Artykuł metodologiczny

Przywrócenie poszukiwania narkotyków u myszy przy użyciu paradygmatu warunkowej preferencji miejsca

11.1K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/56983

⸱

7 czerwca 2018

 ,  ,  , 
1Unidad de Investigación Psicobiología de las Drogodependencias, Departamento de Psicobiología, Facultad de Psicología, Universitat de València

W tym artykule

Podsumowanie

Ten protokół opisuje Preferencję Miejsca Warunkowego (CPP) jako model nawrotu. Procedura ta pozwala na pomiar nawrotu u zwierząt laboratoryjnych, biorąc pod uwagę wpływ sygnałów środowiskowych związanych z narkotykami, takich jak głód i nawrót u osób uzależnionych od abstynencji, jest obecnie przedmiotem programów leczenia uzależnień.

Streszczenie

Obecny protokół opisuje Preferencję Miejsca Warunkowego (CPP) jako model nawrotu uzależnienia od narkotyków. W tym modelu zwierzęta są najpierw szkolone, aby uzyskać uwarunkowaną preferencję miejsca w przedziale sparowanym z lekiem, a po teście po kondycjonowaniu wykonują kilka sesji, aby wygasić ustaloną preferencję. CPP pozwala na ocenę uwarunkowanych efektów nagradzania leków związanych ze wskazówkami środowiskowymi. Następnie, zgaszony CPP może zostać solidnie przywrócony przez bezwarunkowe podanie dawki wstępnej leku oraz przez ekspozycję na stresujące bodźce. Obie metody zostaną wyjaśnione tutaj. Kiedy zwierzę ponownie inicjuje reakcję behawioralną, uważa się, że nastąpiło przywrócenie warunkowej nagrody.

Główne zalety tego protokołu to to, że jest nieinwazyjny, niedrogi i prosty z dobrymi kryteriami ważności. Ponadto pozwala na badanie różnych manipulacji środowiskowych, takich jak stres lub dieta, które mogą modulować nawroty do zachowań związanych z poszukiwaniem narkotyków. Jednak jednym z ograniczeń jest to, że jeśli badacz ma na celu zbadanie motywacji i pierwotnych efektów wzmacniających leku, powinien on być uzupełniony procedurami samodzielnego podawania, ponieważ obejmują one reakcje instrumentalne zwierząt.

Wprowadzenie

Paradygmat Warunkowej Preferencji Miejsca (CPP) oferuje prosty sposób oceny warunkowej nagrody wywołanej różnymi bodźcami1,2, i jest szeroko stosowany do badania warunkowych efektów nagradzania uzależniających narkotyków3. Opiera się na warunkowaniu Pawłowa, oceniając motywacyjną wartość sygnałów środowiskowych związanych z narkotykami dla utrzymania zachowań uzależniających4. W tym modelu sygnały środowiskowe uzyskują drugorzędne właściwości apetytywne (uwarunkowane efekty nagradzające) w połączeniu z głównym wzmacniaczem3. Na przykład, początkowo neutralne miejsce (takie jak kolor jednej komory w klatce CPP) jest sparowane z konkretnymi skutkami nadużywania narkotyku podczas niektórych sesji kondycjonowania5, podczas gdy inna komora jest związana z wstrzyknięciem nośnika. Po kondycjonowaniu, jeśli zwierzę spędza więcej czasu w komorze wcześniej związanej z lekiem, zakłada się, że CPP się rozwinęło3. Ustalenie preferencji osiąga się, gdy zwierzę nadaje dodatnią wartość sygnałom środowiskowym związanym z lekiem, który jest głównym czynnikiem wzmacniającym. W związku z tym zwierzęta będą reagować behawioralnie na poszukiwanie narkotyków w odpowiedzi na te kontekstowe wskazówki6. Model CPP pozwala na ocenę właściwości nagradzania podprogowych dawek leku, pokazując, czy zwierzęta w określonym stanie (np. które wcześniej cierpiały z powodu porażki społecznej) są bardziej wrażliwe i wrażliwe na dawki, które nie są skuteczne u zwierząt wcześniej nieleczonych7.

Model CPP został również wykorzystany do oceny wyginięcia/przywrócenia jako model zwierzęcy do badania nawrotów3, co jest celem obecnego protokołu. Istnieją trzy różne fazy: przejęcie, wygaszenie i przywrócenie (Rysunek 1). W modelu przywracania CPP zwierzęta najpierw uzyskują CPP dla kompartmentu sparowanego z lekiem, a następnie przeprowadzają kilka sesji wygaszania. Wyginięcie definiujemy jako moment, w którym zwierzę redukuje swoje reakcje behawioralne polegające na zbliżeniu do warunkowego bodźca nagradzającego, który został usunięty (np. narkotyk)8. Podczas sesji wymierania zwierzęta eksplorują przedziały pod nieobecność leku, tak aby nabyta preferencja była stopniowo osłabiana9. Ważną kwestią do rozważenia jest to, że zmiana behawioralna, którą zwierzę wykazuje podczas wymierania (postępujący spadek czasu spędzonego w komorze sparowanej z lekiem) może być spowodowana nowymi procesami uczenia się, które konkurują z poprzednią wyuczoną reakcją, lub ze względu na spadek wewnętrznego stanu motywacyjnego podmiotu3. Wreszcie, przywrócenie preferencji miejsca poprzez kontekst lub wskazówki dotyczące narkotyków byłoby naszym modelem przywrócenia1.

Podanie zastrzyku pobudzającego powiązanego leku może przywrócić preferencję, co jest uważane za przywrócenie przybliżenia do wskazówek kontekstowych. Przywrócenie narkotyku następuje z powodu trwałej pamięci o przyjemnych skutkach leku, które wywołały głód i motywują zwierzęta do poszukiwania sygnałów środowiskowych związanych z nagrodą.

Niektóre zalety modelu przywracania CPP to to, że procedura jest nieinwazyjna (w przeciwieństwie do samodzielnego podawania, które wymaga operacji), niedroga i prosta. Ponadto model ten ma dobrą trafność kryterium, ponieważ dobrze naśladuje to, co dzieje się u ludzi10,11, indukując przywrócenie za pomocą bodźców, które wywołują nawrót, takich jak ponowna ekspozycja na lek12,13 lub stress14.

Istnieją inne techniki, takie jak model samodzielnego podawania dożylnego przez wygaszanie - przywracanie. W tym przypadku zwierzęta naciskają dźwignię, aby samodzielnie podać lek, co pozwala na ocenę reakcji operacyjnej zwierzęcia, kompulsywności i motywacji14,15,16. Główną przewagą CPP nad procedurami samodzielnego stosowania jest to, że uważa się, że przywrócenie CPP odzwierciedla reaktywację wartości motywacyjno-motywacyjnej bodźców kontekstowych w połączeniu z lekiem, polegającą na ponownym pojawieniu się zachowania podejścia w context17. Co więcej, bodźce niezwiązane z lekami, takie jak stres, mogą również skłaniać do przywrócenia do pracy18,19. Na przykład, jedno z badań dotyczących samodzielnego podawania nie wykazało wpływu na przywrócenie spożycia heroiny u szczurów po wstrząsie stopy lub stresie związanym z unieruchomieniem20. Autorzy stwierdzili, że nie powiodło się, ponieważ te czynniki stresogenne były testowane poza komorą samodzielnego podawania w innym kontekście. W przeciwieństwie do tego, przy użyciu modelu przywrócenia CPP, nastąpiło wyraźne przywrócenie CPP wywołanego morfiną po użyciu tych samych stresorów i zastosowanych w innym kontekście niż CPP i w innym czasie (0 i 15 minut po ekspozycji na stres)18.

Kilka badań w literaturze wykazało różne sposoby przywracania leków i stresu. Z jednej strony, u szczurów i myszy przy użyciu morfiny5,21,22,23, kokaina24,25, amfetamina26,27, etanol28,29oraz 3,4-metylenodioksymetamfetamina (MDMA)30. Z drugiej strony, narażenie na stres może być czynnikiem decydującym o podatności na nadużywanie narkotyków. Wiadomo, że stres zwiększa nagradzające efekty leków7,31,32, a ich rola w nawrocie jest dobrze znana33,34. Na przykład porażka w interakcjach społecznych z przedstawicielem tego samego gatunku przywraca morfinę i kokainę CPP18,19. Ponadto, zwierzęta narażone na powtarzające się porażki społeczne są bardziej podatne na warunkowe efekty nagradzania wynikające z podprogowych dawek kokainy i przywracają preferencję przy bardzo niskich dawkach kokainy7.

Zastosowanie modelu przywracania CPP jest użytecznym i czułym sposobem oceny podatności na nawroty u zwierząt i pozwala na ocenę różnych subtelnych manipulacji środowiskowych, które są głównymi wyzwalaczami grożącymi nawrotem u ludzi, takich jak powrót do zdrowia wywołany narkotykami lub stresem.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące myszy i opieki nad nimi były zgodne z krajowymi, regionalnymi i lokalnymi prawami i przepisami, które są zgodne z Dyrektywą Parlamentu Europejskiego i Rady 2010/63/UE z dnia 22 września 2010 roku w sprawie ochrony zwierząt wykorzystywanych do celów naukowych. Komitet ds. Wykorzystywania i Opieki nad Zwierzętami Uniwersytetu w Walencji zatwierdził niniejszy protokół.

1. Materiały i ustawienia dla preferencji warunkowego miejsca:

  1. Z myszami należy obchodzić się 3 dni przed badaniem przez 1-2 minuty każda. Należy chwycić podstawę ogona. Jeśli to możliwe, ciało powinno być podparte. Ma to na celu zminimalizowanie bólu i stresu podczas pracy ze zwierzęciem oraz zapobieżenie zmiennym zakłócającym, takim jak stres.
    UWAGA: Spośród 1 samca myszy w wieku 60 dni (młodzi dorośli) o wadze 35 - 40 g zostały wykorzystane w niniejszym doświadczeniu. Przywrócenie indukowane lekami można przeprowadzić u myszy obu płci. Jednak jeśli chodzi o przywrócenie do pracy wywołane stresem, paradygmat porażki społecznej jest przeznaczony tylko dla samców gryzoni, ponieważ samice nie wywołują agresywnej reakcji u myszy osiadłych.
  2. Do kondycjonowania miejsc użyj identycznych pudełek wykonanych z dwóch identycznych przegródek (30,7 cm długości × 31,5 cm szerokości × 34,5 cm wysokości) oddzielonych mniejszym centralnym szarym obszarem (13,8 długości × 31,5 cm szerokości × 34,5 wysokości).
    UWAGA: Przegrody mają różne tekstury podłogi i kolory ścian (gładka podłoga w czarnej komorze i szorstka podłoga w białej). Każda komora skrzynki CPP zawiera cztery wiązki światła podczerwonego i sześć w komorze środkowej. Pozwala to na rejestrowanie przejść między przedziałami i pozycji zwierzęcia.
  3. Ustaw światła w pokoju (wyłączone lub obniżone) każdego dnia. Używaj czerwonych świateł (zalecane), ponieważ zwierzęta tego nie dostrzegają i jest ono tłumione dla eksperymentatora (około 40 luksów mierzone na wysokości 1 m nad poziomem podłogi).
  4. Skonfiguruj program tak, aby rejestrował się na 15 minut do testu przed i po kondycjonowaniu (patrz tabela materiałów dla oprogramowania) (Rysunek 2)
  5. Przygotuj roztwór kokainy wymagany do przeprowadzenia całego eksperymentu. Rozpuścić chlorowodorek kokainy w 0,9% NaCl (sól fizjologiczna) w objętości 0,1 ml/10 g masy ciała. Mieszaninę należy spłukać i przechowywać w temperaturze 4 °C pod koniec dnia.
    UWAGA: Stężenie kokainy może się różnić w zależności od celu badania. Jeśli celem jest ocena podprogowych dawek kokainy, można zastosować stężenie 1 mg/kg, które jest nieskuteczne u zwierząt kontrolnych, jak zaobserwowano w poprzednich badaniach24,35. Jeśli celem jest dawka skuteczna, można wybrać stężenie 6 mg/kg, które jest skuteczne, ale nie powoduje przywrócenia24, lub stężenie 25mg/kg, które jest skuteczne i powoduje przywrócenie preferencji19.
  6. Przetestuj zwierzęta w ich ciemnej fazie i używaj tego samego pudełka dla każdego zwierzęcia przez kilka dni.
  7. Codziennie przyprowadzaj zwierzęta do pomieszczenia testowego w ich domowych klatkach i pozostaw je w spokoju przez 15 minut jako okres przyzwyczajenia do wszystkich odgłosów związanych z testem.

2. Test

  1. Akwizycja
    UWAGA: Procedura Warunkowania Miejsca, bezstronna pod względem początkowej spontanicznej preferencji, składa się z trzech faz: Warunkowania wstępnego, Kondycjonowania i Kondycjonowania końcowego (Rysunek 1).
    1. Kondycjonowanie wstępne (Pre-C) (3 dni) (Rysunek 2, Rysunek 3, Rysunek 4)
      UWAGA: W tym miejscu obliczana jest neutralna wartość przegródek w polu CPP. Zmierz czas spędzony w każdej komorze, a następnie porównaj go z czasem spędzonym w tej samej komorze w teście kondycjonowania po kondycjonowaniu.
      1. Przyprowadź zwierzęta do pomieszczenia testowego i pozostaw je w stanie przyzwyczajenia na 15 minut.
      2. Sprawdź, czy gilotyny zostały wyjęte z klatki.
      3. Skonfiguruj komputer i program. Wprowadź identyfikatory zwierząt i naciśnij komendy "Trial" i "Start" (Rysunek 2).
      4. Delikatnie umieść mysz w środkowej komorze (szara komora) i opuść pomieszczenie testowe przy minimalnym hałasie.
      5. Sprowadź wszystkie zwierzęta z powrotem do ich domowych klatek i zapisz dane po zakończeniu próby.
      6. Pozwól myszom uzyskać dostęp do obu komór aparatu przez 15 minut (900 s) dziennie przez 3 kolejne dni.
      7. W dniu 3 zapisz czas spędzony w każdym przedziale w okresie 900 s i zachowaj go do przypisania przedziałów w następnej fazie (Rysunek 3).
      8. Przypisz połowę zwierząt w każdej grupie do otrzymania narkotyku lub pojazdu w jednej komorze (np. czarnej), a drugiej połowy w drugiej przegródce (np. białej) (Rysunek 4).
        UWAGA: Ostateczny podział zwierząt musi zapewniać, że połowa zwierząt zostanie przydzielona do początkowo preferowanego przedziału, a druga połowa do przedziału niepreferowanego. Ponadto połowa zwierząt otrzymywała lek w jednej komorze (na przykład czarnej), a druga połowa w drugiej (w tym przypadku białej).
      9. Wyniki równowagi w grupie w obu przedziałach, a także między grupami (różnice w grupach testowych z analizą wariancji (ANOVA)). Jako przybliżoną wskazówkę, wartości powinny wynosić około 360 - 370 s w teście Pre-C (Rysunek 4). UWAGA: nie należy wykrywać istotnych różnic między czasem spędzonym w komorach sparowanych z narkotykami i sparowanych z nośnikiem podczas testu Pre-C.
      10. Wyklucz zwierzęta, które wykazują silną awersję lub preferencję do jakiegokolwiek przedziału. Rozważ awersję jako spędzanie mniej czasu niż 33% w przedziale i rozważ preferencję, gdy zwierzę spędziło więcej niż 67% całkowitego czasu w tym przedziale.
    2. Kondycjonowanie (4 dni) (Rysunek 5)
      1. Zważ zwierzęta i użyj tych odważników do dawek kokainy podczas kondycjonowania.
      2. Przygotuj strzykawki z kokainą lub solą fizjologiczną w zależności od masy ciała.
      3. Wstrzykuj jedną mysz na raz dootrzewnowo (ip) i natychmiast delikatnie umieść ją w przydzielonej czarnej lub białej komorze pudełka.
      4. Po upływie 4 godzin należy wstrzyknąć dawkę leku bezpośrednio przed zamknięciem myszy w komorze sparowanej z lekiem na 30 minut (Ryc. 5).
      5. Stosuj tę procedurę naprzemiennie każdego dnia, zaczynając od kokainy w 1. i 3. dniu oraz soli fizjologicznej w 2. i 4. dniu.
      6. Sprawdź, czy w obu przypadkach zamknięcie zostało przeprowadzone poprzez zamknięcie drzwiczek gilotyny, które oddzielają dwie komory, uniemożliwiając dostęp do centralnego obszaru.
        UWAGA: W tej fazie nie ma potrzeby instalowania programu na PC.
    3. Kondycjonowanie końcowe (Post-C) (1 dzień)
      1. Przyprowadź zwierzęta do pomieszczenia testowego i pozostaw je w stanie przyzwyczajenia na 15 minut.
      2. Zdejmij drzwiczki gilotyny oddzielające dwie komory.
      3. Skonfiguruj komputer i program. Wprowadź identyfikatory zwierząt i naciśnij polecenie "start".
      4. Zapisz czas spędzony przez nieleczone myszy w każdym przedziale podczas 900-sekundowego okresu obserwacji.
      5. Po zakończeniu próby sprowadź wszystkie zwierzęta z powrotem do ich domowych klatek i zapisz dane.
      6. Weź pod uwagę, że lek wywołał preferencję miejsca, jeśli czas spędzony w komorze sparowanej z lekiem podczas Post-C jest znacznie dłuższy niż w teście Pre-C. Jeśli dzieje się odwrotnie, rozważ awersję do przedziału sparowanego z lekiem.
  2. wymieranie
    1. Przeprowadź cotygodniową sesję wymierania we wszystkich grupach/zwierzętach, które rozwinęły preferencję dla kompartmentu sparowanego z lekiem.
    2. Umieść zwierzę w aparacie (bez gilotyny) na 15 minut (tak samo jak w testach Pre- i Post-C) (Rysunek 1).
      UWAGA: Jeśli dawka zastosowana w CPP jest wysoka (25 mg/kg), należy wykonać 1 sesję wygaszania tygodniowo. Jeśli stosuje się dawkę podprogową (1 mg/kg), należy wykonywać 2 sesje wygaszania w tygodniu (np. w poniedziałek i czwartek).
    3. Rozważmy, że preferencja wygasła, gdy dane z testu wygaszania nie wykazują różnic w odniesieniu do testu Pre-C, ale wykazują różnice w odniesieniu do testu Post-C.
    4. Powtórz test 24 godziny później, aby potwierdzić wyginięcie.
  3. Przywrócenie CPP
    1. Przywrócenie wywołane przez torowanie
      1. Oceń skutki dawki doprowadzającej kokainy 24 godziny po potwierdzeniu jej wyginięcia.
        UWAGA: Dawki wstępne są o połowę mniejsze niż poprzednia dawka, którą zwierzę otrzymało podczas kondycjonowania. Test przywrócenia do pracy odbywa się zgodnie z tym samym protokołem, co w testach Pre-C i Post-C, z wyjątkiem tego, że zwierzęta otrzymują dawkę kokainy w miejscu niezależnym 15 minut przed testem. Skuteczność torowania leków w indukowaniu przywrócenia może być zwiększona po wielokrotnych doświadczeniach związanych z wygaszaniem/przywracaniem23, chociaż kolejność dawek wydaje się nie odgrywać roli w uzyskanych wynikach36.
      2. Przyprowadź zwierzęta do innego pomieszczenia niż pomieszczenie testowe (miejsce niewarunkowe) (Rysunek 6).
      3. Należy wstrzyknąć im połowę poprzedniej dawki kokainy (np. jeśli zwierzęta były kondycjonowane 25 mg/kg kokainy, dawka początkowa wynosiłaby 12,5 mg/kg).
      4. Przynieś je z powrotem do wiwarium na 15 minut.
      5. Zabierz je do pomieszczenia testowego i natychmiast umieść zwierzęta w aparacie (bez drzwiczek gilotyny oddzielających komory) na 15 minut (tak samo jak w przypadku testów Pre- i Post-C).
      6. Rozważ różnicę w sekundach między czasem spędzonym w komorze sparowanej z lekiem podczas ostatniej sesji wygaszania a testem przywracania jako miarą stopnia przywrócenia preferencji wywołanej przez lek.
      7. Powtarzaj procedurę przywracania wygaszania za każdym razem, zmniejszając dawki, aż do potwierdzenia, że jest nieskuteczna.
        UWAGA: Kontrola wstrzykiwania soli fizjologicznej może być stosowana do kontrolowania zdolności zalewania kokainą (a nie samego wstrzyknięcia) do wywołania przywrócenia do pracy.
    2. Przywrócenie do pracy pod wpływem stresu
      1. Oceń skutki przywrócenia wywołanego stresem 24 godziny po potwierdzeniu wyginięcia
        UWAGA: Testy przywracania są takie same jak te przeprowadzane w Post-C (bezpłatne poruszanie się przez 15 minut), z wyjątkiem tego, że zwierzęta są testowane 15 minut po porażce społecznej w agonistycznym spotkaniu (Rysunek 6)
      2. Zabierz zwierzęta do innego pomieszczenia niż pokój CPP.
      3. Umieść eksperymentalną mysz z agresywną płcią przeciwną o równym wieku i masie ciała w plastikowej klatce (Rysunek 6).
        UWAGA: Spotkanie agonistyczne składa się z 10-minutowego testu w neutralnej przezroczystej klatce z tworzywa sztucznego (23x13,5x13cm) z wynikiem porażki dla myszy eksperymentalnej. Aby przygotować agresywnego przeciwnika, najpierw izoluj różne zwierzęta, które pasują pod względem wieku i masy ciała, jak myszy eksperymentalne przez 3 tygodnie. Trenuj je, aby zdobywały doświadczenie bojowe i testuj, aby miały wysoki poziom agresywnego zachowania terytorialnego. Aby uzyskać agresywnych współplemieńców, myszy muszą być izolowane przez co najmniej 3 tygodnie, a następnie szkolone w zachowaniach agresywnych i atakujących. Zwierzęta są szkolone w neutralnym środowisku, zwrócone do nich w parach. Pozwalamy im ugryźć przeciwnika 2 lub 3 razy i wyciągamy go z klatki, zawsze kończąc trening, zanim jedna z dwóch myszy pokaże uległość, tak aby doświadczenie spotkania wzmocniło agresywne zachowanie. Po doświadczeniu agresji (zagrożenie i atak ze strony agresywnego współplemieńca), myszy eksperymentalne powinny wykazywać zachowanie unikające/uciekające i defensywne/uległe. Kryterium jest przyjęcie określonej postawy porażki, charakteryzującej się wyprostowaną pozycją uległą, bezwładnymi przednimi łapami, pochyloną do góry głową i cofniętymi uszami (Ryc. 6). Według Burke'a i in., 2016 uważamy, że spotkanie społeczne kończy się wcześniej, jeśli intruz wykazuje uległą postawę leżącą na plecach przez >8 s lub jeśli doszło do 13 ugryzień ataku. Inną opcją przesiewania zwierząt bez ryzyka poważnych obrażeń może być umieszczenie zwierzęcia w siatkowym pomieszczeniu z otworem, który nie jest wystarczająco duży, aby którekolwiek ze zwierząt mogło przejść. Agresję można wykryć bez narażania zwierząt na bezpośrednie agresywne zachowanie. Jeśli zwierzę dozna urazu z raną o średnicy 1 cm i/lub bezpośrednim odsłonięciem mięśni, Jest wykluczony z badania i powinien zostać poddany eutanazji.
      4. Po 10 minutach agonistycznego spotkania należy zabrać myszy do pomieszczenia testowego i natychmiast umieścić je w aparacie CPP (bez drzwiczek gilotynowych oddzielających przedziały) na 15 minut (tak samo jak w przypadku testów Pre- i Post-C).

3. Analiza statystyczna

UWAGA: Idealna wielkość próby powinna wynosić minimum 15 zwierząt na grupę.

  1. Przeanalizuj średni czas spędzony w przedziale sparowanym z lekiem w grupie za pomocą mieszanej ANOVA z jednym między zmiennymi, leczeniem, z dwoma poziomami (grupa kontrolna, grupa eksperymentalna, przykład dwóch grup znajduje się w Rysunek 7c) i jednym w obrębie zmiennej – Dni, z 2 poziomami (Pre-C i Post-C).
    UWAGA: W grupie kontrolnej zwierzęta otrzymują lek, ale nie mają żadnych manipulacji środowiskowych. Z drugiej strony, w grupie doświadczalnej zwierzęta są narażone na różne warunki środowiskowe. Porównaj czas spędzony w komorze sparowanej z lekiem w dniu po C z testem Pre-C, aby sprawdzić, czy istnieją jakiekolwiek znaczące różnice we wrażliwości na lek.
  2. Ponadto należy przeprowadzić analizy post-hoc Bonferroniego, aby sprawdzić jeden z istotnych wyników.
  3. Przeanalizuj dane związane z wartościami wygaszania i przywracania w grupach, które rozwinęły preferencje za pomocą testów t Studenta, aby kontynuować procedurę wygaszania-przywracania w trakcie eksperymentu, ale w ostatnim momencie przeanalizuj je za pomocą ANOVA ze zmienną wewnętrzną (dni) o liczbie poziomów zależnych od każdej grupy.
    UWAGA: Wraz ze wzrostem liczby porównań zwiększyła się również liczba tych, które przez przypadek będą znaczące. W związku z tym, aby uniknąć wyników fałszywie dodatnich (błędy typu 1), "korygujemy" wartość p, dzięki czemu test jest bardziej konserwatywny dzięki poprawce Bonferroniego dla wielu testów t. Jednakże w przypadku testu przywrócenia do pracy należy dokonać porównania między testem przywrócenia do pracy a ostatnim testem na wygaśnięcie. W związku z tym nie ma potrzeby dokonywania korekty.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

W pierwszej kolejności, na Rysunku 7 przedstawiono reprezentatywne wyniki reinstancji indukowanej primingiem oraz stresem u dorosłych samców myszy OF1.

Dane przedstawione na Rysunku 7a-b, obrazujące czas spędzony w komorze(ach) powiązanych z lekiem w testach Pre-C oraz Post-C, analizowano za pomocą ANOVA z powtarzanymi pomiarami z wewnątrzpodmiotową zmi...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Kluczowym punktem badań nad uzależnieniem od narkotyków jest opracowanie metod leczenia, które zmniejszają głód narkotykowy, a w konsekwencji zmniejszają podatność na nawroty. Dzięki modelowi przywrócenia paradygmatu CPP możliwe jest badanie wpływu różnych czynników proceduralnych i środowiskowych, które modulują nawrót, co jest priorytetem przyszłych badań. Należy wziąć pod uwagę kilka ważnych punktów, ponieważ paradygmat CPP jest testem, który jest bardzo wrażliwy na czynniki środowiskowe.

<...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Generalitat Valenciana, PROMETEOII / 2014/063; Ministerstwo Zdrowia, Opieki Społecznej i Równości. Delegacja Rządu ds. Krajowego Planu Antynarkotykowego, Projekty Badawcze w zakresie Uzależnień od Narkotyków, 2014I007; Ministerstwo Gospodarki i Konkurencyjności (MINECO), Instytut Zdrowia Carlos III, Sieć Zaburzeń Uzależniających (RTA) RD12 / 0028/0005 i RD16 / 0017/0007 oraz Unia Europejska, Fundusze FEDER "una manera de hacer Europa" oraz PSI2014-51847-R.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Oprogramowanie MONPRE 2ZCIBERTEC S.A., HiszpaniaNie dotyczy
Identyczne pudełka z pleksiglasu z dwiema równymi przegrodami oddzielonymi szarym obszarem centralnym.CIBERTEC S.A., HiszpaniaNie dotyczyPrzegrody mają różnokolorowe ścianki (kontra biały) i wyraźną fakturę podłogi (drobna siatka w czarnej komorze i szeroka kratka w białej). Wszystkie boksy są wyposażone w cztery wiązki światła podczerwonego w każdej komorze boksu i sześć w środkowej części, które umożliwiają rejestrowanie pozycji zwierzęcia i jego przejść z jednego przedziału do drugiego.
Chlorowodorek kokainyLaboratorios Alcaliber S.A., Madryt, HiszpaniaNie dotyczy
Zwierzęta: myszy z niekrewniaczego szczepu OF1Charles River, Barcelona, HiszpaniaNie dotyczySamce myszy, które przybywają do laboratorium na PND 42 i PND 60, wykonują test CPP. Zwierzęta te są szczególnie wskazane do modeli porażki społecznej i agresji.
Dieta standardowa- Teklad Global Diet 2014Dostarczone przez Harlan Laboratories Models, S. L. (Barcelona, Hiszpania)13 kcal % tłuszczu, 67 kcal % węglowodanów i 20% kcal białka; 2,9 kcal/g
Dieta wysokotłuszczowa TD.0641545 kcal % tłuszczu, 36 kcal % węglowodanów i 19% kcal białka; 4,6 kcal/g

Bibliografia

  1. Bardo, M., Bevins, R. Conditioned place preference: what does it add to our preclinical understanding of drug reward? Psychopharmacology. 153, 31(2000).
  2. Tzschentke, T. M. Review on CPP: Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade. Addiction biology. 12 (3-4), 227-462 (2007).
  3. Aguilar, M. A., Rodríguez-Arias, M., Miñarro, J. Neurobiological mechanisms of the reinstatement of drug-conditioned place preference. Brain research reviews. 59 (2), 253-277 (2009).
  4. García-Pardo, M. P., Roger-Sánchez, C., De la Rubia Ortí, J. E., Aguilar, M. A. Animal models of drug addiction. Adicciones. 12 (0), 823(2017).
  5. Manzanedo, C., Aguilar, M. A., Rodrı́guez-Arias, M., Miñarro, J. Effects of dopamine antagonists with different receptor blockade profiles on morphine-induced place preference in male mice. Behavioural brain research. 121 (1), 189-197 (2001).
  6. Robbins, T. W. The acquisition of responding with conditioned reinforcement: effects of pipradrol, methylphenidate, d-amphetamine, and nomifensine. Psychopharmacology. 58 (1), 79-87 (1978).
  7. Montagud-Romero, S., Nuñez, C., Blanco-Gandia, M. C., Martínez-Laorden, E., Aguilar, M. A., Navarro-Zaragoza, J., et al. Repeated social defeat and the rewarding effects of cocaine in adult and adolescent mice: dopamine transcription factors, proBDNF signaling pathways, and the TrkB receptor in the mesolimbic system. Psychopharmacology. , (2017).
  8. Pavlov, I. P. Conditioned Reflexes. , Oxford University Press. Oxford. (1927).
  9. Yahyavi-Firouz-Abadi, N., See, R. E. Anti-relapse medications: preclinical models for drug addiction treatment. Pharmacology & therapeutics. 124 (2), 235-247 (2009).
  10. Epstein, D. H., Preston, K. L., Stewart, J., Shaham, Y. Toward a model of drug relapse: an assessment of the validity of the reinstatement procedure. Psychopharmacology. 189 (1), 1-16 (2006).
  11. Geyer, M. A., Markou, A. Animal models of psychiatric disorders. Psychopharmacology: the Fourth Generation of Progress. Bloom, F. E., Kupfer, D. J. , Raven. New York. 787-798 (1995).
  12. De Wit, H. Priming effects with drugs and other reinforcers. Experimental and Clinical Psychopharmacology. 4 (1), 5(1996).
  13. Wang, B., Luo, F., Zhang, W. T., Han, J. S. Stress or drug priming induces reinstatement of extinguished conditioned place preference. Neuroreport. 11 (12), 2781-2784 (2000).
  14. Shalev, U., Erb, S., Shaham, Y. Role of CRF and other neuropeptides in stress-induced reinstatement of drug seeking. Brain research. 1314, 15-28 (2010).
  15. Bossert, J. M., Marchant, N. J., Calu, D. J., Shaham, Y. The reinstatement model of drug relapse: recent neurobiological findings, emerging research topics, and translational research. Psychopharmacology. 229 (3), 453(2013).
  16. Weiss, F. Neurobiology of craving, conditioned reward and relapse. Current opinion in pharmacology. 5 (1), 9-19 (2005).
  17. Mueller, D., Stewart, J. Cocaine-induced conditioned place preference: reinstatement by priming injections of cocaine after extinction. Behavioural brain research. 115 (1), 39-47 (2000).
  18. Ribeiro Do Couto, B., Aguilar, M. A., Manzanedo, C., Rodriguez-Arias, M., Armario, A., Miñarro, J. Social stress is as effective as physical stress in reinstating morphine-induced place preference in mice. Psychopharmacology. 185 (4), 459-470 (2006).
  19. Titomanlio, F., Manzanedo, C., Rodríguez-Arias, M., Mattioli, L., Perfumi, M., Miñarro, J., Aguilar, M. A. Rhodiola rosea impairs acquisition and expression of conditioned place preference induced by cocaine. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. , (2013).
  20. Shalev, U., Highfield, D., Yap, J., Shaham, Y. Stress and relapse to drug seeking in rats: studies on the generality of the effect. Psychopharmacology. 150 (3), 337-346 (2000).
  21. Lu, L., Ceng, X., Huang, M. Corticotropin-releasing factor receptor type 1 mediates stress-induced relapse to opiate dependence in rats. Neuroreport. 11 (11), 2373-2378 (2000).
  22. Ribeiro Do Couto, B., Aguilar, M. A., Manzanedo, C., Rodriguez-Arias, M., Miñarro, J. Reinstatement of morphine-induced conditioned place preference in mice by priming injections. Neural Plast. 10, 279-290 (2003).
  23. Do Couto, B. R., Aguilar, M. A., Rodriguez-Arias, M., Miñarro, J. Long-lasting rewarding effects of morphine induced by drug primings. Brain research. 1050 (1), 53-63 (2005).
  24. Maldonado, C., Rodriguez-Arias, M., Castillo, A., Aguilar, M. A., Miñarro, J. Gamma-hydroxybutyric acid affects the acquisition and reinstatement of cocaine-induced conditioned place preference in mice. Behav. Pharmacol. 17, 119-131 (2006).
  25. Maldonado, C., Rodriguez-Arias, M., Castillo, A., Aguilar, M. A., Miñarro, J. Effect of memantine and CNQX in the acquisition, expression and reinstatement of cocaine-induced conditioned place preference. Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 31, 932-939 (2007).
  26. Cruz, F. C., Marin, M. T., Planeta, C. S. The reinstatement of amphetamine-induced place preference is long-lasting and related to decreased expression of AMPA receptors in the nucleus accumbens. Neuroscience. 151, 313-319 (2008).
  27. Li, S. M., Ren, Y. H., Zheng, J. W. Effect of 7-nitroindazole on drug-priming reinstatement of D-methamphetamine-induced conditioned place preference. Eur. J. Pharmacol. 443, 205-206 (2002).
  28. Font, L., Miquel, M., Aragon, C. M. Involvement of brain catalase activity in the acquisition of ethanol-induced conditioned place preference. Physiol. Behav. 93, 733-741 (2008).
  29. Roger-Sánchez, C., Aguilar, M. A., Rodríguez-Arias, M., Aragon, C. M., Miñarro, J. Age-and sex-related differences in the acquisition and reinstatement of ethanol CPP in mice. Neurotoxicology and teratology. 34 (1), 108-115 (2012).
  30. Daza-Losada, M., Do Couto, B. R., Manzanedo, C., Aguilar, M. A., Rodríguez-Arias, M., Miñarro, J. Rewarding effects and reinstatement of MDMA-induced CPP in adolescent mice. Neuropsychopharmacology. 32 (8), 1750-1759 (2007).
  31. Will, M. J., Watkins, L. R., Maier, S. F. Uncontrollable stress potentiates morphine's rewarding properties. Pharmacol. Biochem. Behav. 60, 655-664 (1998).
  32. Der-Avakian, A., Will, M. J., Bland, S. T., Deak, T., Nguyen, D. T., Schmid, M. J., Spencer, R. L., Watkins, L. R., Maier, S. F. Surgical and pharmacological suppression of glucocorticoids prevents the enhancement of morphine conditioned place preference by uncontrollable stress in rats. Psychopharmacology. 179, 409-417 (2005).
  33. Sinha, R. How does stress increase risk of drug abuse and relapse? Psychopharmacology. 158, 343-359 (2001).
  34. Lu, L., Shepard, J. D., Hall, F. S., Shaham, Y. Effect of environmental stressors on opiate and psychostimulant reinforcement, reinstatement and discrimination in rats: a review. Neurosci. Biobehav. Rev. 27, 457-491 (2003).
  35. Vidal-Infer, A., Arenas, M. C., Daza-Losada, M., Aguilar, M. A., Miñarro, J., Rodríguez-Arias, M. High novelty-seeking predicts greater sensitivity to the conditioned rewarding effects of cocaine. Pharmacol Biochem Behav. 102, 124-132 (2012).
  36. Reguilón, M. D., Montagud-Romero, S., Ferrer-Perez, C., Roger-Sánchez, C., Aguilar, M. A., Miñarro, J., Rodríguez-Arias, M. Dopamine D2 receptors mediate the increase in reinstatement of the conditioned rewarding effects of cocaine induced by acute social defeat. European Journal of Pharmacology. 799, 48-57 (2017).
  37. Ribeiro Do Couto, B., Aguilar, M. A., Lluch, J., Rodríguez-Arias, M., Miñarro, J. Social experiences affect reinstatement of cocaine-induced place preference in mice. Psychopharmacology. 207 (3), 485-498 (2009).
  38. Blanco-Gandía, M. C., Aracil-Fernández, A., Montagud-Romero, S., Aguilar, M. A., Manzanares, J., Miñarro, J., Rodríguez-Arias, M. Changes in gene expression and sensitivity of cocaine reward produced by a continuous fat diet. Psychopharmacology. 234 (15), 2337-2352 (2017).
  39. Tzschentke, T. M. Measuring reward with the conditioned place preference paradigm: a comprehensive review of drug effects, recent progress and new issues. Progress in neurobiology. 56 (6), 613-672 (1998).
  40. Blanco-Gandía, M. C., Ledesma, J. C., Aracil-Fernández, A., Navarrete, F., Montagud-Romero, S., Aguilar, M. A., Manzanares, J., Miñarro, J., Rodríguez-Arias, M. The rewarding effects of ethanol are modulated by binge eating of a high-fat diet during adolescence. Neuropharmacology. 121, 219-230 (2017).
  41. Itzhak, Y., Martin, J. L. Cocaine-induced conditioned place preference in mice: induction, extinction and reinstatement by related psychostimulants. Neuropsychopharmacology. 26 (1), 130-134 (2002).
  42. Kreibich, A. S., Blendy, J. A. cAMP response element-binding protein is required for stress but not cocaine-induced reinstatement. Journal of Neuroscience. 24 (30), 6686-6692 (2004).
  43. Zavala, A. R., Weber, S. M., Rice, H. J., Alleweireldt, A. T., Neisewander, J. L. Role of the prelimbic subregion of the medial prefrontal cortex in acquisition, extinction, and reinstatement of cocaine-conditioned place preference. Brain research. 990 (1), 157-164 (2003).
  44. Orsini, C., Bonito-Oliva, A., Conversi, D., Cabib, S. Genetic liability increases propensity to prime-induced reinstatement of conditioned place preference in mice exposed to low cocaine. Psychopharmacology. 198 (2), 287-296 (2008).
  45. Sun, Y., Pan, Z., Ma, Y. Increased entrances to side compartments indicate incubation of craving in morphine-induced rat and tree shrew CPP models. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 159, 62-68 (2017).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Przywr cenie poszukiwania narkotykupriming kokainowyprzywr cenie indukowane stresemspo eczna pora katrening wygaszaniamanipulacja rodowiskowamodel uzale nienia od narkotyk wtestowanie zachowania myszyocena nawrot w

Powiązane artykuły