Ocena anoreksji opartej na aktywności u myszy

Podsumowanie

Myszy indywidualnie wyposażone w koło do biegania, podczas gdy mają ograniczony dostęp do jedzenia, zmniejszają spożycie jedzenia i zwiększają aktywność na kole do biegania. To eksperymentalne zjawisko nazywa się anoreksją opartą na aktywności. Paradygmat ten stanowi eksperymentalne narzędzie do badania neurobiologii i zachowań leżących u podstaw jadłowstrętu psychicznego.

Streszczenie

Gryzonie rozwijają anoreksję opartą na aktywności (ABA), gdy są narażone na ograniczony harmonogram karmienia i mają swobodny dostęp do koła do biegania. Stany te prowadzą do zagrażającego życiu zmniejszenia masy ciała. Jednak gryzonie narażone tylko na jeden z tych warunków ostatecznie przystosowują się do przywrócenia normalnej masy ciała. Chociaż wzmożone bieganie w połączeniu ze zmniejszeniem dobrowolnego spożycia pokarmu wydaje się paradoksalne w warunkach ABA, zachowanie ABA obserwuje się u wielu gatunków ssaków.

Paradygmat ABA dostarcza zwierzęcego modelu dla jadłowstrętu psychicznego (AN), zaburzenia odżywiania z poważną dysregulacją apetytu. Obiekty są zakwaterowane pojedynczo z bezpłatnym dostępem do koła do biegania. Każdego dnia pacjentowi oferuje się jedzenie przez ograniczony czas. W trakcie eksperymentu masa ciała osoby badanej zmniejsza się z powodu wysokiej aktywności i niskiego spożycia kalorii. Czas trwania badania różni się w zależności od tego, jak długo jedzenie jest podawane codziennie, rodzaju oferowanego pokarmu, szczepu myszy, tego, czy testowane są narkotyki i czynników środowiskowych.

Brak skutecznych metod leczenia farmakologicznego dla pacjentów z AN, ich niska jakość życia, wysokie koszty leczenia i wysoka śmiertelność wskazują na pilną potrzebę dalszych badań nad AN. Przedstawiamy podstawowy zarys przeprowadzania eksperymentów ABA na myszach, oferując metodę badania zachowań podobnych do AN-u w celu opracowania nowych terapii. Protokół ten jest zoptymalizowany do stosowania u myszy Balb/cJ, ale można nim łatwo manipulować dla innych szczepów, zapewniając dużą elastyczność w pracy z różnymi pytaniami, zwłaszcza związanymi z czynnikami genetycznymi ABA.

Wprowadzenie

Od 1953 roku gryzonie wykazują paradoksalną nadpobudliwość na kółkach do biegania, gdy mają swobodny dostęp do kół podczas dobrowolnego hipofagii, gdy dostępność pożywienia jest ograniczona¹. I odwrotnie, gryzonie nie tracą gwałtownie masy ciała, gdy oferuje się im jedzenie zgodnie z harmonogramem bez kół do biegania lub gdy są trzymane z kółkami do biegania i oferują jedzenie ad libitum^1,2,3. Model ABA niezawodnie powoduje dramatyczne spadki masy ciała, hipofagię, hipotermię, utratę rui i zwiększoną stymulację osi HPA⁴. Ostatecznie ABA prowadzi do śmierci, chyba że podmiot zostanie usunięty z paradygmatu⁵. Paradygmat ABA dostarcza naukowcom zwierzęcego modelu AN, złożonego zaburzenia odżywiania, które charakteryzuje się poważną dysregulacją zachowań związanych z apetytem, dotykającą około 1 na 100 kobiet i mniejszy odsetek mężczyzn⁶. Pacjenci cierpiący na AN często wykazują nadpobudliwość, składającą się z ekstremalnych ilości ćwiczeń i/lub ogólnego niepokoju^7,8. Ze wskaźnikiem śmiertelności wynoszącym około 10%, AN ma najwyższy wskaźnik śmiertelności spośród wszystkich zaburzeń psychicznych⁹. Obecne leczenie AN ogranicza się do terapii poznawczych, ponieważ nie ma zatwierdzonych metod leczenia farmakologicznego dla osób cierpiących na AN^10,11.

AN jest zazwyczaj uważane za zaburzenie dotykające głównie kobiety. Jako diagnoza, która jest 10 razy bardziej prawdopodobna u kobiet niż u mężczyzn, kobiety są tradycyjnie w centrum uwagi w AN¹². Należy jednak zwrócić szczególną uwagę na wykluczenie mężczyzn z badań. Podczas gdy diagnoza AN pozostaje niższa u mężczyzn, dysmorfia mięśniowa (MD) jest stanem, który ma wiele podobieństw do AN, w którym obraz ciała jest zniekształcony, a dieta jest często zaburzona. Istnieje poparcie dla poglądu, że MD i AN mogą być klasyfikowane w podobny sposób^13,14,15. Może to sugerować, że niektóre przypadki MD reprezentują "męską wersję" AN. W kontekście modeli zwierzęcych niektóre doniesienia sugerują, że mężczyźni są bardziej podatni na paradygmat ABA niż samice. Na przykład niedawne badanie wykazało wyższą śmiertelność i zmniejszone spożycie pokarmu w porównaniu z samicami myszy C57Bl/6 ¹⁶. Jednym z predyktorów podatności na ABA jest spontaniczna aktywność fizyczna (SPA). Szczury z wyższym lub niższym SPA są bardziej skłonne do utraty wagi w paradygmacie ABA, przy czym samce szczurów wykazują silniejszy efekt niż samice¹⁷. I odwrotnie, zaobserwowano, że samice gryzoni ćwiczą więcej niż samce podczas fazy restrykcji ABA¹⁸. Ponadto badania na myszach Balb/cJ wykazały odwrotny efekt myszy C57Bl/6, gdzie samice myszy mają wyższy wskaźnik śmiertelności i zmniejszone spożycie pokarmu w porównaniu z samcami (Ryc. 1)6. Ze względu na różne wyniki między płciami w paradygmacie ABA i rosnącą świadomość mężczyzn z zaburzonymi wzorcami żywieniowymi, zarówno mężczyźni, jak i kobiety powinni być testowani.

Oprócz różnic płci w paradygmacie ABA, wiek i szczep muszą być brane pod uwagę przy wyborze tematów. Dorastające myszy mogą dokładniej modelować AN, ponieważ AN zwykle pojawia się w okresie dojrzewania, co zaobserwowano u szczurów i myszy^19,20,21,22. Szczepy, które są bardziej aktywne niż inne na poziomie wyjściowym, mają wyższy wskaźnik podatności i nasilenia ABA²³. Szczepy, o których wiadomo, że mają wyższy poziom lęku, takie jak DBA/2, mają zwiększoną aktywność podczas biegania na kółkach, co wskazywałoby na szybszy wskaźnik rezygnacji w paradygmacie ABA²⁴. W zależności od projektu eksperymentalnego, wybrany szczep może być dostosowany tak, aby zmaksymalizować czas trwania ABA.

Paradoks ABA nie występuje wyłącznie u myszy. Inne ssaki, w tym szczury, chomiki, myszoskoczki, świnie, wiewiórki i świnki morskie, wykazały to zjawisko⁶. Zachowanie zjawiska ABA u różnych gatunków ssaków sugeruje, że paradygmat ABA może stanowić narzędzie translacyjne do badania mechanizmów leżących u podstaw zachowań podobnych do anoreksji u ludzi. W szczególności myszy są dobrze przystosowane do badania mechanizmów leżących u podstaw ABA. Myszy mogą być gęsto trzymane, a czas generacji jest stosunkowo krótki. Myszy mają w pełni zsekwencjonowany genom i dostępne są liczne szczepy wsobne, niekrewniacze i specjalne, takie jak kongeny. Wygenerowano ogromną liczbę genetycznie zmanipulowanych linii, co czyni je idealnymi do badań oceniających wpływ genetyki na zaburzenia, takie jak AN. W zależności od pytania, naukowcy mogą manipulować złożonymi obwodami neuronalnymi i/lub ekspresją genów, aby ocenić zachowanie w paradygmacie ABA, potencjalnie odpowiadając na pytania dotyczące wpływu genetycznego, które nie są możliwe podczas badania ludzi.

Obecnie istnieje ograniczona liczba zwierzęcych modeli AN. Modele stresu wywołują hipofagię u gryzoni za pomocą szczypania ogona, hipofagii wywołanej nowością, zimnego pływania i stymulacji mózgu. Wywołując stres, zmiany w osi HPA zmniejszają apetyt, co skutkuje zmniejszeniem masy ciała²⁵. Jednak oś HPA jest również silnie stymulowana przez ABA, który obejmuje również dodatkowe cechy AN, takie jak nadpobudliwość. Innym modelem, który należy wziąć pod uwagę w badaniu AN, jest model przewlekłego ograniczania pokarmu. Ograniczając pokarm do zakresu od 40 do 60% ad libitum, można naśladować fizjologiczną reakcję na niedożywienie²⁶. Chociaż ta metoda jest skuteczna w badaniu skutków nieodpowiedniego żywienia, nie odtwarza podstawowego problemu AN, którym jest dobrowolne ograniczanie żywności. W paradygmacie ABA zwierzęta są pozbawione dostępu do pożywienia na część dnia, ale także dobrowolnie ograniczają spożycie pokarmu, jeśli obecne jest również koło. Modele genetyczne zostały również wykorzystane do zbadania etiologii AN. Naukowcy odkryli czynniki neurochemiczne i genetyczne związane z AN, takie jak gen BDNF i neuroprzekaźniki dopamina i serotonina²⁷. Wykorzystanie modeli genetycznych ma kluczowe znaczenie dla zrozumienia mechanizmów neuronalnych stojących za AN. Jednak badania asocjacyjne całego genomu dla AN nie przyniosły jeszcze znaczących trafień i nie zidentyfikowano żadnych rzadkich wariantów AN. Przyszłe badania powinny łączyć podejście genetyczne z modelem ABA, aby lepiej zrozumieć fenotypy związane z AN.

Opracowanie modeli zwierzęcych dla całych zaburzeń psychicznych jest praktycznie niemożliwe ze względu na złożoność i niejednorodność ludzkich zaburzeń. Jednak poprzez modelowanie specyficznych, dobrze zdefiniowanych elementów zaburzenia psychicznego można uzyskać unikalny wgląd w leżącą u ich podstaw neurobiologię lub patofizjologię. Takie spostrzeżenia biologiczne mogą być następnie wykorzystane do identyfikacji nowych metod leczenia. Paradygmat ABA gryzoni stanowi zatem przedkliniczne narzędzie do badania mechanizmów leżących u podstaw zachowań podobnych do AN, których nie można etycznie badać u ludzi, takich jak skutki manipulacji genetycznych, zaburzenia obwodów nerwowych i konsekwencje niektórych czynników środowiskowych.

Protokół

Wszystkie opisane tutaj metody zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania (IACUC) Uniwersytetu Kalifornijskiego w San Diego.

1. Myszy

1. Wybierz odpowiednią odmianę myszy do badania.
2. Kup myszy od dostawcy lub wzmocnij linię, aby uzyskać odpowiednie liczby eksperymentalne.
3. Grupowy zakupił myszy w obiekcie dla zwierząt przez co najmniej 1 tydzień przed rozpoczęciem badania, aby umożliwić długi okres aklimatyzacji.
4. Rozpocznij fazę aklimatyzacji przedeksperymentalnej, gdy myszy mają 8 tygodni.

2. Mieszkalnictwo

1. Wybierz klatki, które są wystarczająco duże, aby pomieścić niezakłócone koło do biegania, pojemnik na żywność i butelkę z wodą.
2. Reguluj temperaturę i wilgotność w pomieszczeniu, aby uzupełnić testowaną hipotezę.
   UWAGA: Wyższe temperatury ograniczą rozwój ABA²⁸.

3. Koła jezdne

1. Wybierz kółka z komunikacją bezprzewodową, aby uniknąć potencjalnego rozproszenia uwagi i zaplątania się w klatkę, patrz Tabela materiałów dla example.

4. Butelki na wodę

1. Wybierz butelkę na wodę, która nie będzie konkurować o miejsce z kółkiem do biegania lub pojemnikiem na żywność w klatce domowej.
2. Jeśli prowadzisz leczenie farmakologiczne w wodzie pitnej, przyklej butelkę taśmą klejącą, aby stworzyć środowisko wrażliwe na światło.

5. Jedzenie

1. Wybierz niskotłuszczową karmę odpowiednią do testowanej hipotezy (np. Envigo's Rodent Diet 8604).
   UWAGA: Diety bogate w tłuszcze i cukier mogą zmniejszyć rozwój ABA²⁹.
2. Użyj małego szklanego słoika, aby przygotować karmę o średnicy około 65 cm x wysokości 50 cm.
   UWAGA: Zamiast szklanego słoika można użyć automatycznego podajnika, co może zmniejszyć stres, ograniczając ingerencję badacza. Może to być najkorzystniejsze w przypadku wykonywania badań ABA z manipulacjami lekami.

6. Faza aklimatyzacji przedeksperymentalnej

1. Skonfiguruj obszar eksperymentalny, wybierając stojak na klatkę w pobliżu laptopa i piast kół. Ograniczy to problemy z transmisją danych.
2. Włącz laptopa i koncentratory bezprzewodowe.
3. Otwórz oprogramowanie do zarządzania kierownicą na laptopie.
   1. Spójrz na oprogramowanie, aby upewnić się, że oba koncentratory są aktywne.
   2. Otwórz "narzędzia" i wybierz "usuń koła". Powtórz ten krok 5 razy.
   3. Zamknij oprogramowanie, a następnie otwórz je ponownie.
4. Umieść 3 baterie AAA w zestawie baterii podstawy osi.
   1. Podłącz przewody akumulatora do osprzętu podstawy osi. Zostanie on odłączony przed użyciem. Zamknij akumulator w podstawie osi.
5. Sprawdź oprogramowanie, aby upewnić się, że rozstaw osi jest wymieniony z identyfikatorem "1" pod odpowiednim koncentratorem bezprzewodowym. Jeśli baza nie jest wymieniona jako ID "1", odczep akumulator i zacznij od kroku 6.2.
6. Zmień identyfikator koła z "1" na identyfikator myszy w kolumnie nazwy.
7. Przyklej podstawę koła jezdnego do dolnej części klatki za pomocą taśmy klejącej, aby zapewnić stabilność. Nie pozwól, aby jakakolwiek taśma wystawała, ponieważ myszy będą żuć odsłoniętą taśmę.
8. Wybierz tarczę koła jezdnego bez skorodowanego elementu magnetycznego.
9. Umieść koło na podstawie i obróć je, aby sprawdzić odstęp od ścian klatki i kraty.
10. Zakręć tarczą o określoną liczbę obrotów, aby upewnić się, że oprogramowanie do obsługi kół prawidłowo zlicza obroty.
11. Nie dopuść do zagubienia kawałków karmy w pościeli lub zamoczenia, przyklejając spód słoika z jedzeniem taśmą do podłogi klatki, z dala od koła jezdnego i butelki z wodą.
    UWAGA: Mokra karma zwiększa spożycie pokarmu w porównaniu do suchej karmy ³⁰.
12. Umieść 5 sztuk zupy w słoiku.
    UWAGA: Karma w fazie przedeksperymentalnej jest dostępna ad libitum i nie musi być ważona. Narażenie na koła jezdne w okresie aklimatyzacji może się nasilić ABA^21,31.
13. Umieść pełną butelkę z wodą w klatce i podawaj wodę ad libitum.
14. Powtarzaj, aż wszystkie klatki będą miały bezprzewodowo połączone koło jezdne, jedzenie i wodę.
15. Pojedynczo umieść myszy w odpowiednich klatkach.
16. W oprogramowaniu do zarządzania kołem przejdź do "plik" i kliknij "rozpocznij pobieranie".
17. Obserwuj aktualizację oprogramowania, aby upewnić się, że obroty kół są zliczane, a system działa prawidłowo.
18. Przyzwyczajaj myszy do eksperymentalnych warunków utrzymania przez łącznie 2 dni.
19. Oceń myszy w tej fazie, aby upewnić się, że są wystarczająco zdrowe, aby poradzić sobie z eksperymentem ABA.
20. Każdego dnia sprawdzaj klatki pod kątem zalania butelkami z wodą. Jeśli butelki zostały zalane, wymień starą klatkę na nową i powtórz niezbędne kroki, aby bez przeszkód przykleić kółka i żywność do klatki.
21. W dniu 2 sprawdź klatki pod kątem poziomu pokarmu. Jeśli jedzenia jest mało, uzupełnij je 2 kawałkami karmy. Zrób to, nie przeszkadzając myszom.
    UWAGA: Jeśli podczas fazy aklimatyzacji przedeksperymentalnej jakakolwiek mysz wykazuje hipofagię lub ma niedowagę, należy usunąć mysz z badania.

7. Eksperymentalna faza bazowa - Dzień 1

1. Wybierz "koniec", a następnie "rozpocznij akwizycję" w oprogramowaniu do zarządzania kołami.
2. Odmierz 9 g karmy w małej plastikowej zlewce na skali o czułości 0,00 g. Zapisz dokładną wagę.
3. Delikatnie wyjmij mysz i zważ ją w dużej plastikowej zlewce na wadze o czułości 0,0 g. Rekordowa waga.
   UWAGA: Bardzo ważne jest, aby ograniczyć stres myszy podczas obsługi, dlatego należy obchodzić się z nimi cierpliwie.
4. Wyrzuć całą żywność aklimatacyjną.
5. Wyszukaj w pościeli żywność, która mogła zostać wyjęta ze słoika i również ją wyrzuć.
6. Pozostaw butelkę z wodą na miejscu, ale upewnij się, że jest odpowiednio napełniona.
7. Zabrudzone koła jezdne czyścić 70% izopropanolem i ręcznikami papierowymi.
8. Jeśli konieczne było czyszczenie, po wyschnięciu izopropanolu umieść mysz z powrotem w klatce i umieść klatkę na stojaku.
9. Powtarzaj te kroki, aż każda mysz zostanie zważona, a 9 g jedzenia zostanie odmierzone i umieszczone w klatkach.

8. Eksperymentalna faza bazowa - dni 2 - 7

1. Wróć do obiektu dla zwierząt codziennie o tej samej porze. Nie różnij się w wykonywaniu pomiarów o więcej lub poniżej 10 minut.
2. Odmierz 9 g karmy w małej plastikowej zlewce na skali o czułości 0,00 g. Zapisz dokładną wagę.
3. Delikatnie wyjmij mysz i zważ ją w dużej plastikowej zlewce na wadze o czułości 0,0 g. Rekordowa waga.
4. Wyciągnij słoik z jedzeniem z klatki i wrzuć całe jedzenie do małej zlewki na skali 0,00 g.
   1. Jeśli kał i ściółka znajdują się w słoiku z jedzeniem, wybierz całą ściółkę i kał. Za pomocą małego sitka wetrzyj sproszkowaną żywność do zlewki wagowej. Usuń kał przed zrobieniem tego pęsetą (jeśli to konieczne).
      UWAGA: Pościel nie rozpadnie się na mniejsze kawałki, aby zmieścić się w sitku.
   2. Poszukaj resztek jedzenia w klatce i dodaj je do zlewki, która ma zostać zważona. Zapisz ilość pozostałego jedzenia.
      UWAGA: Jeśli konieczne jest przeszukanie ściółki i klatki, najlepiej zrobić to, gdy mysz znajduje się w zlewce wagowej lub klatce transferowej, aby zmniejszyć stres.
   3. Wyrzuć całe jedzenie.
5. Wytrzyj słoik do czysta i włóż z powrotem do klatki. W razie potrzeby wymień taśmę.
6. Umieść wcześniej odmierzone 9 g nowej żywności w słoiku.
7. Zabrudzone koła jezdne oczyść 70% izopropanolem, a następnie wysusz koła. Rób to po jednej klatce na raz i nie zmieniaj przypadkowo kół.
8. Zakończ i wznawiaj akwizycję w programie do uruchamiania kół co drugi dzień.
9. Powtarzaj te kroki aż do rozpoczęcia fazy ograniczenia.

9. Faza Eksperymentalnych Ograniczeń - Dzień 1

1. Zakończ i rozpocznij akwizycję w oprogramowaniu do zarządzania kołami.
2. Waż myszy, stare i nowe pokarmy zgodnie z protokołem podstawowym.
3. Nie czyść teraz kół. Może to rozpraszać myszy podczas ich ograniczonego okresu karmienia.
4. Pozwól na dostęp do nowego pokarmu, 9 g karmy, przez 6 godzin. Rejestruj czas podawania jedzenia.
   UWAGA: Czas podczas cyklu świetlnego, w którym żywność jest dostępna, będzie miał wpływ na rozwój ABA. Ponieważ myszy zwykle śpią podczas cyklu światła, zapewnienie dostępu do pożywienia w tym czasie zaostrza rozwój ABA, ponieważ myszy zwykle nie spożywają w tym czasie większości swojego dziennego pokarmu. I odwrotnie, myszy, które mają dostęp do pożywienia podczas ciemnego cyklu, rozwijają ABA wolniej³². Dostosowanie czasu dostępu do pożywienia spowoduje wydłużenie lub skrócenie czasu przeżycia (Rysunek 2). Aktywność antycypacyjna żywności (FAA) to nadpobudliwość, która występuje bezpośrednio przed podaniem jedzenia^32,33,34. FAA może wpływać na rozwój ABA, ponieważ wykazano, że odmowa dostępu do ruchu koła podczas FAA poprawia zachowanie ABA³².
   1. Usuń jedzenie dokładnie 6 godzin później dla każdej myszy i zmierz pozostałą ilość. Rejestruj czas wyjmowania żywności.
5. Wyczyść teraz koła, jeśli to konieczne, i spróbuj to zrobić, nie spóźniając się z wyciąganiem jedzenia z kolejnych klatek.
6. Zważ jedzenie i oblicz różnicę w jedzeniu, aby określić ilość jedzenia zjedzonego na mysz.
7. Oblicz wagę rezygnacji dla każdej myszy.
   UWAGA: Waga dropout to sytuacja, w której mysz musi zostać usunięta z eksperymentu, gdy osiągnie 75% końcowego pomiaru wyjściowej masy ciała. Na przykład, jeśli mysz waży 20 g na początku fazy restrykcji, gdy osiągnie 15 g, musi zostać usunięta z eksperymentu.
8. Przechowuj pod ręką kopię odważników do wyrzucania w pomieszczeniu dla zwierząt.
   UWAGA: Można próbować eksperymentów oceniających powrót do zdrowia po ABA; Pokarm jest dostarczany ad libitum lub koła są blokowane w celu zbadania procesu, w którym myszy wracają do zdrowej masy ciała³⁴.

10. Faza eksperymentalnych ograniczeń - dni od 2 do 14

1. Powtórz wszystkie kroki pomiaru w protokole Ograniczenia dnia 1. Nie wznawiaj ponownie pobierania koła.
2. Jeśli mysz osiągnie wagę upuszczenia (75% jej wyjściowej masy ciała), wyjmij koło i słoik z jedzeniem z klatki i zapewnij wystarczającą ilość jedzenia na dnie klatki, a następnie kontynuuj z innymi myszami. Gdy wszystkie klatki zostaną opuszczone, poddaj eutanazji wszystkie myszy, które osiągnęły upuszczoną wagę.
3. Pozostaw kółko włączone dla każdej myszy na czas trwania eksperymentu.
4. Codziennie sprawdzaj każdą mysz pod kątem obrażeń. W razie potrzeby obcinaj uszkodzone paznokcie u stóp, lecz rany itp. Poproś personel zajmujący się opieką nad zwierzętami o poradę, jeśli nie masz pewności, jak postępować z urazem.

11. Zakończenie badania

1. Jeśli badanie trwało 14 dni, zważ wszystkie myszy w dniu 15. Ograniczenie Waga dnia 1 jest uważana za masę wyjściową.
   UWAGA: Czas trwania badania może być modyfikowany w celu uwzględnienia testowanej hipotezy. Dłuższe okresy dostępu do żywności mogą być wykorzystane do wydłużenia czasu trwania badania.
2. W razie potrzeby poddaj myszy eutanazji.
3. Zanieś brudny sprzęt do odpowiednich pomieszczeń.
4. Zakończ pobieranie liczby kół w 15 dniu, aby uzyskać dane z 10 pełnych dni.
5. Wyłącz bezprzewodowe piasty kół.
6. Wyodrębnianie danych.
7. Analizowanie danych.

Wyniki

Neurotroficzny czynnik pochodzenia mózgowego (BDNF), białko, które przyczynia się do regulacji żywienia, jak również do utrzymania wagi, jest zmniejszone w surowicy pacjentów z AN³⁵. W eksperymencie tym oceniano wpływ zaplanowanego karmienia, dostępu do kółka biegowego lub obu tych czynników na ekspresję BDNF w hipokampie (HPC), brzusznym obszarze nakrywki (VTA), jądrze półleżącym (NAc) i przyśrodkowej korze przedczołowej (mPFC). Oceniono również ekspresję cząstecz...

Dyskusja

Eksperyment ABA może być modyfikowany przez eksperymentatorów w celu przetestowania różnych szczepów, wieku, leków i różnych innych zmiennych AN. Biorąc pod uwagę zmienność genetyczną, dostosowanie koła do biegania lub okresu dostępu do pożywienia zwiększyłoby lub zmniejszyłoby nasilenie objawów i wskaźnik rezygnacji. Może to służyć do wydłużenia lub skrócenia czasu trwania eksperymentu, w zależności od interesującego pytania eksperymentalnego.

Dokładny pomiar spożycia pokarmu jest krytyczną ...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Bezprzewodowe niskoprofilowe koła jezdne, koncentratory, oprogramowanie	Med Associates	ENV-047
Standard Teklad Rodent Chow	Envigo	8604
8-tygodniowe myszy	Jackson Laboratories	Balb/cJ	Szczep użyty w naszym badaniu - Może używać innych szczepów do oceny ABA
Scout Pro Scale 200 g	Ohaus	SPE202	Służy do ważenia myszy
Scout Pro Scale 400 g	Ohaus	SPE402	Służy do ważenia żywności