Inkraplanie przezcewkowe jest trudną procedurą i nie zostało dobrze opisane w literaturze. Celem pracy jest opisanie techniki przezcewkowego wprowadzania cewnika do dopęcherzowego podawania płynów z substancjami czynnymi do pęcherza moczowego i/lub prostaty u dorosłych samców myszy.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Procedura wkraplania przezcewkowego u dorosłego samca myszy
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Wewnątrzcewkowe wkraplanie może być wykorzystane do dostarczania różnych roztworów z aktywnymi składnikami (np. lekami, chemikaliami, bakteriami i wirusami) lokalnie do pęcherza moczowego, aby albo wywołać zwierzęce modele patologii pęcherza, albo ocenić skuteczność leczenia dopęcherzowego. Większość modeli gryzoni patologii dolnych dróg moczowych (LUT) jest indukowana u samic myszy ze względu na łatwość dopęcherzowego wkraplania substancji przez cewkę moczową samicy. Jednak ze względu na różnice anatomiczne między żeńskim i męskim LUT, wkraplanie przezcewkowe u samca myszy zostało uznane za bardzo trudną procedurę i nie zostało wcześniej opisane. W tym manuskrypcie przedstawiamy szczegółowy opis, w jaki sposób przygotować rurkę polietylenową (PE) do późniejszego wprowadzenia do cewki moczowej samca myszy. Ponadto omawiamy idealne rodzaje rurek PE, które należy stosować w zależności od pożądanego miejsca inokulacji. Ponadto opisujemy punkt po punkcie, jak przygotować zwierzę do udanego wkraplania przezcewkowego, aby uniknąć uszkodzenia cewki moczowej i zapewnić dostarczenie roztworu w pożądane miejsce. Zabieg rozpoczyna się od cofnięcia napletka i żołędzi w celu odsłonięcia ujścia ujścia cewki moczowej. Następnie żołądź jest chwytana tępymi, nie miażdżącymi kleszczami, aby ustabilizować penisa i rurkę PE. Rurkę PE najpierw wprowadza się do ujścia cewki moczowej równolegle do ciała zwierzęcia, a następnie jej kąt jest regulowany poprzez przechylenie cewnika, aby manewrować nim tak, aby podążał za naturalną krzywizną cewki moczowej. Technika ta może być stosowana do indukowania mysich modeli patologii pęcherza moczowego i/lub oceny skuteczności leczenia dopęcherzowego u samców myszy.
Wprowadzenie
Metoda wkraplania przezcewkowego była stosowana w poprzednich badaniach jako jedna z metod tworzenia modeli patologii pęcherza moczowego u gryzoni1,2,3,4 i może być użyte do oceny skuteczności miejscowo podawanych zabiegów u myszy. Chociaż modele zwierzęce nie mogą w pełni podsumować ludzkich patologii, identyfikacja mechanizmów leżących u podstaw w badaniach na zwierzętach zapewnia lepsze zrozumienie ludzkich zaburzeń LUT, takich jak śródmiąższowe zapalenie pęcherza moczowego/zespół bólu pęcherza moczowego, neurogenne zapalenie pęcherza moc....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie procedury na zwierzętach, w tym sposób i czas trwania znieczulenia, a także opieka pooperacyjna, zostały omówione z weterynarzem i zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC) w powiązanej instytucji. W tym manuskrypcie wszystkie procedury zostały przeprowadzone na samcach myszy C57BL/6 w wieku od 8 do 15 tygodni, a protokół jest zgodny z wytycznymi dotyczącymi opieki nad zwierzętami zatwierdzonymi przez IACUC na Uniwersytecie Kolorado.
1. Przygotowanie wężyków
UWAGA: Aby zaszczepić inokulum, można użyć igły przymocowanej do rurki polietylenowej (PE) (
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Przezkanałowa instylacja barwnika niebieskiego za pomocą rurki PE 50 doprowadziła do wprowadzenia barwnika do pęcherza moczowego (Rysunek 4A), natomiast za pomocą rurki PE 10 do zabarwienia pęcherzyków nasiennych (SV) i prostaty akcesoryjnej (AP) (Rysunek 4B). Aby ocenić, czy przeprowadzona instylacja przezkanałowa powoduje natychmiastowy refluks inokulatu do nerek, obserwowano nerki i moczowody po instylacji 100 µL barwnika nieb.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Manuskrypt ten szczegółowo opisuje metodę wkraplania przezcewkowego u dorosłego samca myszy. Zróżnicowany obszar siewu pierwotnego można osiągnąć za pomocą rur PE o różnych średnicach. PE-50 jest zalecany do skutecznego dotarcia do światła pęcherza moczowego, podczas gdy PE-10 o większej średnicy służy do dotarcia do AP i SV (ryc. 3A-B). Oprócz wyboru rozmiaru rurki PE i narządu docelowego do inokulacji, inne czynniki, takie jak objętość wkroplonego inokulum, również odgrywa.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Autorzy nie mają żadnych podziękowań.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| BD INTRAMEDIC Rurka polietylenowa / PE 10 | BD Medical | 63019-004 | |
| BD INTRAMEDIC Rurka polietylenowa / PE 50 | BD Medical | 63019-048 | |
| BD Insyte-N Autoguard / Angiocath | BD Medical | 311411 | |
| Etanol (EtOH) | Fisher Scientific | BP2818500 | |
| Tylko igła BD o rozmiarze 22 (g) 1 cal | Becton Dickson | ||
| Tylko igła BD Rozmiar 27 (G) 1/2 cala | Becton Dickson | 305129 | |
| Luer króciec, 22 G X 0,5 cala / igła | Instech | LS22 | |
| Luer króciec, 27 G X 0,5 cala / igła | Instech | LS27 | |
| 6 "długości x 2" szerokości x 1" grubości, kamień do ostrzenia z tlenku glinu / kamień olejowy | Norton | 40204034 | |
| Smar chirurgiczny Sterylny bakteriostatyczny Folilpac | Surgilube | 281020543 | |
| Isoflurane | Fluriso | 13985-528-60 | |
| System anestezjologiczny SomnoSuite Szczypce | Kent Scientific | SS-01 | |
| , zakrzywione | vwr | 82027-392 | |
| BD 1 ml Strzykawka | BD Medical | 309626 | |
| India Roztwór atramentu., 0,2% w buforze PBS | Alfa Aesar | J61007 | |
| 8 ~ 12 tygodni samiec C57B/6 Myszy | Jackson Lab | #000664 |
Bibliografia
- Lee, S., Yang, G., Bushman, W. Prostatic inflammation induces urinary frequency in adult mice. PLoS One. 10 (2), e0116827(2015).
- Wong, L., Hutson, P. R., Bushman, W. Prostatic inflammation induces fibrosis in a mouse model of chronic bacterial infection. PLoS One....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
