Proponujemy protokół do badania transportu naładowanych i nienaładowanych cząsteczek przez chrząstkę stawową za pomocą niedawno opracowanych metod eksperymentalnych i numerycznych.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
* These authors contributed equally
Proponujemy protokół do badania transportu naładowanych i nienaładowanych cząsteczek przez chrząstkę stawową za pomocą niedawno opracowanych metod eksperymentalnych i numerycznych.
Choroba zwyrodnieniowa stawów (OA) jest wyniszczającą chorobą, która wiąże się ze zwyrodnieniem chrząstki stawowej i kości podchrzęstnej. Zwyrodnienie chrząstki stawowej znacznie upośledza jej funkcję nośną, ponieważ ulega ona ogromnej degradacji chemicznej, tj. utracie proteoglikanów i zaburzeniu włókien kolagenowych. Jednym z obiecujących sposobów badania mechanizmów uszkodzeń chemicznych podczas choroby zwyrodnieniowej stawów jest wystawienie próbek chrząstki na działanie zewnętrznej substancji rozpuszczonej i monitorowanie dyfuzji cząsteczek. Stopień uszkodzenia chrząstki (tj. stężenie i konfiguracja niezbędnych makrocząsteczek) jest związany z utratą energii kolizyjnej zewnętrznych substancji rozpuszczonych, podczas gdy poruszanie się po chrząstce stawowej tworzy inne charakterystyki dyfuzji w porównaniu ze zdrową chrząstką. W tym badaniu wprowadzamy protokół, który składa się z kilku kroków i opiera się na wcześniej opracowanym eksperymentalnym micro-Computed Tomography (micro-CT) i modelowanie metodą elementów skończonych. Transport naładowanych i nienaładowanych cząsteczek jodowych jest najpierw rejestrowany za pomocą mikro-CT, a następnie stosuje się dwufazowe i wielofazowe modele elementów skończonych w celu uzyskania współczynników dyfuzji i stałych gęstości ładunku w strefach chrząstki.
Transport molekularny odgrywa istotną rolę w homeostazie stawów, dostarczaniu leków do chrząstki stawowej i obrazowaniu chrząstki z kontrastem 1,2,3. Czynniki takie jak integracja i nienaruszalność chrząstki, ładunek i wielkość substancji rozpuszczonej, a także osmolalność i stężenie kąpieli w kontakcie z chrząstką mogą wpływać na szybkość transportu 4,5,6. Transport substancji rozpuszczonych, zarówno obojętnych, jak i naładowanych, może być różny między strefami chrząstki stawowej, ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
UWAGA: Przedstawiony tutaj protokół został zaadaptowany z procedur eksperymentalnych i obliczeniowych opisanych w niedawnych publikacjach badawczych 6,8,9. Protokół został zilustrowany na Rysunku 1.
Materiały kadaweryczne zostały pobrane za zgodą wydziału weterynarii Uniwersytetu w Utrechcie.
1. Przygotowanie próbki i kąpieli
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedstawione tutaj reprezentatywne wyniki zostały zaczerpnięte z poprzednich prac badawczych 6,8,9,16.
W chorobie zwyrodnieniowej stawów (OA) chrząstka stawowa ulega znacznym zmianom, przede wszystkim utracie glikozoaminoglikanów (GAG) oraz uszkodzeniu włókien kolagenowych. 17<.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedstawiliśmy protokół eksperymentalny połączony z procedurą modelowania elementów skończonych w celu zbadania dyfuzji neutralnych i naładowanych substancji rozpuszczonych w chrząstce stawowej. Zgodnie z naszymi ostatnimi badaniami, zaproponowane modele mogą dokładnie opisywać transport zarówno neutralnych (dwufazowo-rozpuszczonych), jak i ujemnie naładowanych (wielofazowych) substancji rozpuszczonych przez różne strefy chrząstki stawowej 8,9. Powszechnie uważa.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Autorzy chcieliby wyrazić swoją wdzięczność Panu/Pani Jeroenowi van den Bergowi i Panu Matthijsowi Wassinkowi z grupy mechaników rozwoju na UMC Utrecht za pomoc w procesie owijania czopów kostno-chrzęstnych. Praca ta została wsparta grantem z Dutch Arthritis Foundation.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Hexabrix | Guerbet | 15HX005D | Ujemnie naładowany środek kontrastowy |
| Visipaque | GE healthcare | 12570511 | Nuetral Środek kontrastowy |
| PBS (sól fizjologiczna buforowana fosforanem) | Technologie życia | 10010023 | Średnia |
| mikrotomografia komputerowa | Perkin Elmer | Monitorowanie dyfuzji | |
| Osmometr do zamarzania | Zaawansowany Przyrządy | Roztwór pomiarowy osmolalność |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.