Identyfikacja przodków erytromieloidów i ich potomstwa w zarodku myszy za pomocą cytometrii przepływowej

Lorea Iturri; Javier Saenz Coronilla; Yvan Lallemand; Elisa Gomez Perdiguero

doi:10.3791/55305

Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Identyfikacja przodków erytromieloidów i ich potomstwa w zarodku myszy za pomocą cytometrii przepływowej

12.7K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/55305

⸱

17 lipca 2017

Lorea Iturri¹^,² , Javier Saenz Coronilla¹ , Yvan Lallemand¹ , Elisa Gomez Perdiguero¹

¹Department of Developmental and Stem Cell Biology, CNRS UMR3738, Department of Immunology, Institut Pasteur, ²Cellule Pasteur UPMC, University Pierre et Marie Curie

W tym artykule

Podsumowanie

Podczas gdy infiltrujące makrofagi są stale rekrutowane do tkanek dorosłych z krążących prekursorów, makrofagi rezydentne zasiewają swoją tkankę podczas rozwoju, gdzie są utrzymywane bez dalszego wkładu ze strony przodków. Niedawno zidentyfikowano prekursorów rezydujących makrofagów. W tym miejscu przedstawiono metody genetycznego mapowania losów rezydentnych przodków makrofagów.

Streszczenie

Makrofagi to profesjonalne fagocyty z wrodzonego ramienia układu odpornościowego. W stanie stacjonarnym siedzące makrofagi znajdują się w dorosłych tkankach, gdzie działają jako strażnicy pierwszej linii infekcji i uszkodzenia tkanek. Podczas gdy inne komórki odpornościowe są stale odnawiane z hematopoetycznych komórek macierzystych i progenitorowych (HSPC) znajdujących się w szpiku kostnym, wykazano, że linia makrofagów, znana jako makrofagi rezydentne, utrzymuje się samoczynnie w tkankach bez wkładu HSPC szpiku kostnego. Przykładem tej linii jest między innymi mikroglej w mózgu, komórki Kupffera w wątrobie i komórki Langerhansa w naskórku. Blaszka właściwa jelita grubego i okrężnicy są jedynymi dorosłymi tkankami pozbawionymi makrofagów niezależnych od HSPC. Ostatnie badania wykazały, że rezydujące makrofagi pochodzą z pozaembrionalnej hematopoezy woreczka żółtkowego od progenitora (przodków) odrębnego od płodowych hematopoetycznych komórek macierzystych (HSC). Wśród ostatecznej hematopoezy woreczka żółtkowego, progenitorzy erytromieloidalni (EMP) dają początek zarówno komórkom erytroidalnym, jak i szpikowym, w szczególności makrofagom rezydentnym. EMP są generowane w woreczku żółtkowym tylko między E8,5 a E10,5 dniem rozwoju i migrują do wątroby płodu już po połączeniu krążenia, gdzie rozszerzają się i różnicują aż do co najmniej E16,5. Ich potomstwo obejmuje erytrocyty, makrofagi, neutrofile i komórki tuczne, ale tylko makrofagi pochodzące z EMP utrzymują się w tkankach do dorosłości. Przejściowy charakter powstawania EMP i czasowe nakładanie się na wytwarzanie HSC utrudnia analizę tych czynników progenitorowych. Ustaliliśmy protokół mapowania losu indukowany tamoksyfenem w oparciu o ekspresję promotora receptora cytokin makrofagów Csf1r w celu scharakteryzowania komórek EMP i pochodzących z EMP in vivo za pomocą cytometrii przepływowej.

Wprowadzenie

Istnieje kilka kolejnych, ale nakładających się na siebie fal hematopoetycznych prekursorów podczas rozwoju, których mieloidalne potomstwo pozostaje do dorosłości. Po pierwsze, unipotencjalne "prymitywne" progenitorzy pojawiają się w woreczku z żółtkiem myszy ¹^,² między E7.5-E8.25 i dają początek embrionalnym makrofagom bez żadnego monocytowego produktu pośredniego. To, czy makrofagi pochodzące od prymitywnych przodków utrzymują się w dorosłym mózgu jako mikroglej, pozostaje przedmiotem aktywnych badań. Po drugie, prekursory erytro-szpiku (EMP) powstają w woreczku żółtkowym w temperaturze E8,5, dostają się do ....