Ta praca opisuje protokół, który wykorzystuje podejście komponentowe do badania wrażliwości na alergeny pyłków traw w kohorcie pacjentów z południowych Chin z alergicznym nieżytem nosa i/lub astmą.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
* These authors contributed equally
Ta praca opisuje protokół, który wykorzystuje podejście komponentowe do badania wrażliwości na alergeny pyłków traw w kohorcie pacjentów z południowych Chin z alergicznym nieżytem nosa i/lub astmą.
Uczulenie na pyłki traw stwarza globalne ryzyko alergicznych chorób dróg oddechowych. Chociaż profilaktyka opiera się na lokalnych badaniach alergenów pyłkowych, dane na ten temat są ograniczone w południowych Chinach. Wszelkie dostępne dane uzyskano za pomocą kwestionariuszy samoopisowych, punktowych testów skórnych oraz testów całkowitych lub swoistych IgE z użyciem ekstraktów surowych. Z wielu powodów metody te są zawodne. Reaktywność sIgE w surowicy na alergeny trawy bermudzkiej, tymotki łąkowej i humulusa w kohorcie pacjentów z Greater Guangzhou (największego miasta południowych Chin i jego obrzeży) z alergicznym nieżytem nosa i/lub astmą badano przy użyciu w pełni zautomatyzowanego analizatora immunologicznego jako narzędzia diagnostycznego z rozdzielczością komponentową (CRD).
Po raz pierwszy wykazano znacznie wysoką częstość występowania dodatniego wyniku sIgE trawy bermudzkiej u chińskich południowców z alergicznym nieżytem nosa i/lub astmą. U tych pacjentów odnotowano również subtelne rozpowszechnienie uczulenia na tymotkę łąkową i Humulus scandens, co może wynikać z reaktywności krzyżowej, ponieważ te dwie ostatnie nie są powszechne w tym regionie. Było to również wspierane przez wykrywanie składników alergenowych.
W pełni zautomatyzowane analizatory immunologiczne mogą zapewnić zadowalającą spójność między regionami, laboratoriami i instytucjami oraz w miarę upływu czasu. Automatyzm przyrządu może umożliwić ustandaryzowaną detekcję, która nie byłaby łatwo ujawniona przed pojawieniem się CRD.
To jest badanie, które wykorzystuje podejście CRD do zbadania wrażliwości na alergeny pyłków traw w południowych Chinach. Uzupełnia to aktualne dowody w literaturze. Potrzebne są dalsze badania, aby potwierdzić te ustalenia. Jednakże, chociaż CRD jest użytecznym narzędziem, wyniki uzyskane za pomocą w pełni zautomatyzowanego analizatora testów immunologicznych nie powinny zastępować innych badań laboratoryjnych, ocen klinicznych i wiedzy specjalistycznej lekarzy.
Pyłki traw stanowią prawie 50% alergii związanych z immunoglobuliną E (IgE) i, ze względu na swój unoszący się w powietrzu, stwarzają globalne ryzyko alergicznych chorób dróg oddechowych, szczególnie astmy i alergicznego nieżytu nosa1,2,3,4. Zapobieganie alergiom na pyłki traw w regionie opiera się na informacjach na temat lokalnego rozmieszczenia alergenów pyłkowych. Niestety, spektrum alergenów uczulających różni się w zależności od miejsca – obserwacja ta jest ogólnie znana jako specyficzność regionalna.
W Chinach, rozległym terytorium Azji Wschodniej, regionalna specyfika uczulenia na pyłki traw jest dodatkowo komplikowana przez ograniczone dane dostępne obecnie z południowej części tego kraju w ciągu ostatnich dziesięcioleci5. Taki niedostatek danych doprowadził do trudności w przedstawieniu ogólnego uczulenia na pyłki traw w tym dużym kraju6. Ponadto bardzo ograniczone dane dotyczące chińskich mieszkańców południa uzyskano w dużej mierze z kwestionariuszy samoopisowych, punktowych testów skórnych (a nie laboratoryjnych testów surowicy), pomiarów całkowitej IgE (a nie IgE specyficznych dla alergenu (sIgE)) oraz wykrywania sIgE alergenów (a nie cząsteczek składników alergenu).
Samodzielne zgłaszanie objawów alergicznych może być niewiarygodne, jeśli chodzi o konkretne alergeny. Punktowe testy skórne, choć powszechnie dostępne, polegają na użyciu niestandardowych, surowych ekstraktów alergenowych, które same w sobie mogą zawierać inne składniki uczulające, które zakłócają interpretację wyników. Wiarygodność punktowego testu skórnego zależy również w krytycznym stopniu od umiejętnej manipulacji przez alergologów lub wyspecjalizowane pielęgniarki, niedawnego stosowania histaminy i przestrzegania zaleceń przez pacjentów (czasami bardzo trudnych w przypadku małych dzieci). Całkowite IgE jest przydatne do badań przesiewowych alergii, ale nie określa sensownie szkodliwych alergenów u pacjenta. Co więcej, prawie wszystkie alergeny zawierają szereg cząsteczek składowych alergenów. Uczulenie na główne składniki (tj. Der p 1 i Der p 2 z roztoczy kurzu domowego) może sugerować "prawdziwą" alergię (alergię na określony alergen, a nie fałszywie dodatnią pozytywność spowodowaną reakcjami krzyżowymi z innymi alergenami), ale uczulenie na niektóre z nich (tj. reaktywny krzyżowo Der p 10, tropomiozyna) może nie 7.
Zanim wprowadzono diagnostykę komponentową (CRD), te rozczarowujące niepowodzenia utrudniały badania nad alergenami w Chinach. CRD precyzyjnie wykrywa składniki alergenu za pomocą rekombinowanych lub oczyszczonych cząsteczek alergenu, dzięki czemu pomiar jest łatwo mierzalny i możliwy do scharakteryzowania8. W minionych dziesięcioleciach w badaniach alergologicznych często stosowano surowe ekstrakty alergenów, które nieuchronnie zawierają szereg nieistotnych składników. Wiele z tych składników jest obojętnych, ale czasami niektóre mogą prowadzić do mylących pozytywnych reakcji. Zastosowanie rekombinowanych lub oczyszczonych cząsteczek alergenów w CRD może obejść ten problem, a tym samym zapewnić lepszą dokładność testu. Po przetworzeniu w mikromacierzach, podejście CRD szybko przesiewa lub identyfikuje uczulenie na setki cząsteczek alergenów u poszczególnych osób. Obecnie brakuje dobrze zaprojektowanego badania CRD dotyczącego uczulenia na pyłki traw w południowych Chinach. Idealnie byłoby, gdyby takie badanie obejmowało lokalną populację o znacznym zasięgu geograficznym, uwzględniało pyłki traw powszechnie zgłaszane w Chinach i odnosiło się do aspektów technicznych wymienionych powyżej. Aby osiągnąć praktyczny poziom znaczenia klinicznego i ułatwić rekrutację próbek surowicy, wczesne badania nad uczuleniem na pyłki traw jako alergeny wziewne mogą równie dobrze koncentrować się na pacjentach z alergicznymi zaburzeniami oddychania, a nie na populacji ogólnej.
Ta praca opisuje metodę używaną do badania reaktywności sIgE surowicy na trawę bermudzką, tymotkę łąkę i skany Humulus u pacjentów z Greater Guangzhou (największe miasto południowych Chin i jego obrzeży) z alergicznym nieżytem nosa i/lub astmą przy użyciu podejścia CRD5. Odkrycia dotyczące uczulenia na te subtropikalne i umiarkowane pyłki traw w południowych Chinach dostarczają ważnych dowodów do tego, co obecnie znajduje się w literaturze.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół badania, w tym użycie próbki ludzkiej surowicy, został zatwierdzony przez Komitet Etyki Pierwszego Szpitala Stowarzyszonego Uniwersytetu Medycznego w Kantonie. Wszyscy uczestnicy wyrazili pisemną świadomą zgodę, samodzielnie lub za pośrednictwem rodziców (w przypadku dzieci). Protokół został zarejestrowany online (Chiński Rejestr Badań Klinicznych, nr rej.: ChiCTR-DCC-13004003, patrz http://www.chictr.org/cn/).
1. Identyfikacja badanej populacji
UWAGA: Repozytorium Informacji o Alergiach Państwowego Kluczowego Laboratorium Chorób Układu Oddechowego (AIR-SKLRD) jest głównym źródłem rekrutacji pacjentów, ponieważ AIR jest najlepiej udokumentowaną dużą bazą danych pacjentów do testów alergenowych w południowych Chinach9,10. AIR przechowuje próbki surowicy pacjentów od prawie dekady. Krótko mówiąc, te przechowywane próbki zostały wcześniej przygotowane przez odwirowanie 5 ml krwi żylnej poddanej flebotomii przez 10 minut przy 3000 x g i odzyskanie supernatantu. Próbki surowicy umieszczono w lodówkach o temperaturze -80 °C w celu długotrwałego przechowywania. Próbki, które spełniały kryteria włączenia pacjenta, były gotowe do użycia we wszystkich testach w niniejszym badaniu.
2. Przebieg badania i interesujące pomiary
3. W pełni zautomatyzowana procedura testowa z wykorzystaniem systemu analizy testów immunologicznych
UWAGA: Cała procedura testowania sIgE alergenów, która jest w pełni zautomatyzowana i została opisana gdzie indziej7,8,9,10, jest zgodna z protokołem producenta.
4. Definicja reaktywności sIgE
UWAGA: Dla próbki surowicy nierozcieńczonej, zakres pomiaru specyficznej IgE wynosi od 0,35 do 100 kU/L.
5. Analiza statystyczna
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
W pełni zautomatyzowany analizator immunoassay użyty w tej badaniu posiada strukturę w fazie stałej pokrytą kowalencyjnie sprzężonymi alergenami lub komponentami alergenów, które reagują z cząsteczkami interesującymi badacza (sIgE) w próbkach surowicy pacjenta. Zgodnie z programem automatycznym analizator wypłukuje wszystkie nieswoiste IgE za pomocą 150 µL roztworu płuczącego, powtarzając ten proces 5 razy. Następnie dodawane są przeciwciała anty-IgE znakowane enzymatycznie (50 µL) w celu...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
W pełni zautomatyzowane analizatory immunologiczne mogą zapewnić zadowalającą spójność między regionami, laboratoriami i instytucjami oraz w czasie. Stwierdzono, że taka automatyczna procedura w znacznym stopniu wspiera badania laboratoryjne i kliniczne, umożliwia standaryzowane wykrywanie wielu alergenów i/lub składników alergenów oraz identyfikuje prawdopodobną reaktywność krzyżową alergenów, która nie byłaby łatwo ujawniona przed pojawieniem się CRD. Co więcej, cała procedura testowa może być zakończona przy ścisłej k...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Dziękujemy Yueming Su za pomoc w przygotowaniu figury. Badanie to zostało sfinansowane przez Fundację Nauki i Technologii Guangdong (nr projektu: 2014A020212352), Biuro Edukacji Guangzhou (1201630044; 1201630393) oraz Chińską Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych (NSFC 81572063; NSFC 81601394).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| ImmunoCAP 1000 Instrument | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 12-3800-01 | |
| Pakiet oprogramowania Phadia Information Data Manager | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 12-3801-11 | |
| Pakiet oprogramowania, ImmunoCAP 1000 | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 12-3801-12 | |
| g2 ( Trawa bermudzka) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 14-4131-01 | |
| g6 (Tymotka trawa) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 14-4100-01 | |
| w22 (japoński chmiel) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 14-4452-01 | |
| g216 (nCyn d 1) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 14-4972-01 | |
| g205 (rPhl p 1) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 14-5234-01 | |
| g208 (nPhl p 4) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 14-5288-01 | |
| g215 (rPhl p 5b) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 14-5338-01 | |
| g209 (rPhl p 6) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 14-5289-01 | |
| g210 (rPhl p 7) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 14-5290-01 | |
| g211 (rPhl p 11) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala, Szwecja) | 14-5291-01 | |
| g212 (rPhl p 12) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 14-5292-01 | |
| o214 Determinanty węglowodanów reagujących krzyżowo (CCD) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 14-5339-01 | |
| Specyficzny koniugat IgE 400 | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 10-9310-08 | |
| Specyficzny pasek kalibracyjny IgE | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 10-9459-08 | |
| Specyficzny pasek kontrolny krzywej IgE | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 10-9312-08 | |
| Specyficzne IgE anty-IgE ImmunoCAP | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 14-4417-01 | |
| ImmunoCAP Specyficzna kontrola negatywna IgE | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 10-9445-01 | |
| ImmunoCAP Specyficzna kontrola IgE L | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala, Szwecja) | 10-9528-01 | |
| ImmunoCAP Specyficzna kontrola IgE M | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala, Szwecja) | 10-9529-01 | |
| ImmunoCAP Specyficzna kontrola IgE H | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala, Szwecja) | 10-9530-01 | |
| Rozwiązanie rozwojowe | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 10-9439-08 | |
| Stop Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 34-2271-58 | |
| Roztwór myjący | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 10-9202-08 | |
| FluoroC | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Szwecja) | 10-9264-01 | |
| Zestaw roztworów do konserwacji | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala, Szwecja) | 10-9476-01 |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.