Izolacja pierwotnych ludzkich komórek liściastych z błon płodowych łożysk donoszonych

Tali Farine; Michael Parsons; Stephen Lye; Oksana Shynlova

doi:10.3791/57443

Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Izolacja pierwotnych ludzkich komórek liściastych z błon płodowych łożysk donoszonych

14.7K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/57443

⸱

30 kwietnia 2018

Tali Farine¹^,² , Michael Parsons² , Stephen Lye¹^,²^,³ , Oksana Shynlova¹^,²^,³

¹Department of Physiology, University of Toronto, ²Lunenfeld-Tanenbaum Research Institute, Sinai Health System, ³Department of Obstetrics and Gynecology, University of Toronto

W tym artykule

Podsumowanie

Ten protokół demonstruje metodę izolacji pierwotnych ludzkich komórek dziesiętnych pobranych z błon płodowych łożysk terminowych, które mogą być używane do różnych zastosowań (np. immunocytochemia, cytometria przepływowa, itp.), mając na celu zbadanie roli różnych populacji komórek w komplikacjach ciąży.

Streszczenie

Decidua, znana również jako endometrium w ciąży, jest niezwykle ważną tkanką rozrodczą. Komórki dziesiętne, składające się głównie z liściastych komórek zrębu i komórek odpornościowych, są odpowiedzialne za wydzielanie czynników hormonalnych i zapalnych, które mają kluczowe znaczenie dla pomyślnej implantacji blastocysty, rozwoju łożyska i odgrywają rolę w inicjacji porodu w terminie i wcześniaku. Wiele powikłań ciąży może wynikać z zaburzeń równowagi między różnymi populacjami komórek składającymi się na decidua. Zmiany w proporcji określonych typów komórek dziesiętnych mogą zakłócić te kluczowe procesy i zwiększyć ryzyko wystąpienia poważnych powikłań ciąży, takich jak niepowodzenie implantacji zarodka, wewnątrzmaciczne ograniczenie wzrostu, stan przedrzucawkowy i przedwczesny poród. Przedstawiony tutaj protokół demonstruje efektywną kosztowo i czasowo metodę izolacji pierwotnych ludzkich komórek dziesiętnych pobranych z błon płodowych łożysk donoszonych. Łącząc trawienie enzymatyczne i delikatne mechaniczne rozerwanie tkanki dziesiętnej, uzyskano wysoką wydajność komórek dziesiętnych praktycznie bez zanieczyszczenia kosmówki. Co ważne, scharakteryzowano izolowane komórki dziesiętne (komórki zrębu (55-60%), leukocyty (35%), komórki nabłonkowe (1%) lub trofoblast (0,01%) i utrzymano wysoką żywotność (80%), co potwierdzono testem wielobarwnej obrazowania metodą cytometrii przepływowej. Protokół ten jest specyficzny dla decidua parietalis i może być dostosowany do łożysk w pierwszym i drugim trymestrze ciąży. Po wyizolowaniu komórki dziesiętne mogą być wykorzystywane do wielu zastosowań eksperymentalnych mających na celu zrozumienie roli różnych subpopulacji komórek dziesiętnych w powikłaniach ciąży.

Wprowadzenie

Endometrium, jedna z najbardziej aktywnych tkanek dorosłej kobiety, ulega dramatycznej przebudowie każdego cyklu menstruacyjnego w odpowiedzi na stymulację przez hormony jajnikowe, estrogen (E2) i progesteron (P4). Decidua, znana również jako endometrium w ciąży, jest krytycznie ważną tkanką rozrodczą, która powstaje pod koniec fazy poowulacyjnej w wyniku różnicowania napędzanego przez P4 po fazie proliferacyjnej z dominacją E2. Komórki dziesiętne są odpowiedzialne za wydzielanie czynników hormonalnych za pomyślne zagnieżdżenie się blastocysty oraz za rozwój interfejsu maciczno-łożyskowego w celu utrzymania matczynej tolerancji na alloprzeszczep płodu.