Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Eksperymentalny protokół elementów skończonych do badania transportu neutralnych i naładowanych substancji rozpuszczonych przez chrząstkę stawową

5.7K wyświetleń

DOI:

10.3791/54984

23 kwietnia 2017

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Proponujemy protokół do badania transportu naładowanych i nienaładowanych cząsteczek przez chrząstkę stawową za pomocą niedawno opracowanych metod eksperymentalnych i numerycznych.

Streszczenie

Choroba zwyrodnieniowa stawów (OA) jest wyniszczającą chorobą, która wiąże się ze zwyrodnieniem chrząstki stawowej i kości podchrzęstnej. Zwyrodnienie chrząstki stawowej znacznie upośledza jej funkcję nośną, ponieważ ulega ona ogromnej degradacji chemicznej, tj. utracie proteoglikanów i zaburzeniu włókien kolagenowych. Jednym z obiecujących sposobów badania mechanizmów uszkodzeń chemicznych podczas choroby zwyrodnieniowej stawów jest wystawienie próbek chrząstki na działanie zewnętrznej substancji rozpuszczonej i monitorowanie dyfuzji cząsteczek. Stopień uszkodzenia chrząstki (tj. stężenie i konfiguracja niezbędnych makrocząsteczek) jest związany z utratą energii kolizyjnej zewnętrznych substancji rozpuszczonych, podczas gdy poruszanie się po chrząstce stawowej tworzy inne charakterystyki dyfuzji w porównaniu ze zdrową chrząstką. W tym badaniu wprowadzamy protokół, który składa się z kilku kroków i opiera się na wcześniej opracowanym eksperymentalnym micro-Computed Tomography (micro-CT) i modelowanie metodą elementów skończonych. Transport naładowanych i nienaładowanych cząsteczek jodowych jest najpierw rejestrowany za pomocą mikro-CT, a następnie stosuje się dwufazowe i wielofazowe modele elementów skończonych w celu uzyskania współczynników dyfuzji i stałych gęstości ładunku w strefach chrząstki.

Wprowadzenie

Transport molekularny odgrywa istotną rolę w homeostazie stawów, dostarczaniu leków do chrząstki stawowej i obrazowaniu chrząstki z kontrastem 1,2,3. Czynniki takie jak integracja i nienaruszalność chrząstki, ładunek i wielkość substancji rozpuszczonej, a także osmolalność i stężenie kąpieli w kontakcie z chrząstką mogą wpływać na szybkość transportu 4,5,6. Transport substancji rozpuszczonych, zarówno obojętnych, jak i naładowanych, może być różny między strefami chrząstki stawowej, ....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

UWAGA: Przedstawiony tutaj protokół został zaadaptowany z procedur eksperymentalnych i obliczeniowych opisanych w niedawnych publikacjach badawczych 6,8,9. Protokół został zilustrowany na Rysunku 1.

Materiały kadaweryczne zostały pobrane za zgodą wydziału weterynarii Uniwersytetu w Utrechcie.

1. Przygotowanie próbki i kąpieli

  1. Wywiercić cylindryczne zatyczki kostno-chrzęstne (średnica 8,5 mm) z kondyli kości udowej koni pobranych z trupów, używając specjalnie wykonanego wiertła (<....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Przedstawione tutaj reprezentatywne wyniki zostały zaczerpnięte z poprzednich prac badawczych 6,8,9,16.

W chorobie zwyrodnieniowej stawów (OA) chrząstka stawowa ulega znacznym zmianom, przede wszystkim utracie glikozoaminoglikanów (GAG) oraz uszkodzeniu włókien kolagenowych. 17<.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Przedstawiliśmy protokół eksperymentalny połączony z procedurą modelowania elementów skończonych w celu zbadania dyfuzji neutralnych i naładowanych substancji rozpuszczonych w chrząstce stawowej. Zgodnie z naszymi ostatnimi badaniami, zaproponowane modele mogą dokładnie opisywać transport zarówno neutralnych (dwufazowo-rozpuszczonych), jak i ujemnie naładowanych (wielofazowych) substancji rozpuszczonych przez różne strefy chrząstki stawowej 8,9. Powszechnie uważa.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Autorzy chcieliby wyrazić swoją wdzięczność Panu/Pani Jeroenowi van den Bergowi i Panu Matthijsowi Wassinkowi z grupy mechaników rozwoju na UMC Utrecht za pomoc w procesie owijania czopów kostno-chrzęstnych. Praca ta została wsparta grantem z Dutch Arthritis Foundation.

....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
HexabrixGuerbet15HX005DUjemnie naładowany środek kontrastowy
VisipaqueGE healthcare12570511Nuetral Środek kontrastowy
PBS (sól fizjologiczna buforowana fosforanem)Technologie życia10010023Średnia
mikrotomografia komputerowaPerkin ElmerMonitorowanie dyfuzji
Osmometr do zamarzaniaZaawansowany PrzyrządyRoztwór pomiarowy osmolalność

Bibliografia

  1. Arkill, K. P., Winlove, C. P. Solute transport in the deep and calcified zones of articular cartilage. Osteoarthritis Cartilage. 16 (6), 708-714 (2008).
  2. Chin, H. C., Moeini, M., Quinn, T. M. Solute transport across the articular surface of injured cartilage.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Transport substancji rozpuszczonychobrazowanie mikro CTmodelowanie metod element w sko czonychwsp czynnik dyfuzjig sto adunku sta egodwufazowy model substancji rozpuszczonychmodel wielofazowysubstancje rozpuszczone oboj tne