziomej przewodności hydraulicznej, żółta przerywana linia wskazuje rdzeń pionowej przewodności hydraulicznej, fioletowa przerywana linia wskazuje rdzeń gęstości objętościowej, a niebieska owalna granica wskazuje pozostałą próbkę z woksla wykorzystywaną do analizy geochemicznej. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.
6. Analiza próbek
- Próbki pobrane do analiz mikrobiologicznych wykorzystaj do analiz molekularnych (ekstrakcja DNA mikrobiologicznego z gleby)14 oraz hodowlanych (liczenie kolonii heterotroficznych)15. Wyekstrahowane DNA wykorzystaj do ilościowej reakcji polimerazy w łańcuchu (qPCR)16 oraz eksperymentów wysokoprzepustowego sekwencjonowania genów17,18.
- Próbki pobrane do analiz geochemicznych wykorzystaj do pomiaru wielu właściwości geochemicznych, w tym pH (metoda US EPA 150.2), przewodności elektrycznej (EC) (metoda US EPA 120.1), zawartości węgla i azotu (metoda US EPA 415.3), sekwencyjnej ekstrakcji pierwiastków19 oraz spektroskopii dyfrakcji rentgenowskiej (XRD) i rozszerzonej struktury subtelnej absorpcji rentgenowskiej (EXAFS) zgodnie ze specyfikacjami Stanford Synchrotron Radiation Laboratory, w celu zbadania przemian mineralnych.
- Próbki rdzeni pobrane do analiz hydrologicznych wykorzystaj w eksperymentach laboratoryjnych, takich jak pomiary gęstości objętościowej20 i przewodności hydraulicznej21.