Ten protokół opisuje centralnie cewnikowany mysi model przedłużającej się choroby krytycznej. Łączymy metodę podwiązania jelita ślepego i nakłucia w celu wywołania sepsy z wykorzystaniem centralnej linii żylnej do podawania płynów, leków i składników odżywczych, aby naśladować warunki kliniczne człowieka.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Zastosowanie centralnej linii żylnej do podawania płynów, leków i składników odżywczych w mysim modelu choroby krytycznej
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Ten protokół opisuje centralnie cewnikowany mysi model długotrwałej choroby krytycznej. Łączymy metodę podwiązania jelita ślepego i nakłucia w celu wywołania sepsy z wykorzystaniem centralnej linii żylnej do podawania płynów, leków i składników odżywczych, aby naśladować warunki kliniczne człowieka. Pacjenci w stanie krytycznym wymagają intensywnej pomocy medycznej, aby przeżyć. Podczas gdy większość pacjentów wraca do zdrowia w ciągu kilku dni, około jedna czwarta pacjentów wymaga długotrwałej intensywnej terapii i jest narażona na wysokie ryzyko zgonu z powodu nierozwiązanej niewydolności wielonarządowej. Co więcej, przedłużająca się faza krytycznej choroby charakteryzuje się głębokim osłabieniem mięśni oraz zmianami endokrynologicznymi i metabolicznymi, których patogeneza nie jest obecnie w pełni poznana. Najczęściej stosowanym modelem zwierzęcym w badaniach na oddziale intensywnej terapii jest model podwiązania i nakłucia jelita ślepego w celu wywołania sepsy. Jest to bardzo powtarzalny model, z ostrymi zmianami zapalnymi i hemodynamicznymi podobnymi do ludzkiej sepsy, który ma na celu badanie ostrej fazy krytycznej choroby. Jednak model ten charakteryzuje się wysoką śmiertelnością, która różni się od klinicznej sytuacji człowieka i nie jest rozwijany do badania przedłużonej fazy krytycznej choroby. W związku z tym dostosowaliśmy tę technikę, umieszczając centralny cewnik żylny w żyle szyjnej, co pozwoliło nam na zapewnienie klinicznie istotnej opieki wspomagającej, aby lepiej naśladować ludzką sytuację kliniczną w stanie krytycznym. Ten mysi model wymaga rozległego zabiegu chirurgicznego i codziennej intensywnej opieki nad zwierzętami, ale skutkuje uzyskaniem odpowiedniego modelu ostrej i przedłużającej się fazy krytycznej choroby.
Wprowadzenie
Choroba krytyczna to stan chorobowy, w którym funkcja jednego lub więcej układów narządów jest utrudniona do tego stopnia, że pacjent umrze, chyba że zostanie udzielone intensywne wsparcie medyczne. Podczas gdy początkowa przyczyna przyjęcia na oddział intensywnej terapii (OIOM) może być różna, począwszy od urazu, skomplikowanej operacji, oparzeń, zaostrzeń choroby po sepsę, wszyscy pacjenci w stanie krytycznym cierpią na uszkodzenie komórek, spowodowane między innymi hipoperfuzją, niedotlenieniem i nadmiernym stanem zapalnym, co prowadzi do niewydolności narządów. Większość pacjentów przeżywa ostrą urazę, ale znaczna część pacjentów nie wraca natychmiast do zdrowia i....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Protokół został zatwierdzony przez Komisję Etyki Badań nad Zwierzętami Uniwersytetu w Leuven.
1. Przygotowanie linii żylnej
- Przygotować końcówkę cewnika żylnego poprzez szybkie zanurzenie środkowej części 60 cm rurki z mikrorenathanu (MRE) w gorącym (> 20 °C) oleju sezamowym. Następnie rozciągnąć środkową część rurki, aby uzyskać wąską średnicę (średnica zewnętrzna (OD) < 0.5 mm), delikatnie oddalając od siebie końce rurki.
- Używając ostrza skalpela, przeciąć rurkę na dwie części po 30 cm każda (patrz Rycina 1, Tabela 1).
- Połączyć rurkę MRE z rurką polietylenową PE10 za pomocą....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Myszy C57BL/6 wprowadzono w stan krytyczny zgodnie z powyższym opisem. Przeprowadzono dwa eksperymenty w celu oceny przeżywalności po CLP do dwóch punktów czasowych: przeżywalności do 5. dnia (n = 15) oraz przeżywalności do 7. dnia (n = 2) po CLP. Krzywe przeżywalności w obu eksperymentach nie różniły się istotnie (porównanie do 5. dnia), co wskazuje na powtarzalność schematu doświadczalnego. Zwierzęta, które nie przeżyły, znaleziono martwe lub poddano im eutanazji po osiągnięciu punktów .......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Opracowaliśmy bardziej istotny klinicznie mysi model krytycznej choroby, łącząc metodę podwiązania jelita ślepego i nakłucia w celu wywołania sepsy za pomocą centralnej linii żylnej do podawania płynów, leków i składników odżywczych. Ten układ eksperymentalny jest powtarzalny, pozwala na badanie przedłużonej fazy krytycznej choroby i skutkuje stabilnym wskaźnikiem śmiertelności, naśladując w ten sposób sytuację kliniczną u ludzi1.
Podwiązanie i nakłucie jelita ślepego z.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
GVdB, za pośrednictwem Uniwersytetu w Leuven (KU Leuven), otrzymuje długoterminowe wsparcie badań strukturalnych z programu Methusalem finansowanego przez rząd flamandzki (METH08/07) i posiada Advanced Grant Europejskiej Rady ds. Badań Naukowych AdvG-2012-321670 z programu Ideas siódmego programu ramowego Unii Europejskiej. SET otrzymał stypendium Research Foundation-Flanders (FWO) Research Assistant Fellowship.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Buprenorfina | Ecuphar | Vetergesic 0,3 mg/ml | |
| C57BL/6 | Janvier labs | C57BL/6JRj | |
| koloidy | Fresenius Kabi | Volulyte 6% | |
| krystaloidy | Baxter | Plasmalyte i viaflo | |
| Ethilon 3.0 | Ethicon | F3211 | |
| Imipenem | MSD | Tienam 500 mg proszek do wstrzykiwań płynu | |
| Isoflurane | Eurovet | Iso-vet | |
| Ketamina | Eurovet | Nimatek 100 mg/ml | |
| LocTite Super glue3 wszystkie tworzywa sztuczne | Rectavit | 119818 | |
| Mersilk 3.0 | Ethicon | L192 | |
| Mersilk 5.0 | Ethicon | F682 | |
| Microrenathane .025" O.D. x .012" I.D. | Bioseb | MRE-025 | |
| olimel N7E | Baxter | ||
| PE10 - Polietylen .011" x .024" | Instech Solomon | BTPE-10 | |
| PE-50 rurka .023" x.038" | Instech Solomon | BTPE-50 | |
| krętlik gryzoni 20 G | Bioseb | RS-20G | |
| Ropivacaï przez | Astrazenica | Naropin 2 mg/ml | |
| Ksylazyna | VMD | Chlorowodorek ksylazyny 2% |
Bibliografia
- Angus, D. C., van der Poll, T. Severe sepsis and septic shock. N Engl J Med. 369 (9), 840-851 (2013).
- Singer, M., et al. The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3). JAMA. 315 (8), 801-810 (2016).
- Remick, D. G., Newcomb, D. E., Bolgos, G. L., Call, D. R.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
