Ten artykuł demonstruje model mysi do badania rozwoju przerostu mięśniowo-intimalnego (MH) po uszkodzeniu balonu aorty.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Uraz balonowy w celu wywołania przerostu mięśniowo-wewnętrznej w aorcie brzusznej myszy
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Wykorzystanie modeli zwierzęcych jest niezbędne dla lepszego zrozumienia MH, jednej z głównych przyczyn zwężenia tętnicy. W tym artykule przedstawiamy model obnażenia mysiego balonu, który jest porównywalny z ustalonymi modelami uszkodzeń naczyń u dużych zwierząt. Model denudacji aorty z cewnikami balonowymi naśladuje warunki kliniczne i prowadzi do porównywalnych zmian patobiologicznych i fizjologicznych. Krótko, po wykonaniu poziomego nacięcia w aorcie brzusznej, cewnik balonowy zostanie wprowadzony do naczynia, napompowany i wprowadzony wstecznie. Napompowanie balonu doprowadzi do uszkodzenia błony wewnętrznej i nadmiernego rozdęcia naczynia. Po usunięciu cewnika nacięcie aorty zostanie zamknięte pojedynczymi szwami. Model przedstawiony w tym artykule jest powtarzalny, łatwy do wykonania oraz można go szybko i niezawodnie ustalić. Jest szczególnie przydatny do oceny drogich eksperymentalnych środków terapeutycznych, które można stosować w sposób ekonomiczny. Stosując różne szczepy myszy z nokautem, można ocenić wpływ różnych genów na rozwój MH.
Wprowadzenie
Zwężenie tętnic w tętnicach wieńcowych i obwodowych ma duży wpływ na zachorowalność i śmiertelność pacjentów1. Jednym z podstawowych mechanizmów patologicznych jest przerost mięśni mięśniowo-błoniastych (MH), który charakteryzuje się zwiększoną proliferacją, migracją i syntezą białek macierzy zewnątrzkomórkowej z komórek mięśni gładkich naczyń krwionośnych (SMC)2. SMC znajdują się w warstwie pożywki naczynia i migrują po stymulacji na powierzchnię światła. Sygnały stymulujące obejmują czynniki wzrostu, cytokiny, kontakt komórka-komórka, lipidy, składniki macierzy zewnątrzkomórkowej oraz mechaniczne siły ścinania i rozcią....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Zwierzęta otrzymały humanitarną opiekę zgodnie z Przewodnikiem po zasadach postępowania ze zwierzętami laboratoryjnymi, przygotowanym przez Instytut Zasobów Zwierząt Laboratoryjnych i opublikowanym przez National Institutes of Health. Wszystkie protokoły dotyczące zwierząt zostały zatwierdzone przez właściwe władze lokalne ("Amt für Gesundheit und Verbraucherschutz, Hansestadt (Urząd Zdrowia i Ochrony Konsumentów) Hamburg").
1. Przygotowanie cewnika
UWAGA: Zapoznaj się z Tabelą Materiałów, aby uzyskać informacje na temat cewnika.
- Wyjmij cewnik z uchwytu cewnika.
- Wyciągnij pr....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Denudacja balonowa jest odpowiednim modelem do badania rozwoju MH u myszy. Zwierzęta dobrze regenerują się po zabiegu i wykazują doskonałą kondycję fizyczną po operacji. Ustanowiliśmy ten model u 50 myszy, przy śmiertelności wynikającej z procedury chirurgicznej poniżej 3%. Rycina 1B-C przedstawia kluczowe etapy operacji. Po nacięciu skóry wzdłuż linea alba, zidentyfikuj aorta abdominalis. Załóż zaciski mikrochirurgiczne (
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
W artykule przedstawiono model mysi do badania rozwoju przerostu mięśniowo-błony włosowej i umożliwiono eksplorację leżących u ich podstaw procesów patologicznych oraz testowanie nowych leków lub opcji terapeutycznych.
Najważniejszym krokiem w tym protokole jest denudacja aorty. Na tym etapie należy zachować szczególną ostrożność, ponieważ nadmierna denudacja doprowadzi do powstania tętniaka i niepowodzenia modelu. Z drugiej strony, jeśli denudacja zostanie wykonana w niewystarczającym stopniu.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Autorzy dziękują Christiane Pahrmann za jej pomoc techniczną.
D.W. był wspierany przez Fundację Maxa Kade'a. T.D. otrzymał granty od Fundacji Else Kröner (2012_EKES.04) i Deutsche Forschungsgemeinschaft (DE2133/2-1_. S. S. otrzymał granty badawcze od Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG; SCHR992/3- 1, SCHR992/4-1).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 10-0 Szew Ethilon | Ethicon 2814G | ||
| 3 mL Strzykawka | BD Medical | 309658 | |
| 37% HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| 5-0 | Ethicon | EH7229H | |
| 6-0 szew prolenowy | Ethicon | 8706H | |
| Acid Fuchsin | Sigma-Aldrich | F8129-25G | Barwienie trichromem |
| Roztwór do odzyskiwania antygenu | Dako | S1699 | |
| Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | Barwienie trichromem |
| Bepanthen Maść do oczu i nosa | Bayer | 1578675 | Maść do oczu |
| Roztwór Betadine Betadine | Purdue Pharma | NDC: 67618-152 | |
| C57BL / 6J | Charles River | Numer katalogowy 000664 | |
| Aplikator zaciskowy | Fine Science Tools | 18056-14 | JAW WYMIARY: 4 x 0,75 mm DŁUGOŚĆ: 13 mm |
| Kolagen 3 | abcam | ab7778 | Przeciwciało |
| DAPI | Thermo Fischer | D1306 | |
| Donkey anty-kozie IgG AF555 | Invitrogen | A21432 | Przeciwciało wtórne |
| Donkey anty-Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A21206 | Przeciwciało wtórne |
| Donkey anty-Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A11055 | Wtórne przeciwciało |
| Osioł anty-królik IgG AF555 | Invitrogen | A31572 | Przeciwciało drugorzędowe |
| Etanol 70% | Th. Geyer | 2270 | |
| Etanol 96% | Th. Geyer | 2295 | |
| Etanol absolutny | Th. Geyer | 2246 | |
| FAP | abcam | ab28246 | Kleszcze przeciwciał |
| drobne | Narzędzia | do nauki11251-20 | |
| Kleszcze standardowe | Fine Science Tools | 11023-10 | |
| Lodowaty kwas octowy | Sigma-Aldrich | 537020 | |
| Maszynka do strzyżenia włosów | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| Heparyna | Rotexmedica | PZN 3862340 | 25.000 I.E./mL |
| Zestaw do kauteryzacji wysokotemperaturowej | Bovie | 18010-00 | |
| Image-iT FX Signal Enhancer | Invitrogen | I36933 | Roztwór blokujący |
| Jasnozielony SF | Waldeck | 1B-211 | Barwienie trichromowe |
| Zacisk mikrochirurgiczny | Fine Science Tools | 18055-04 | Micro-Serrefine - |
| Cewnik rozszerzający wieńcowe 4 mm MINI TREK 1,20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange | Abbott | 1012268-06U | |
| Hydrat kwasu molibdetofosforowego | Merck | 1.00532.0100 | Barwienie trichromowe |
| NaCl 0,9% | B.Braun | PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160 | |
| Uchwyt igły | Fine Science Tools | 12075-14 | |
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizole |
| Orange G | Waldeck | 1B-221 | Barwienie trichromowe |
| Parafina | Leica biosystems | REF 39602004 | |
| PBS pH 7,4 | Gibco | 10010023 | |
| PFA 4% | Mikroskopia elektronowa Nauka | #157135S | |
| Roztwór Puceau S | Serva Elektroforeza | 33427 | Barwienie trichromowe Pierwszorzędowy |
| rozcieńczalnik przeciwciał | Dako | S3022 | |
| Prolong Gold Roztwór montażowy | Thermo Fischer | P36930 | Roztwór montażowy do szkiełek barwionych immunofluorescencyjnie |
| Wymienna cienka końcówka | Bovie | H101 | |
| Rezorcyna-Fuchsin Weigert | Waldeck | 2E-30 | Barwienie trichromowe |
| Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | karprofenowe |
| Narzędzia naukowe | 14028-10 | ||
| Nożyczki | Narzędzia | naukowe w stylu Vannas15000-03 | |
| Drugorzędowy rozcieńczalnik przeciwciał | Dako | S0809 | |
| Szybko działający klej MINIS 3x1g | UHU | 45370 | cyjanoakrylowe |
| Ted Pella | 21057 | ||
| SM22 | abcam | ab10135 | Przeciwciało |
| SMA | abcam | ab21027 | |
| Naczynie do barwienia | Ted Pella | 21075 | |
| Mikroskop chirurgiczny | Leica | M651 | |
| Tabotamp fibrylarny | Ethicon | 431962 | Wchłanialna |
| taśma chirurgiczna Transpore | 3M | 1527-1 | |
| U-100 Strzykawka insulinowa | BD Medyczny | ||
| Fine Science Tools | 18603-14 | ||
| Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
| Zestaw hematoksyliny żelaza Weigerts | Merck | 1.15973.0002 | Barwienie trichromowe |
| Ksylen | Th. Geyer | 3410 |
Bibliografia
- Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. Deaths: final data for 2009. Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-116 (2011).
- Austin, G. E., Ratliff, N. B., Hollman, J., Tabei, S., Phillips, D. F. Intimal prol....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
