Artykuł metodologiczny

Szybka, bezpieczna i prosta ręczna ekstrakcja kwasów nukleinowych przy łóżku pacjenta w celu wykrycia wirusa w próbkach krwi pełnej

DOI:

10.3791/58001

⸱

30 czerwca 2018

 ,  , 
1Virus Research & Development Laboratory, Statens Serum Institut, 2Infectious Disease Research Unit, University of Southern Denmark

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tutaj prezentujemy protokół szybkiej ekstrakcji kwasu nukleinowego wirusa z inaktywowanej wirusem krwi pełnej. Ekstrakcja odbywa się bezpośrednio w probówkach do pobierania krwi i nie wymaga żadnego sprzętu ani energii elektrycznej. Metoda nie jest zależna od zaplecza laboratoryjnego i może być stosowana wszędzie (np. w szpitalach polowych).

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Szybka diagnoza infekcji jest niezbędna do opanowania epidemii, ograniczenia ryzyka i opieki nad pacjentem. Wcześniej pokazaliśmy metodę szybkiej inaktywacji wirusa Ebola przy łóżku pacjenta podczas pobierania próbek krwi w celu przeprowadzenia bezpiecznych testów kwasów nukleinowych (NA) poprzez dodanie komercyjnego buforu do lizy/wiązania bezpośrednio do probówek próżniowych do pobierania krwi. Korzystając z tego podejścia do inaktywacji przyłóżkowej, opracowaliśmy bezpieczną, szybką i uproszczoną metodę ekstrakcji NA przy łóżku pacjenta w celu późniejszego wykrywania wirusa w krwi pełnej inaktywowanej buforem. Ekstrakcja NA jest wykonywana bezpośrednio w probówkach do pobierania krwi i nie wymaga żadnego sprzętu ani prądu.

Po zebraniu krwi do buforu do lizy/wiązania, zawartość jest mieszana przez ręczne obracanie probówki, a mieszanina jest inkubowana przez 20 minut w temperaturze pokojowej. Cząsteczki szkła magnetycznego (MGP) są dodawane do probówki, a zawartość miesza się, ręcznie obracając probówkę zbiorczą. MGP są następnie pobierane z boku probówki do pobierania krwi za pomocą uchwytu magnetycznego lub magnesu i gumki. MGP są trzykrotnie przemywane, a po dodaniu buforu elucyjnego bezpośrednio do probówki zbiorczej, NA są gotowe do testów NA, takich jak qPCR lub amplifikacja w pętli izotermicznej (LAMP), bez usuwania MGP z reakcji. Metoda ekstrakcji NA nie jest zależna od żadnego zaplecza laboratoryjnego i może być łatwo stosowana w dowolnym miejscu (np. w szpitalach polowych i izolatkach szpitalnych). Gdy ta metoda ekstrakcji NA jest połączona z LAMP i przenośnym instrumentem, diagnozę można uzyskać w ciągu 40 minut od pobrania krwi.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W sytuacjach wybuchu epidemii wirusa, gdy pacjenci są zamknięci w szpitalnych izolatkach lub gdy potrzebna jest szybka diagnoza, bezpieczna, prosta i dokładna diagnoza molekularna w miejscu opieki nad pacjentem jest niezbędna do opieki nad pacjentem i ograniczenia ryzyka. Dwa niedawne wybuchy wirusa, wirusa Ebola (EBOV) w Afryce Zachodniej (2013) i wirusa Zika w Ameryce Południowej (2015), zwiększyły zainteresowanie ulepszonymi molekularnymi testami diagnostycznymi w miejscu opieki nad pacjentem, takimi jak amplifikacja izotermiczna za pośrednictwem pętli odwrotnej transkrypcji (RT-LAMP)1,2 i amplifikacja polimerazy rekombinazy (RPA)3,4. Zarówno RT-LAMP, jak i RPA są szybkimi, czułymi i specyficznymi testami molekularnymi, które można wykonywać na uproszczonych preparatach próbek. W przypadku wirusa Zika RT-LAMP połączono z testem przepływu bocznego (LFA), który może wykryć wirusa Zika w nieoczyszczonych próbkach krwi pełnej w ciągu 30 min1; jednak w przypadku EBOV, który jest klasyfikowany jako patogen grupy ryzyka 4 i jest wysoce zaraźliwy, próbki muszą być traktowane w warunkach 4 poziomu bezpieczeństwa biologicznego (BSL-4) i inaktywowane, zanim będzie można przeprowadzić jakiekolwiek bezpieczne procedury diagnostyczne.

Uproszczone metody inaktywacji dla EBOV, takie jak dodawanie do lizy do próbki2,3,4,5, były używane podczas wybuchu epidemii; jednak metody te wymagają co najmniej obsługi w warunkach BSL-4 za pomocą sprzętu laboratoryjnego, takiego jak komory bezpieczeństwa biologicznego BSL-3, wirówki, bloki grzewcze i pipety. Sprzęt ten zwykle nie jest obecny na oddziałach izolacyjnych ani w szpitalach polowych. Aby sprostać temu wyzwaniu, podjęto próby przeprowadzenia diagnostyki w suitcases3, a także opracowano kilka przenośnych urządzeń i maszyn [np. przenośne urządzenie do ekstrakcji kwasów nukleinowych (NA)]6. Jednak próbki z dodatnim wynikiem EBOV nadal muszą zostać dezaktywowane, zanim będzie można użyć tych urządzeń.

Wcześniej informowaliśmy o metodzie szybkiej inaktywacji wirusa przy łóżku pacjenta dla klasy EBOV7, wirusa krowianki i wirusa ospy krowiej8 poprzez dodanie komercyjnego buforu do lizy/wiązania do zwykłych probówek do pobierania krwi próżniowej, co pozwala na bezpośredni transfer krwi od pacjenta do buforu inaktywacyjnego7. Ta bezpośrednia i natychmiastowa inaktywacja w systemie zamkniętym eliminuje potrzebę obchodzenia się z próbkami przy użyciu dowolnych rygorystycznych zabezpieczeń, takich jak warunki BSL-47, a próbki mogą być obsługiwane w normalnych warunkach BSL-2. Ta metoda inaktywacji jest kompatybilna z kilkoma systemami ekstrakcji NA, takimi jak roboty i zestawy do oczyszczania rąk7; Metody te wymagają jednak sprzętu laboratoryjnego, takiego jak roboty, wirówki i energia elektryczna, które nie zawsze są obecne w warunkach polowych lub na szpitalnych oddziałach izolacyjnych.

W tym raporcie opisujemy bezpieczną, szybką i uproszczoną metodę ręcznej ekstrakcji NA do późniejszego molekularnego wykrywania wirusa w lizie/wiązaniu buforu inaktywowanego przez pełną krew. Metoda ekstrakcji NA nie wymaga żadnego sprzętu poza magnesem/uchwytem magnetycznym. Do ekstrakcji NA nie są potrzebne wirówki, bloki grzewcze ani energia elektryczna. W związku z tym metoda ta nie jest zależna od zaplecza laboratoryjnego i może być z łatwością stosowana w dowolnym miejscu (np. w szpitalach polowych, na szpitalnych oddziałach izolacyjnych lub w warunkach o niskich zasobach). Metoda ekstrakcji NA jest szybka i prosta i może być stosowana bezpośrednio w dowolnych dalszych testach NA, takich jak qPCR, RT-qPCR, LAMP lub RT-LAMP. Gdy ta metoda ekstrakcji NA jest połączona z LAMP i przenośnym przyrządem izotermicznym zasilanym bateryjnie, diagnozę przy łóżku pacjenta można uzyskać w ciągu 40 minut od pobrania krwi.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Komitet ds. Etyki Badań Biomedycznych, Region Stołeczny wyraził świadomą zgodę, a wszystkie opisane tutaj metody zostały wyłączone z oceny przez system komisji etyki, zgodnie z duńską ustawą o projektach rozwoju testów.

1. Przygotowanie probówek próżniowych do pobierania krwi do inaktywacji wirusa i szybkiej ekstrakcji NA

UWAGA: Bufor używany do tego protokołu zawiera tiocyjanian guanidyny (GITC) i niejonowy środek powierzchniowo czynny, które są drażniące. Podejmij odpowiednie laboratoryjne środki bezpieczeństwa, używaj kaptura przepływowego i noś rękawice podczas obchodzenia się z nim. Unikać kontaktu ze skórą i oczami. W przypadku rozlania buforu, zanieczyszczonej powierzchni nigdy nie wolno dezynfekować bezpośrednio chloraminą lub podchlorynem sodu (aktywnymi składnikami "wybielacza"), ponieważ mieszanina ta może prowadzić do powstania toksycznego cyjanku. Najpierw wytrzyj rozlany bufor tkanką chłonną. Następnie oczyść powierzchnię 70% etanolem, a następnie wodą, a na koniec użyj chloraminy lub podchlorynu sodu.

  1. Aby przygotować probówki próżniowe do pobierania krwi, wstrzyknąć 1,6 ml specyficznego komercyjnego buforu do lizy do probówki próżniowej EDTA o pojemności 4 ml, nakłuwając wieczko probówki za pomocą igły 25 G x 1 i strzykawki 3 ml.
    UWAGA: Nie zdejmuj pokrywy rury próżniowej. Próżnia musi być utrzymywana.
  2. Lampy próżniowe zawierające bufor należy przechowywać w temperaturze pokojowej do czasu użycia.
    UWAGA: Probówki są stabilne przez co najmniej 1 rok po ich przygotowaniu.

2. Przygotowanie do ekstrakcji NA

  1. Aby przygotować do ekstrakcji NA, umieść dwie probówki o pojemności 1.8 ml, dwie 4.5 ml i jedną 3.6 ml w stojaku.
  2. Przez pipetowanie dodać 960 μl cząstek szkła magnetycznego (MGP) do czystej probówki o pojemności 1,8 ml i oznaczyć ją MGP. Przed pipetowaniem zawiesinę MGP należy całkowicie zawiesić.
    UWAGA: MGP mają tendencję do szybkiego gromadzenia się na dnie tuby.
  3. Dodaj, pipetując, 4 ml buforu do przemywania I do czystej probówki o pojemności 4,5 ml i oznacz ją jako WB-1,
    UWAGA: Bufor do płukania I zawiera chlorek guanidyny, który działa drażniąco. Podejmij odpowiednie laboratoryjne środki bezpieczeństwa, używaj kaptura przepływowego i noś rękawice podczas obchodzenia się z nim. Unikać kontaktu ze skórą i oczami.
  4. Dodać pipetując 1,5 ml buforu do przemywania II do czystej probówki o pojemności 3,6 ml i oznaczyć ją jako WB-2.
  5. Dodać, pipetując, 3 ml buforu do przemywania III do czystej probówki o pojemności 4,5 ml i oznaczyć ją jako WB-3.
  6. Dodać pipetując 100 μl buforu elucyjnego do czystej probówki o pojemności 1,8 ml i oznaczyć ją jako EB.
  7. Przechowywać poddane w temperaturze pokojowej do czasu użycia.
    UWAGA: Probówki są stabilne przez co najmniej 1 miesiąc po ich przygotowaniu.

3. Pobieranie krwi od pacjentów z oznakami i objawami infekcji wirusowej

UWAGA: Podejmij odpowiednie laboratoryjne środki bezpieczeństwa podczas pobierania pełnej krwi od pacjenta. Nosić rękawiczki i okulary. Jeśli pacjent przebywa w izolacji, należy postępować zgodnie z procedurami 4 poziomu bezpieczeństwa biologicznego.

  1. Aby pobrać dożylnie krew pełną od pacjenta, należy użyć igły motylkowej z rurką przedłużającą o małym otworze i rurki próżniowej do pobierania krwi zawierającej bufor do lizy/wiązania. Oprzyj rękę pacjenta w pozycji skierowanej w dół i umieść rurkę pobierającą niżej niż igła motylkowa. Włóż igłę motylkową do żyły pacjenta i przymocuj rurkę próżniową do pobierania krwi do przedłużki o małym otworze.
    UWAGA: Zapobiegnie to przepływowi zwrotnemu.
  2. Po pobraniu krwi wymieszaj zawartość probówki, obracając probówkę 5 - 10 razy.
    UWAGA: Ze względu na pozostałą próżnię w probówce do pobierania krwi zawierającej 1,6 ml buforu do lizy/wiązania, objętość pobranej próbki automatycznie wyniesie 1,6 ml.
  3. Zdezynfekuj zewnętrzną część rurki za pomocą 70% etanolu.
  4. Inkubować probówki przez 20 minut w temperaturze pokojowej.
    UWAGA: W tym miejscu można wstrzymać protokół, a pełne probówki do pobierania krwi można przechowywać w temperaturze -20 °C, 5 °C, 25 °C lub 37 °C przez co najmniej 1 miesiąc7.
  5. Przejdź bezpośrednio do uproszczonej metody ekstrakcji NA.

4. Uproszczona ekstrakcja NA krwi pełnej

  1. Aby oczyścić NA z krwi zebranej inaktywowanej buforem do lizy/wiązania, wymieszaj zawartość probówki, obracając rurkę próżniową ręcznie 5 - 10 razy.
  2. Ostrożnie zdejmij pokrywę rurki i opróżnij pokrywę.
  3. Wlać przygotowaną porcję MGP (1 ml) bezpośrednio do probówki do pobierania krwi.
  4. Umieścić nową pokrywkę z nieużywanej probówki do pobierania krwi na probówce zawierającej próbkę.
  5. Umieść palec na wieczku, aby upewnić się, że probówka jest szczelnie zamknięta i wymieszaj zawartość probówki, obracając probówkę do pobierania krwi ręcznie 5 - 10 razy.
  6. Umieść probówkę w uchwycie magnetycznym i przytrzymaj palec na pokrywie, aby upewnić się, że rurka jest szczelnie zamknięta.
  7. Odwróć kilka razy ręcznie uchwyt magnetyczny z rurką, aby upewnić się, że wszystkie MGP są zebrane z boku rurki z magnesem.
    UWAGA: Uchwyt magnetyczny można zastąpić wydłużonym magnesem i gumową opaską.
  8. Zdjąć pokrywkę probówki i wyrzucić zawartość probówki za pomocą jednorazowej pipety lub po prostu wsypując zawartość do probówki zbiorczej o pojemności 50 ml.
    UWAGA: Unikaj aerozoli z probówki zbiorczej o pojemności 50 ml, zamykając probówkę pokrywką.
  9. Wlać przygotowaną porcję WB-1 (4 ml) bezpośrednio do probówki do pobierania krwi.
  10. Umieść pokrywkę na tubie i połóż palec na pokrywce, aby upewnić się, że rurka jest szczelnie zamknięta.
  11. Wyjmij rurkę z uchwytu magnetycznego, trzymając pokrywę mocno dokręconą palcem.
    UWAGA: Jeśli używasz magnesu i gumki, po prostu zdejmij gumkę i magnes z tuby.
  12. Ponownie zawiesić MGP, obracając probówkę do pobierania krwi ręcznie 5 - 10 razy.
  13. Powtórz kroki 4.6 - 4.8.
  14. Wlać przygotowaną porcję WB-2 (1,5 ml) bezpośrednio do probówki do pobierania krwi.
  15. Umieść pokrywkę na tubie i wyjmij probówkę z uchwytu magnetycznego.
    UWAGA: Jeśli używasz magnesu i gumki, po prostu zdejmij gumkę i magnes z tuby.
  16. Umieść palec na pokrywie, aby upewnić się, że rurka jest szczelnie zamknięta.
  17. Ponownie zawieś MGP, ręcznie obracając probówkę do pobierania krwi na kilka sekund.
  18. Powtórz kroki 4.6 - 4.8.
  19. Wlać przygotowaną porcję WB-3 (3 ml) bezpośrednio do probówki do pobierania krwi.
  20. Umieść pokrywkę na tubie i wyjmij probówkę z uchwytu magnetycznego.
    UWAGA: Jeśli używasz magnesu i gumki, po prostu zdejmij gumkę i magnes z tuby.
  21. Umieść palec na pokrywie, aby upewnić się, że rurka jest szczelnie zamknięta.
  22. Ponownie zawiesić MGP, obracając probówkę do pobierania krwi ręcznie 5 - 10 razy.
  23. Powtórz kroki 4.6 - 4.8.
  24. Wlać przygotowaną porcję EB (100 μl) bezpośrednio do probówki do pobierania krwi.
  25. Umieść pokrywkę na tubie i wyjmij probówkę z uchwytu magnetycznego.
    UWAGA: Jeśli używasz magnesu i gumki, po prostu zdejmij gumkę i magnes z tuby.
  26. Zawiesić MGP w EB, stukając palcem w probówkę do pobierania krwi 5 - 10 razy.
    UWAGA: W tym miejscu można wstrzymać protokół, a probówki można przechowywać w temperaturze -20 °C.
  27. Przenieść jedną kroplę (5 - 8 μl) zawieszonych MGP do dalszej mieszaniny reakcyjnej amplifikacji NA za pomocą jednorazowej pipety o pojemności 1,5 ml (można zastosować dowolny dalszy diagnostyczny test amplifikacji NA, taki jak test LAMP/RT-LAMP lub qPCR/RT-qPCR).
    UWAGA: Na będą trzymać się MGP, więc upewnij się, że używasz MGP w dalszej reakcji amplifikacji NA. Przed użyciem wymieszać zawiesinę MGP. Po wymieszaniu MGP zbiorą się na dnie probówki.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Przedstawiony tutaj protokół jest prosty i skuteczny i może być szeroko stosowany do każdego testu molekularnego, który ma być przeprowadzony na zakaźnych próbkach krwi pełnej inaktywowanych buforem do lizy/wiązania. Przebieg procesu inaktywacji krwi i ekstrakcji NA jest pokazany w Rysunek 1, w tym przygotowanie probówek próżniowych do pobierania krwi7 (Rysunek 1A), pobieranie krwi7...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W tym raporcie opisujemy bezpieczną, szybką i prostą metodę ręcznej ekstrakcji NA przy łóżku pacjenta do dalszego molekularnego wykrywania wirusa w pełnej krwi inaktywowanej przez lizę/bufor wiążący. Opisana metoda ekstrakcji NA została opracowana do wykonywania bezpośrednio na próbkach krwi pełnej pobranych w probówkach próżniowych do pobierania krwi zawierających bufor do lizy/wiązania (tabela materiałów)7. Ten specyficzny bufor dezaktywuje EBOV7 i jest k...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dziękujemy Susanne Lopes Rasmussen i Solvej Kolbjørn Jensen za ich pomoc techniczną i obsługę próbek klinicznych. Projekt ten jest częścią konsorcjum EbolaMoDRAD, które otrzymało dofinansowanie ze Wspólnego Przedsięwzięcia na rzecz Inicjatywy 2 w zakresie Innowacyjnej Medycyny na podstawie umowy o udzielenie dotacji nr 115843. Wspólne przedsięwzięcie otrzymuje wsparcie z programu Unii Europejskiej w zakresie badań naukowych i innowacji "Horyzont 2020" oraz EFPIA.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Probówki Vacutainer K2 EDTA (4 ml)Becton Dickinson368861
Plus Pobieranie krwiBecton Dickinson362725
23G x 1 igłaBecton Dickinson300800
LUER LOK (3 mL)Igła Becton Dickinson309658
Butterfly z rurką przedłużającą o małym otworzeJø rgen Kruuse A/S121714
1% VirkonNomeco A/S849265
MagNA Pure LC DNA Isolation Kit I - Bufor do lizy/wiązania - WkładRoche Diagnostics A/S03246752001
Zestaw do izolacji całkowitych kwasów nukleinowych MagNA Pure LCDiagnostics A/S3038505001
Nunc™ Probówki kriogeniczne do biobankowania i hodowli komórkowych (1,8 ml)Thermo Fisher Scientific375418
Nunc™ Probówki kriogeniczne do biobankowania i hodowli komórkowych (3,6 ml)Thermo Fisher Scientific379189
Nunc™ Biobankowanie i hodowle komórkowe Probówki kriogeniczne (4,5 ml)Thermo Fisher Scientific379146
DynaMag™-5 MagnetThermo Fisher Scientific12303D
Pipeta transferowa (3,5 mL)Sarstedt86.1171.010
Thermo Scientific™ Samco&handel; Pipety transferowe z cienką końcówką (1,5 ml)Thermo Fisher Scientific231
Thermo Scientific™ Nunc&handel; 50 ml stożkowe sterylne probówki wirówkowe z polipropylenuThermo Fisher Scientific339652
Strzykawka Roche

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lee, D., Shin, Y., Chung, S., Hwang, K. S., Yoon, D. S., Lee, J. H. Simple and Highly Sensitive Molecular Diagnosis of Zika Virus by Lateral Flow Assays. Analytical Chemistry. 88, 12272-12278 (2016).
  2. Benzine, J. W., Brown, K. M., et al. Molecular Diagnostic Field Test for Point-of-Care Detection of Ebola Virus Directly from Blood. Journal of Infectious Diseases. 214 (Suppl 3), S234-S242 (2016).
  3. Faye, O., Faye, O., et al. Development and deployment of a rapid recombinase polymerase amplification Ebola virus detection assay in Guinea in 2015. Euro Surveillance. 20 (44), 10-18 (2015).
  4. Yang, M., Ke, Y., et al. Development and Evaluation of a Rapid and Sensitive EBOV-RPA Test for Rapid Diagnosis of Ebola Virus Disease. Scientific Reports. 6, (2016).
  5. Smither, S. J., Weller, S. A., et al. Buffer AVL alone does not inactivate Ebola virus in a representative clinical sample type. Journal of Clinical Microbiology. 53 (10), 3148-3154 (2015).
  6. Byrnes, S., Fan, A., et al. A Portable, Pressure Driven, Room Temperature Nucleic Acid Extraction and Storage System for Point of Care Molecular Diagnostics. Analytical Methods. 5 (13), 3177-3184 (2013).
  7. Rosenstierne, M. W., Karlberg, H., et al. Rapid bedside inactivation of Ebola virus for safe nucleic acid tests. Journal of Clinical Microbiology. 54 (10), 2521-2529 (2016).
  8. Vinner, L., Fomsgaard, A. Inactivation of orthopoxvirus for diagnostic PCR analysis. Journal of Virological Methods. 146, 401-404 (2007).
  9. Schmitz, H., Köhler, B., et al. Monitoring of clinical and laboratory data in two cases of imported Lassa fever. Microbes and Infection. 4 (1), 43-50 (2002).
  10. De La Vega, M. A., Caleo, G., et al. Ebola viral load at diagnosis associates with patient outcome and outbreak evolution. Journal of Clinical Investigation. 125 (12), 4421-4428 (2015).
  11. Hasanoglu, I., Guner, R., et al. Dynamics of viral load in Crimean Congo hemorrhagic fever. Journal of Medical Virology. 90 (4), 639-643 (2017).
  12. Biava, M., Colavita, F., et al. Evaluation of a rapid and sensitive RT-qPCR assay for the detection of Ebola Virus. Journal of Virological Methods. 252, 70-74 (2018).
  13. Fernández-Carballo, B. L., McBeth, C., et al. Continuous-flow, microfluidic, qRT-PCR system for RNA virus detection. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 410 (1), 33-43 (2017).
  14. Weller, S. A., Bailey, D., et al. Evaluation of the Biofire FilmArray Biothreat E-test (v2.5) for rapid identification of Ebola virus disease in heat-treated blood samples obtained in Sierra Leone and United Kingdom. Journal of Clinical Microbiology. 54 (1), 114-119 (2015).
  15. Semper, A. E., Broadhurst, M. J., et al. Performance of the GeneXpert Ebola Assay for Diagnosis of Ebola Virus Disease in Sierra Leone: A Field Evaluation Study. PLoS Medicine. 13 (3), e1001980(2016).
  16. Biocartis. Instructions for Use: Idylla TM Ebola Virus Triage Test. , https://www.fda.gov/downloads/MedicalDevices/Safety/EmergencySituations/UCM503944.pdf (2016).
  17. MPLC. Total Nucleic Acid Isolation Kit. Safety data sheet version 1.7. , https://pim-eservices.roche.com/DownloadDocument/SDS/DE/en/03038505001 (2015).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Magnetyczne cz stki szklaneinaktywacja wirusadiagnostyka w punkcie opiekiprob wki do pobierania krwibufor lizuj cy i wi cyr czna metoda przy kowadetekcja qPCRamplifikacja LAMP

Powiązane artykuły